线粒体COI和CYTB基因在虫草属物种寄主昆虫鉴定中的适用性分析

目的：利用DNA条形码技术对冬虫夏草、凉山虫草、亚香棒虫草、戴氏虫草等物种的寄主昆虫分别通过COI序列和Cytb序列进行条形码分析,探索虫草属物种寄主昆虫鉴定序列的适用性。方法：通过DNA提取、PCR、电泳检测和序列测定,分别获得26份虫草寄主虫体的COI序列和Cytb序列,再用拼接和分析软件进行序列的比对和聚类分析。结果：COI序列和Cytb序列都能很好地区分鉴定虫草类各物种,但COI序列的扩增成功率大于Cytb基因,同时在COI基因片段中共检测到129个多态位点,变异率为19.51%;在Cytb基因片段中共检测到113个多态位点,变异率为26.10%。COI序列的简约信息点多于Cytb序列,且基因变异率低于后者。结论：本研究建议COI序列更适用于虫草寄主昆虫的DNA条形码研究。     

苗族医药理论及发展现状概述

苗医药及其文化源远流长,积累了丰富的预防和治疗疾病的经验,并逐渐形成了一套具有地域性和鲜明民族文化特色的疗效独到的医药理论,如生成学理论、经纲症疾理论、三界学说、交环理论、四大筋脉学说等。进入新世纪以来,苗医苗药从一方一药、一技一法,口耳相传、流散民间的口碑资料发展出了具有自身特色的苗医药理论,结合现代科学研究技术,苗医苗药的发展取得了质的飞越。然而苗族自古没有文字传承、医术验方后继乏人、苗药标准不完善等因素依然制约着苗医药的后续发展。通过文献调研的方式,对现有苗族医药理论进行归纳和总结,并结合当前苗医药的发展形势,对影响苗医药发展的因素进行了探讨,以期为苗医药的研究提供参考。     

对彝族动物药发展的认识

彝族地区具有丰富的动物药资源,彝医并以其特殊的用药方式在民族医学当中脱颖而出,已形成颇具民族特色的动物药用药经验及医疗范畴。但由于受到历史、民族文化、临床实践等方面的制约,彝族动物药一直未有较大的发展。对于具有潜在科研价值的彝族动物药,从其用药特点、古今文献书籍所收载动物药情况、目前彝族动物药存在的问题等几方面进行论述。     

淫羊藿的化学成分及质量控制研究进展

淫羊藿在我国具有悠久的药用历史,亦是苗族习用药材,淫羊藿属植物中含有黄酮、木脂素、苯酚苷、生物碱、多糖等多种化学成分,在广泛的文献检索基础上,以国内7种药用淫羊藿为对象,对淫羊藿中所含化学成分进行了较全面的分类汇总,并对其品种鉴别和质量控制方面的研究进展进行了综述,以期为淫羊藿药材进一步的开发利用提供参考.     

基于化学计量学的指纹图谱法鉴别金线莲及其混伪品

目的 建立金线莲高效液相色谱（high performance liquid chromatography,HPLC）指纹图谱分析方法,基于化学计量学对比区分其7种常见混伪品（台湾银线兰、长片金线兰、滇越金线兰、丽蕾金线兰、血叶兰、斑叶兰、虎耳草）,为其真伪鉴别提供技术参考。方法 采用Welch Ultimate XB-C₁₈ 色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）,流动相乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）,梯度洗脱60 min,流速1.0 mL·min^-1,柱温30 ℃,检测波长360 nm,进样量10 μL。建立17批金线莲的指纹图谱,通过聚类分析、主成分分析（principal component analysis,PCA）和正交偏最小二乘判别分析（orthogonal partial least square-discriminate analysis,OPLS-DA）用于区分台湾银线兰、长片金线兰、滇越金线兰、丽蕾金线兰、血叶兰、斑叶兰、虎耳草共7种混伪品。结果 建立了金线莲高效液相色谱指纹图谱,确定了16个共有峰（指认11个成分：槲皮素3,7-二葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-芸香糖苷-7-O葡萄糖苷、芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、水仙苷、紫云英苷、异鼠李素-3-O-葡萄糖苷、槲皮素、山柰酚、异鼠李素）,17批金线莲与对照指纹图谱的相似度均＞0.85,7种混伪品与金线莲对照指纹图谱的相似度均＜0.8,通过正交偏最小二乘判别分析筛选出金线莲与混伪品的差异标志物为水仙苷,对差异标志物进行含量验证,金线莲中水仙苷含量（高于1 098.09 μg·g^-1）显著高于其混伪品（低于379.96 μg·g^-1）。结论 高效液相色谱指纹图谱的方法简单、可靠,可用于金线莲与混伪品的区分,水仙苷可以作为区分混伪品的标志物之一。     

金线莲多糖的提取优化与纯化

目的 以响应面法优化超声提取金线莲多糖的工艺,同时,对多糖纯化中除蛋白方法进行考察。方法 以多糖提取率为检测指标,在单因素考察的基础上采用Box-Behnken实验设计及响应面法对料液比、超声时间、超声提取温度3个因素进行优化;以多糖保留率和蛋白脱除率对Sevage试剂法、TCA法、盐法（NaOH-CaCl₂法和NaOH-NaCl法）、盐酸法5种脱蛋白方法进行考察。结果 金线莲多糖最佳提取工艺为: 料液比1∶10,超声提取温度48 ℃,超声提取时间36 min,超声提取次数2次,超声功率为300 W,该条件下金线莲多糖提取率达到了13.13%;同时以NaOH-CaCl₂法脱蛋白,多糖损失率为18.74%,蛋白脱除率为95.62%。结论 超声提取操作简单,优化后提取方法能够取得较高提取率,NaOH-CaCl₂法脱蛋白能够获得较高蛋白脱除率及多糖保留率,该方法适用于金线莲多糖活性成分的开发研究。     

金线莲转录组测序及其黄酮类合成相关基因分析

首次采用RNA-seq高通量测序技术对不同种植时期的金线莲进行转录组测序,并通过Q-PCR和HPLC对其结果进行验证和分析。转录组测序共获得金线莲51 370条基因,并注释到Nr、GO、Swiss-Prot、KEGG和KOG数据库,根据同源序列比对,与油棕和海枣的同源性最高。通过比较不同生长时间的金线莲转录组,分析其差异基因主要集中在黄酮类生物合成相关基因,运用Q-PCR对6个黄酮类生物合成相关基因(反式肉桂酸4-单加氧酶、咖啡酰辅酶A O-甲基转移酶、查尔酮合成酶、黄酮醇合成酶、莽草酸O-羟基肉桂酰转移酶、黄酮类3′,5′-羟化酶)表达量进行验证;并结合HPLC对相应的金线莲样品中6种主要黄酮类成分(芦丁、异槲皮苷、水仙苷、槲皮素、山柰酚和异鼠李素)进行含量测定。结果表明6种主要黄酮类成分含量随着金线莲黄酮类合成基因的表达量的升高而增加,并结合转录组数据,绘制出金线莲中黄酮类成分的生物合成途径。此研究为金线莲黄酮合成关键基因及黄酮类成分生物合成提供重要的遗传信息,同时为其药用价值开发提供依据。     

花叶开唇兰与台湾银线兰的SSR标记技术鉴别

目的利用SSR分子标记技术建立金线莲基原植物花叶开唇兰Anoectochilus roxburghii及其常见混淆品台湾银线兰A.formosanus的鉴别依据。方法根据花叶开唇兰转录组数据进行分析筛选SSR引物,通过DNA提取、PCR扩增以及引物多态性筛选等方法鉴别花叶开唇兰及台湾银线兰,从而鉴定药用金线莲真伪。结果基于花叶开唇兰转录组数据筛选出SSR多态性引物13对,UPGMA聚类法显示两者遗传相似系数变幅为0.38～1.00,在遗传相似系数0.38处,可将其完全分开。结论该研究构建了花叶开唇兰与台湾银线兰的分子标记鉴定体系和指纹图谱,为金线莲的商品鉴别及质量控制提供科学依据。