干预自噬影响DPD的表达促进5-FU抗结直肠癌疗效的实验研究

背景与目的：结直肠癌作为常见的消化系统恶性肿瘤之一,其化疗与耐药一直以来备受关注,5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-FU）是结直肠癌的一线化疗药物,其疗效常因耐药或不良反应而受到影响。二氢嘧啶脱氢酶（dihydropyrimidine dehydrogenase,DPD）是5-FU代谢的关键限速酶,其表达或降解可能成为影响5-FU疗效的因素。自噬是细胞内蛋白质代谢的重要途径,其在化疗诱导的细胞死亡或增殖抑制中的作用仍存在争议。本研究旨在探讨自噬在结直肠癌化疗过程中的作用以及干预自噬影响5-FU耐药的机制。方法：体外细胞培养人结肠癌HCT-8、COLO205、LOVO和SW480细胞系,观察不同细胞系中DPD的表达对5-FU敏感性的影响,通过药物敏感性实验筛选出5-FU敏感细胞,检测5-FU敏感细胞株及其相对应的耐药细胞株中DPD的表达、自噬水平及自噬关键因子微管相关蛋白轻链3（light chain 3,LC3）、P62的表达,并通过诱导/抑制细胞自噬,观察调控自噬状态对DPD的表达变化以及肿瘤细胞生物学行为和化疗抵抗能力的影响,通过UbiBrowser数据库筛选及免疫共沉淀实验（co-inmunoprecipitation,Co-IP）实验验证DPD降解过程中的E3连接酶,探讨自噬降解DPD逆转5-FU耐药的分子机制。结果：DPD低表达的细胞系对5-FU的敏感性更强,其中COLO205细胞系在4种细胞中DPD表达量最高,并对5-FU的耐药性最强,而HCT-8细胞DPD表达最低并对5-FU最为敏感。与HCT-8细胞相比,HCT-8/FU耐药细胞表达较高水平的DPD,以及较低的基础自噬水平;雷帕霉素（rapamycin,RAPA）介导的自噬激活增强了细胞的自噬水平,降低了DPD表达,同时降低了细胞增殖、侵袭和5-FU耐药性;3甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）及羟氯喹（hydroxychloroquine,HCQ）介导的自噬抑制减弱了细胞的自噬水平,增加了DPD表达,增强了5-FU耐药性。5-FU与自噬激活剂联合应用对细胞的抑效果要远远强于单用5-FU及与自噬抑制剂联合应用的效果;DPD的降解需要完整的自噬流的参与,其中自噬溶酶体的形成是DPD降解的关键步骤之一,而单一的自噬体无法对DPD进行降解。E3连接酶NEDD4在HCT-8/5-FU细胞中与DPD和P62蛋白免疫共沉淀,在DPD的自噬降解中发挥作用。结论：自噬参与DPD降解影响结直肠癌细胞对化疗药物的敏感性,激活自噬可促进DPD降解和抑制5-FU的分解代谢,可能成为逆转结直肠癌5-FU耐药的新途径。     

食管鳞状细胞癌癌变过程中HPV16/18 E6蛋白与PIK3CA、PIK3CB突变的相关性及其临床意义

目的 探讨HPV感染与PIK3CA、PIK3CB突变在食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carcinoma, ESCC)癌变过程中的表达差异及其临床意义。方法 采用免疫组化EnVision法检测32例食管正常黏膜、35例食管低级别异型增生(low-grade intraepithelial neoplasia, LGIN)、34例食管高级别异型增生(high-grade intraepithelial neoplasia, HGIN)及137例ESCC中HPV16/18 E6蛋白、p53、PIK3CA、PIK3CB的表达，并分析蛋白表达之间的相关性及与临床病理特征的关系。结果 HPV16/18 E6蛋白在食管正常黏膜组、LGIN组、HGIN组、ESCC组的阳性率分别为0、8.6%、26.5%、29.9%,HPV16/18 E6蛋白在ESCC和HGIN中的表达高于食管正常黏膜和LGIN(P<0.05);p53蛋白在食管正常黏膜组、LGIN组、HGIN组、ESCC组的阳性率分别为9.4%、28.6%、50.0%、68.6%,p53在HGIN中的表达高于...     

结肠息肉322例临床分析

本文整理了1983年1月至1993年12月行纤维结肠镜检查的病例1385例,发现大肠息肉322例,占24.5％,共533枚息肉,现将其临床表现、病理特征及处理方法进行分析讨论。1 临床资料 本组322例中,男215例,女107例。年龄5～78岁,平均42.5岁。50岁以上发病率较高,占41.6%;临床表现以便血为主,占63.4%,伴发结肠癌34例,溃疡性结肠炎11例,慢性结肠     

加权基因共表达网络筛选胃癌关键功能模块与预后相关基因

目的运用加权基因共表达网络分析法(weighted gene co-expression network analysis, WGCNA)分析胃癌关键功能模块, 研究胃癌基因集与临床特征的相关性, 并鉴定候选生物标志物。方法研究时间2023年1月至4月。在基因表达综合数据库(Gene Expression Omnibus, GEO)中筛选出GSE65801的基因表达谱, 运用WGCNA构建胃癌的基因共表达网络并识别共表达模块, 分别进行功能(GO)、通路(KEGG)富集分析和蛋白质相互作用(PPI)分析, 并通过生存分析筛选出预后相关基因。结果通过WGCNA得到12个共表达模块, 选取其中差异最显著的模块进行后续研究, 这些基因主要富集到糖胺聚糖代谢、血管发育、上皮细胞增殖、调节细胞对生长因子刺激的反应、调节细胞生长、细胞粘附等功能上, 以及PI3K-Akt、MAPK、Ras等关键信号通路上, 最终通过预后分析筛选出5个预后相关基因:VCAN、SERPINE1、HGF、IGFBP7、FSTL3。结论通过WGCNA识别出一些与胃癌相关的模块和预后相关基因, 为进一步研究胃癌的发生发展的分...     

结直肠癌中Keap1、Nrf2、Gpx4表达与铁死亡的相关性分析及临床意义

目的 探讨结直肠癌中Keap1、Nrf2、Gpx4的表达与铁死亡相关因子PLOOH、MDA、GSH及组织铁含量的相关性及临床意义。方法 收集106例结直肠癌、正常肠黏膜组织，采用免疫组化EnVision法、Western blot、qRT-PCR检测两者中Keap1、Nrf2及Gpx4的表达；应用分光光度法检测PLOOH、组织铁、MDA、GSH的含量，分析其相关性及临床意义。结果 结直肠癌组织中Keap1、Nrf2和Gpx4的阳性率分别为60.5%、35.8%、39.6%,其蛋白相对表达量分别为0.78±0.14、0.70±0.13、0.63±0.10,其mRNA水平分别为0.80±0.018、0.68±0.019、0.52±0.016,各因子在肿瘤中的表达均高于正常肠黏膜组织(P<0.05)。线性回归的对数趋势线分析显示结直肠癌组织中Keap1与Nrf2的表达呈负相关(R²=0.188 1,P<0.05),Nrf2与Gpx4的表达呈正相关(R²=0.252 7,P<0.05)。结直肠癌组织中PLOOH、MDA、GSH及组织...