脂质体技术在铂类药物抗肿瘤研究中的应用

以铂类药物（如顺铂、卡铂和奥沙利铂）为基础的化疗是一类常见的肿瘤治疗方法,但由于其毒性大、易产生耐药、药代动力学特征较差等原因,其临床应用受到一定限制。因此,开发低毒、高效的新型铂类制剂成为铂类药物的研发热点,而脂质体具有靶向、减毒、增效的优良特性,是抗肿瘤药物的理想递送载体。本文综述了近几年脂质体药物递送技术的特点和优势,并对几种铂类药物脂质体处方的临床评价进行了分析,以期为铂类药物新剂型的研究提供思路和参考。     

模拟缺血对豚鼠心室肌细胞Na~+/K~+泵电流的影响

目的 观察模拟缺血对心室肌细胞Na+/K+泵电流的影响.方法 采用胶原酶酶解法分离豚鼠心室肌细胞,以全细胞膜片钳方法记录心室肌细胞的Na+/K+泵电流(Ip).采用代谢抑制剂2-脱氧葡萄糖和碳酸氰-4-三氟甲氧基苯腙模拟缺血灌流,造成细胞的模拟缺血,观察模拟缺血对心室肌细胞Ip的影响,并探讨模拟缺血对双氢哇巴因(DHO)高亲和力Ip和DHO低亲和力Ip的影响.结果 模拟缺血2.5 min时Ip抑制率为(30.15±0.05)%,与4.0 min时的(49.33±0.02)%比较差异有统计学意义(P<0.05);6.0 min时Ip抑制率为(62.27±0.04)%,与4.0 min时的比较差异有统计学意义(P<0.05);Ip抑制程度随缺血时间延长而增加(r=0.82,P<0.05).模拟缺血特异性抑制DHO低亲和力Ip,而不影响DHO高亲和力Ip.结论 模拟缺血对DHO低亲和力Ip的特异性抑制作用,可能是缺血所致心室肌细胞内Na+浓度升高的主要因素之一.     

装载siRNA的纳米阳离子脂质体在小鼠体内的药代动力学研究

目的:探讨siRNA药物的体内药代动力学评价方法,并分析脂质体作为药物载体的优势。方法:采用前期已构建的siRNA表达质粒及装载了该质粒的纳米隐形阳离子脂质体,将实验分为裸siRNA质粒组和siRNA质粒脂质体组,分别进行DNaseⅠ酶切和血清中稳定性的检测。再将20μg siRNA裸质粒及siRNA质粒脂质体通过尾静脉注射进入小鼠体内,分别在注射后0 min、5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、12 h、24 h取血,采用实时荧光定量PCR方法(qPCR)对小鼠体内裸质粒及质粒脂质体进行定量检测,计算各时间点siRNA质粒的浓度。结果:裸质粒在DNaseⅠ中仅20 min就全部降解,质粒脂质体降解较缓慢,到24 h仍有(20.16±2.47)%的DNA残留;裸质粒在80%血清中20 min时仅残留(11.03±0.92)%,在1 h时基本全部降解,质粒脂质体在80%血清中24 h时仍残留(10.26±1.04)%,与裸质粒组相比,脂质体作为载体使siRNA表达质粒在DNaseⅠ及血清中的稳定性显著提高(P<0.05)。在小鼠体内脂质体包裹的质粒半衰期约为2 h,而裸质粒仅为6 min,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:利用qPCR方法可以完成siRNA脂质体的体内检测。阳离子脂质体能够保护核酸类药物进入体内,是一种高效的递送载体,同时脂质体能够提高药物的体内稳定性,延长药物的作用时间。     

人钠泵α2亚基M4～M5区片段的克隆、原核表达与纯化

目的 构建钠泵α2亚基第4跨膜区与第5跨膜区之间的蛋白结构域M4～M5的原核表达载体,并在大肠杆菌中进行表达和纯化.方法 通过PCR反应和酶切技术,构建表达载体pET28b( + )-M4-5,并于大肠杆菌E.coli Rosetta 2进行表达,用6 mol/L盐酸胍对表达形成的不溶包涵体进行变性,梯度稀释复性后,用Ni-NTA亲和柱进行纯化,得到目的 蛋白,用Western blot分析表达产物,并采用无机磷法测定其ATP酶活性.结果 重组表达载体pET28b( + )-M4-5经酶切与测序鉴定证实构建成功;导入大肠杆菌Rosetta 2进行表达,表达产物相对分子质量为52×103左右,与预期值相符,表达量占细胞全蛋白的30%左右;SDS-PAGE分析表明,表达产物主要以包涵体形式存在,亲和柱纯化后,目的 蛋白的纯度在95%以上;Western blot分析表明表达产物与抗His抗体特异性结合;重组蛋白的ATP酶活性为(15.3±1.8)mmol·(g·h)-1.结论 构建了原核表达载体pET28b( + )-M4-5,并在大肠杆菌Rosetta 2中成功表达,亲和纯化获得较高纯度的M4～M5融合蛋白.     

益气温阳法治疗窦性心动过缓25例

<正>窦性心动过缓是临床常见病,指心率低于每分钟60次。一般无特殊症状,但当心率显著减慢时,可有头晕、乏力、胸闷,甚至晕厥,或诱发心功能不全、低血压、心绞痛,或短暂脑缺血发作和休克。     

重组铜绿假单胞菌外毒素PE38KDEL的克隆、表达与活性检测

目的对铜绿假单胞菌外毒素A的编码序列进行改造,以获得相对分子质量小、活性强的重组毒素PE38KDEL。方法基于铜绿假单胞菌外毒素A的编码序列的高GC含量,通过PCR反应和酶切技术,构建重组毒素PE38KDEL基因,并于大肠杆菌表达,用Westernblot分析表达产物。为检测其生物活性,将其与靶向分子IL4突变体cpIL4(13D)融合,构建融合蛋白表达载体,并于大肠杆菌表达,表达产物经亲和色谱和阴离子交换色谱纯化后,用MTT法检测其对表达IL4受体的黑色素瘤细胞LiBr的细胞毒性。结果成功构建了PE38KDEL基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中得到了高效表达,表达量占细胞全蛋白的21%左右;构建了融合蛋白cpIL4(13D)PE38KDEL,并于大肠杆菌AD494(DE3)中得到高效表达,纯化后融合蛋白的纯度达95%以上,细胞毒实验证明其对黑色素瘤细胞LiBr具有良好的杀伤作用,这说明改造后的PE38KDEL是具有细胞毒效应的。结论重组毒素PE38KDEL的构建,为各种导向药物的构建奠定了基础。     

米托蒽醌脂质体注射液药效学研究

目的观察米托蒽醌脂质体注射液的体内抗肿瘤作用。方法建立小鼠实体型S180肿瘤模型、小鼠腹水型L1210肿瘤模型和静脉注射L1210小鼠肝转移模型,探讨米托蒽醌脂质体的抗肿瘤作用。结果米托蒽醌脂质体注射液单次以4.0、6.0 mg/kg体质量静脉注射,对实体型S180小鼠的抑瘤率分别为85.00%和88.19%,与等剂量米托蒽醌注射液组比较有显著性差异;单次以2.0、4.0、6.0、8.0 mg/kg体质量静脉注射,与空白对照组相比均可显著延长腹水型L1210肿瘤模型和肝转移模型小鼠的生存时间,且与等剂量米托蒽醌注射液组比较有显著性差异。结论相同给药剂量下,米托蒽醌脂质体注射液的体内抗肿瘤作用显著优于米托蒽醌注射液。     

粒径对米托蒽醌脂质体疗效及毒性的影响

目的 考察脂质体粒径对米托蒽醌脂质体的体外释放行为、体内毒性和治疗效果的影响,为米托蒽醌脂质体处方筛选提供实验依据.方法 采用体外释放试验、急性毒性试验、小鼠腹水型L1210肿瘤模型,评价粒径对药物释放速度,处方安全性及有效性的影响.结果 降低脂质体的粒径可以显著增加药物的释放速度.不同粒径脂质体体内毒性试验无明显差异,小粒径的脂质体具有较好的治疗效果.结论 调整脂质体的粒径,可以改变药物从脂质体中释放的速率,进而影响脂质体处方的治疗效果.