外泌体在骨肉瘤侵袭转移及耐药性中的研究进展

骨肉瘤(osteosarcoma)是一种具有高度侵袭性的恶性肿瘤，已成为青少年人群中导致癌相关死亡的首要疾病。但由于其早期高发的肺转移率以及广泛的对化疗药物耐药性问题，骨肉瘤在临床上的治疗仍存在巨大挑战。目前，骨肉瘤的早期诊断及基因治疗已经在国内外的基础研究和临床应用中取得了一定的进展，其中外泌体(exosomes)在骨肉瘤中的诊断治疗具有极大的应用前景。外泌体是一种可由多种活细胞分泌的纳米级(40~100 nm)微囊泡，它具有传递mRNA、miRNA、DNA和蛋白质等各种信息和功能性物质的功能。它可由多种活性细胞产生和分泌，存在于多种体液和细胞间液中。由于其特殊的存在和传递形式以及所搭载的信息和物质，因此，骨肉瘤来源的外泌体可通过多种途径和方式促进骨肉瘤的发生、侵袭转移、耐药性及免疫逃逸。利用这些特点，外泌体可被人为搭载靶向药物或治疗性基因等物质，或通过多种方式对其分泌和释放进行调控来治疗多种肿瘤。近年来，关于外泌体在骨肉瘤方面作用和应用的研究成为热点，但仍停留在基础研究且尚未在临床的诊断及治疗中进行应用。本文旨在对外泌体在骨肉瘤侵袭转移及耐药性上的作用机理、临床诊断、治疗方面的研究进展进行总结，望有助于为利用外泌体诊断、治疗和改善骨肉瘤预后提供参考。      

切开与关节镜下Latarjet手术治疗肩关节前方不稳定疗效的Meta分析

目的通过Meta分析比较切开与关节镜下Latarjet手术治疗肩关节前方不稳定的临床疗效差异。 方法检索包括国内、外1954年1月至2018年1月已发表的临床对照研究。所检索的数据库包括Embase、Pubmed、Central、Cinahl、PQDT（ProQuest Dissertations and Theses）、中国知网、维普、万方、Cochrane Library、CBM （China Biology Medicine）等数据库。中文检索的关键词为切开、开放、关节镜、Latarjet,检索策略为Latarjet并且切开或关节镜或开放。英文检索的关键词为Open、Arthroscopy、Latarjet,检索策略为Latarjet AND Open OR Arthroscopic。提取数据后,采用Review Manager 5.3软件进行数据分析,比较关节镜下与开放式Latarjet手术间的疗效差异。 结果依据以上检索策略,共检索到相关文献887篇,并最终纳入7篇外文文献。通过比较发现,在Latarjet手术治疗肩关节前方不稳定时,开放式组术后Rowe评分优于关节镜下组[95% CI, （0.03, 3.25）, P=0.05],而且开放式组术后骨块移位情况[95% CI（0.12, 0.88）, P=0.03]及患者焦虑程度[95% CI（0.20, 0.75）, P=0.005]均少于关节镜下组,其差异具有统计学意义。其余结局指标术后Walch-Duplay评分[95% CI（-9.57, 10.65）, P=0.92];术后肩关节活动度[95% CI（-2.32, 7.64）, P=0.30];术中及术后各种并发症发生率[95% CI（0.42, 3.39）, P=0.74]、[95% CI（0.14, 2.49）, P=0.48]、[95% CI（0.77, 14.09）, P=0.11]、[95% CI（0.46, 4.89）, P=0.51]、[95% CI（0.12, 0.88）, P=0.03]、[95% CI（0.12, 7.22）, P=0.94] ;术后复发率[95% CI（0.21, 3.56）, P=0.85];术后视觉模拟评分（visual analogue scale,VAS） [95% CI（-0.25, 2.92）, P=0.10];手术所需时间[95% CI（-70.10, 11.81）, P=0.10]两组间差异均无统计学意义。 结论开放式与关节镜下Latarjet手术治疗肩关节前方不稳定均能取得良好的治疗效果,且并发症及复发率相当。虽然开放式组在术后Rowe评分、术后骨块移位情况和患者焦虑程度三个指标上均优于关节镜下组,但是关节镜手术仍不失为是一种安全可行的治疗选择。     

66例青年女性胃癌分析

目的 探讨青年女性胃癌的临床、病理特点及预后.方法 回顾性分析1986年至2006年间通过胃镜及病理检查确诊35岁以下青年女性胃癌66例的临床、胃镜及病理特点.结果 青年女性胃癌66例,占同期胃癌的3.07%,平均年龄29.1岁,59例(89.4%)为生育后妇女,除4例为早期胃癌外均为进展期胃癌,以Borrmann Ⅳ型为主,低分化腺癌和未分化腺癌多见,5年生存率低.结论 青年女性胃癌恶性程度高、预后差,应早诊断,早治疗.     

泮托拉唑联合健胃愈疡片治疗消化性溃疡愈合质量的临床评价

目的评价泮托拉唑联合健胃愈疡片治疗消化性溃疡。对溃疡愈合质量作用。方法120例经胃镜检查证实伴有（或不伴有）H．pylori（Hp）感染的活动性胃溃疡患者随机分成试验组和对照组。试验组为给予沣托拉唑＋健胃愈疡片。对照组给予泮托拉唑＋安慰剂（模拟健胃愈疡片）,对Hp阳性者,均另给予克拉霉素＋左氧氟沙星治疗。十二指肠溃疡疗程为4周,胃溃疡为6周后复查。内镜复查观察溃疡的愈合率、H西转阴率、愈合S2期的获得率。结果疗程结束后,两组病例溃疡愈合和Hp根除率比较差异无显著性（P〉0．05）。试验组溃疡愈合S2期获得率显著高于对照组（P〈0．05）。结论沣托拉唑联合健胃愈疡片消化性溃疡是一种有效率高、安全、实用的方案．健胃愈疡片在提高溃疡愈合质量上起着重要的作用。     

孟氏液治疗恒径动脉出血1例报告

孟氏液治疗恒径动脉出血１例报告寿明霞，陈成龙（丽水市人民医院胃镜室邮编３２３０００）患者雷××男３６岁因呕血约５００ｍｌ，黑便约８００ｍＬ入院．住院期间，用１０％匍萄液２５０ｍｌ加雷尼替丁０．２静滴，１天１次，５％葡萄液５００ｍＬ加ＰＡｍＢＡａ６静滴...     

癌相关成纤维细胞来源的外泌体在促骨肉瘤侵袭转移中作用的实验研究

目的 探讨癌相关成纤维细胞(CAFs)来源的外泌体对骨肉瘤侵袭及转移的影响。方法 利用人源骨肉瘤细胞株Saos-2采用差速贴壁法分离、培养CAFs,显微镜下观察CAFs的形态,免疫组织化学观察α-SMA蛋白表达对CAFs进行鉴定。培养CAFs,采用ExoQuick-TC外泌体提取试剂盒分离外泌体。通过透射电镜观察外泌体形态,Western blot检测外泌体特异性标记蛋白β-actin、CD63表达情况对外泌体进行鉴定。培养人源骨肉瘤细胞株Saos-2,分为外泌体组和对照组,采用细胞划痕及Transwell小室实验观察外泌体对Saos-2细胞迁移和侵袭能力的影响。选取一级5周龄BALB/c-nu雌性裸鼠12只,按编号随机分为外泌体组和对照组,每组6只。两组均采用皮下移植成瘤法在裸鼠右侧背部皮下接种人骨肉瘤Saos-2细胞与Matrigel基质胶混合悬液,建立裸鼠骨肉瘤肿瘤模型。造模结束后即刻进行尾静脉注射:外泌体组每只裸鼠通过尾静脉注射浓度为0.1 μg/μL的外泌体悬液30 μL,对照组裸鼠尾静脉注射等量生理盐水,两组均1次/周,共注射6次。第1次注射后每日观察裸鼠成瘤情况,从裸鼠右侧背部皮下可触及肿块开始,测量两组裸鼠肿块的最长径和最长径的最大垂直短径,计算肿瘤体积,此后每周测量1次,共测量6次。完成最后一次测量后腹腔麻醉断椎法处死裸鼠,完整取出肿块并称重。取裸鼠肺组织进行切片HE染色观察两组裸鼠肺转移情况。结果 显微镜下观察CAFs呈长梭形,排列杂乱,无方向性;细胞免疫组织化学染色结果显示:CAFs的α-SMA蛋白表达阳性,提示CAFs提取成功。电镜观察外泌体呈70～100 nm圆形或椭圆形膜性囊泡状结构;Western blot结果显示外泌体中CD63蛋白呈高表达,β-actin蛋白表达较弱,提示成功分离CAFs来源外泌体。细胞划痕实验、侵袭实验结果显示:外泌体组细胞迁移距离、迁移率、侵袭细胞数目分别为(0.19±0.02)mm、0.81%±0.11%、(53.67±5.69) 个,均高于对照组的(0.81±0.11)mm、0.32%±0.11%、(31.67±8.08) 个,差异均有统计学意义(t=6.209、6.209、3.856, P值均＜0.01)。外泌体组和对照组12只裸鼠采用皮下移植成瘤法接种人骨肉瘤Saos-2细胞与Matrigel基质胶混合悬液,均造模成功,实验过程中无一例动物死亡。两组裸鼠均于第1次注射肿瘤细胞后1周触及肿块,肿瘤体积均随着时间的延长明显增大,差异均有统计学意义(F=49.428、8.477, P值均＜0.05)。两组间比较,第1、2次测量肿瘤体积,差异均无统计学意义(P值均＞0.05);而第3～6次测量肿瘤体积,外泌体组均大于对照组,差异均有统计学意义(t=4.697、4.825、3.516、2.706, P值均＜0.05)。测量6次后处死裸鼠,剥除肿瘤,外泌体组肿瘤质量(1.62±0.29)g大于对照组(1.00±0.43)g,差异有统计学意义(t=2.929, P＜0.05)。肺组织切片HE染色结果显示,两组裸鼠均发生肺转移,外泌体组肺组织转移灶数量为6.63(3,17)个,多于对照组的1.17(0,3)个,差异有统计学意义(W=36.000, P＜0.01)。结论 CAFs来源的外泌体可增加骨肉瘤细胞株Saos-2的迁移及侵袭能力,同时促进骨肉瘤的生长和肺转移的形成。     

雷贝拉唑联合康复新液治疗消化性溃疡愈合质量的临床评价

目的观察及评价雷贝拉唑联合康复新液治疗消化性溃疡,对溃疡愈合质量的作用。方法经胃镜及组织病理学确诊伴有(或不伴有)Helicobacter pylori(Hp)感染的活动性消化性溃疡患者,按就诊顺序分为治疗组和对照组。治疗组:雷贝拉唑胶囊20mg,每日1次,加康复新液10mL每日3次口服。对照组:雷贝拉唑胶囊20mg,每日1次口服。对Hp阳性者均另给予克拉霉素500mg+左氧氟沙星200mg,每日2次口服抗Hp治疗一周,十二指肠溃疡疗程为4周,胃溃疡为6周,疗程结束后复查胃镜,观察溃疡的临床愈合率,Hp根除率,瘢痕S2期占有率。结果疗程结束后,两组病例中溃疡临床愈合率和Hp根除率比较差异无显著性(P>0.05)。治疗组瘢痕S2期占有率显著高于对照组(P<0.05)。结论雷贝拉唑联合康复新液治疗消化性溃疡明显增加瘢痕S2期占有率,显著提高溃疡的愈合质量,提示康复新液在提高溃疡愈合质量中起重要作用。     

17AAG-cypate聚合物胶束对肺癌A549细胞放射敏感性影响

目的 研究17AAG-cypate胶束对人非小细胞肺癌A549细胞的放射增敏作用,并简析其可能机制。方法 单击多靶模型拟合实验方程分析17AAG-M和17AAG-cypate-M的放射增敏作用。MTT实验检测17AAG-cypate-M在激光和X射线照射下对A549细胞存活率的影响。β-半乳糖苷酶染色实验观察药物对细胞衰老产生的影响。γ-H₂AX免疫荧光染色实验分析不同处理条件对DNA损伤修复的影响。蛋白印迹法实验检测p-Erk1/2和p-Akt蛋白的表达情况。配对t检验差异。结果 与单纯X射线照射组相比D₀下降,SER>1,说明17AAG-cypate-M具有放射增敏作用。与17AAG-M组相比,17AAG-cypate-M组对A549细胞活力抑制程度升高(P=0.0012),且引发了更明显的DNA损伤修复延迟(P=0.0017)。同时,17AAG-cypate-M对p-Erk1/2和p-Akt表达水平的抑制程度高于17AAG-M。结论 与17AAG-M相比,17AAG-cypate-M对A549细胞的放射增敏作用更加明显,其放射增敏机制可能为引发细胞的衰老,延迟DNA损伤修复,抑制p-Erk1/2和p-Akt表达等。     

下调NEK-2表达对人肺癌A549细胞放射敏感性影响

目的 探讨下调NEK-2表达对非小细胞型肺癌A549细胞放射敏感性影响。方法 培养人非小细胞型肺癌A549细胞,通过siRNA技术沉默A549细胞中NEK-2的表达水平,通过蛋白印迹法实验进行验证。采用克隆形成实验检测放射增敏作用,用流式细胞技术检测下调NEK-2表达对辐射诱导A549细胞凋亡和周期的影响,采用免疫荧光实验检测DNA双链断裂和修复情况。结果 NEK-2 siRNA可明显下调A549细胞中NEK-2的表达水平。相对于空白对照组和阴性对照组,下调NEK-2表达能抑制肿瘤细胞的增殖能力,提高A549细胞的放射敏感性,平均致死剂量由1.80 Gy下降至1.40 Gy,放射增敏比值为1.32。下调NEK-2表达可提高因辐射诱导引起的凋亡水平(7.85%~17.17%),使细胞在 G2/M期阻滞(9.23%~30.16%),使DNA双链断裂的数量增加至165%,使DNA双链损伤的修复效率下降至48%。结论 下调A549细胞中NEK-2表达水平能降低细胞的增殖能力,提高细胞放射敏感性,其作用机制可能与细胞周期变化、细胞凋亡以及DNA双链的断裂与修复有关。     

17AAG-Cypate聚合物胶束对A549细胞裸鼠移植瘤抑瘤效果的体内实验研究

目的 研究17AAG-cypate胶束对肺腺癌 A549 细胞裸鼠移植瘤的抑制作用,并探讨其作用机制。方法 用肺腺癌A549细胞建立裸鼠皮下移植瘤模型,分别给予生理盐水(生理盐水组)、射线照射(X-Ray)、17AAG胶束+射线照射(17AAG-M/X)、17AAG-Cypate胶束+激光/射线照射(17AAG-Cypate-M/L+X)处理。定期测量移植瘤大小,绘制移植瘤生长曲线;采用免疫组化法检测肿瘤组织增殖细胞核抗原(PCNA)和微血管密度表达;TUNEL法观察肿瘤细胞凋亡;蛋白印迹法检测肿瘤组织磷酸化ERK1/2和磷酸化AKT的表达水平。结果 与生理盐水组相比,X-Ray组、17AAG-M/X-Ray组、17AAG-Cypate-M/L+X组移植瘤生长均受到抑制,以17AAG-Cypate胶束组最为明显(P<0.05);各实验组肿瘤组织中PCNA蛋白表达水平明显下调(P<0.05),微血管密度也明显下调(P<0.05),磷酸化ERK1/2和磷酸化AKT的表达量显著下降。结论 17AAG-Cypate胶束可以抑制裸鼠体内非小细胞肺癌的生长,其机制可能是通过降低p-ERK1/2和 p-AKT的活性,从而减弱MAPK-ERK和PI3K-AKT信号通路的激活。