基于TCPA数据库的结直肠癌预后相关蛋白预后模型的建立与应用

目的 利用TCPA数据库建立预测结直肠癌预后的蛋白预后模型,分析蛋白预后模型与结直肠癌各临床病理特征之间的关系.方法 通过R语言软件筛选出TCPA数据库中结直肠癌样本及正常样本中差异表达的蛋白质,进一步利用COX比例风险回归模型筛选和建立多蛋白预后模型,计算预后评分.根据预后评分的中位数将患者分为高风险组和低风险组,利用Kaplan-Meier生存曲线分析高风险组及低风险组生存差异.将临床病理因素和预后评分因素纳入COX回归模型分析结直肠癌患者的生存影响因素.根据临床病理因素与结直肠癌相关蛋白预后模型预后评分的相关性,验证多蛋白模型对结直肠癌患者中的预后价值.结果 共筛选出7个差异蛋白(BIM,SRC,BID,CYCLIND,SRC_pY527,IGFBP2,INPP4B)建立结直肠癌相关蛋白预后模型.Kaplan-Meier生存分析证实,在结直肠癌患者中,预后评分低风险的患者总体生存率明显升高,差异有统计学意义(P<0.001).COX回归分析显示,结直肠癌预后相关蛋白预后模型是结直肠癌患者预后的独立影响因素(P<0.01).结论 结直肠癌预后相关蛋白预后模型可用于预测结直肠癌患者的预后,有利于进一步指导临床治疗.     

结直肠癌中DPD与LC3、P62表达的相关性及其临床意义

背景与目的：结直肠癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一,应用5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）治疗结直肠癌常因耐药或不良反应影响其疗效,二氢嘧啶脱氢酶（dihydropyrimidine dehydrogenase,DPD）是5-FU代谢的关键酶,其表达量或降解率可能成为影响5-FU疗效的因素,自噬是细胞内蛋白质降解的重要途径。检测结直肠癌中自噬关键因子微管相关蛋白轻链3（light chain 3,LC3）、P62和DPD的表达,探讨其相关性及临床意义,为逆转5-FU耐药提供新思路。方法：采用免疫组织化学EnVision法检测2013—2014年滨州医学院附属医院病理科存档的157例结直肠癌石蜡包埋组织,采用蛋白质印迹法（Western blot）及实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）检测2020年滨州医学院附属医院病理科接收的44例结直肠癌新鲜组织中LC3、P62和DPD的表达,分析其相关性及其临床意义。结果：结直肠癌组织中LC3、P62和DPD的mRNA及蛋白表达量均高于正常黏膜组织（P<0.05）。P62与DPD的表达呈正相关,LC3与P62、DPD的表达均呈负相关（P<0.05）。P62^–/LC3^–组中DPD蛋白表达量明显高于其他3组,而P62^–/LC3⁺组中DPD蛋白表达量则低于其他3组（P<0.05）。P62⁺/LC3^–组与P62⁺/LC3⁺组中DPD蛋白表达量虽不同,但差异无统计学意义（P>0.05）。结直肠癌中P62蛋白表达与T分期及淋巴结转移呈正相关;LC3蛋白表达与肿瘤直径及T分期呈正相关;DPD蛋白表达则与组织学类型密切相关（P<0.05）。LC3、P62、DPD及淋巴结转移与结直肠癌患者预后密切相关,四者均是结直肠癌患者预后的独立危险因素。结论：LC3和P62可影响DPD的表达,自噬-溶酶体途径可能是DPD降解的重要途径,其有可能通过DPD降解进而影响结直肠癌对5-FU的耐药。     

结直肠癌中LC3与不同表型肿瘤相关巨噬细胞的相关性及其临床意义

背景与目的：肿瘤免疫逃逸成为免疫治疗的难点，而结直肠癌中过度自噬可引起肿瘤微环境内抗原物质的增加，进而诱导抗肿瘤免疫。通过检测自噬相关因子LC3、不同表型肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophage，TAM）及其分泌产物在结直肠癌中的表达，探讨其相关性及临床意义。方法：采用免疫组织化学EnVision法检测滨州医学院附属医院病理科及滨州市第二人民医院病理科2013年1月—2014年12月存档的结直肠癌样本中LC3、CD16、CD163、IL-1、IL-10、TNF-α、TGF-β的表达，计数CD4 ⁺ 、CD8 ⁺ 、CD20 ⁺ 淋巴细胞及CD68 ⁺ 、CD16 ⁺ 、CD163 ⁺ 巨噬细胞，并分析其与临床病理学特征及预后的相关性。结果：自噬相关因子LC3、CD16、CD163在结直肠癌组织中的表达均高于癌旁正常黏膜组织（P<0.05）。LC3与M1型TAM及其在巨噬细胞中的占比均呈正相关，而与M2型TAM及其在巨噬细胞中的占比均呈负相关（P<0.05）。LC3、M1型TAM与IL-1、TNF-α的表达及CD4 ⁺ 、CD8 ⁺ 、CD20 ⁺ 淋巴细胞的浸润量呈正相关；而M2型TAM与IL-10、TGF-β的表达呈正相关，而与CD4 ⁺ 、CD8 ⁺ 、CD20 ⁺ 淋巴细胞的浸润量呈负相关（P<0.05）。LC3、CD16、CD163与肿瘤直径、浸润深度及淋巴结转移密切相关（P<0.05）。Kaplan-Meier及COX回归模型分析显示，LC3、CD16、CD163及淋巴结转移与结直肠癌患者预后密切相关，是结直肠癌预后的独立危险因素。结论：结直肠癌中LC3的表达增加与M1型TAM极化、肿瘤进展密切相关，提示患者预后不良。结直肠癌中自噬水平的增高可诱导巨噬细胞募集并向M1型TAM极化，进而诱导免疫细胞聚集，因此调控自噬可成为诱导结直肠癌中TAM极化、增强抗肿瘤免疫的新思路。     

1H定量核磁共振波谱法测定新型P2Y12受体抑制剂TSD-1中非氘TSD-1-ND的含量

目的 建立¹H定量核磁共振波谱(¹H quantitative nuclear magnetic resonance, ¹H qNMR)法测定TSD-1原料药中非氘TSD-1-ND的含量。方法 采用核磁共振波谱法,使用BRUKER AV-400型核磁共振仪,以氘代氯仿为溶剂,弛豫延迟时间为10 s,扫描次数32次。结果 以化学位移δ分别为3.75和3.03的TSD-1-ND和丁二酸酐的氢质子峰作为定量峰,其峰面积比与其质量比的线性回归方程为Y=3.493 1X-0.059 7,相关系数(r)为0.998 1,3批TSD-1-ND测得含量分别为0.169 7%、0.180 6%和0.167 7%。结论 该法操作简单,测定结果准确,可用于TSD-1中非氘TSD-1-ND的含量测定。