前列腺素E2调节大鼠成骨细胞OCIL基因表达的信号通路研究

探讨前列腺素E2(PGE2)对大鼠成骨细胞破骨细胞抑制性凝集素(osteoclast inhibitory lectin OCIL)mRNA表达的调节及其信号转导机制.培养大鼠原代成骨细胞和UMRl06成骨细胞样细胞,采用不同浓度的PGE2和不同的信号通路调节剂干预细胞后,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR检测OCILmRNA的表达水平.PGE2、蛋白激酶A(PKA)激动剂福司可林、db-cAMP和钙离子载体A23187均促进OCIL mRNA表达,OCIL mRNA最大上调幅度分别为对照组的2.38倍、4.2倍、4.5倍和5.1倍(均P＜0.01).蛋白激酶C(PKC)激动剂PMA下调OCILmRNA表达约50%(P＜0.01).PKA抑制剂KT-5720、钙通道阻断剂维拉帕米、钙调蛋白抑制剂W7和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)阻断剂PD98059分别下调PGE2诱导的OCIL mRNA表达约56%、40%、65%和60%(均P＜0.01).PKC抑制剂白屈菜红碱促进PGE2诱导的OCIL mRNA表达约30%(P＜0.05).PKA、MAPK和Ca2+/钙调蛋白信号通路介导了PCE2诱导的大鼠成骨细胞OCIL基因表达.

Abstract：

To investigate the regulation of osteoclast inhibitory lectin (OCIL) mRNA expression by prostaglandin E2 ( PGE2 ) in rat osteoblastic cells and the involved signaling pathways. Rat primary osteoblasts and UMR106 osteoblast-like cells were cultured and treated with various doses of PGE2 or regulators of different signaling pathways for different periods of time, the cells were then harvested at indicated dates. Total RNA were isolated and OCIL mRNA expression were studied by real-time PCR. PGE2, Forskolin, db-cAMP, and A23187 increased OCIL mRNA by 2. 38 fold,4. 2 fold,4. 5 fold, and 5. 1 fold ( all P＜0. 01 ) respectively, while PMA downregulated OCIL mRNA expression by 50% ( P＜0. 01 ). KT-5720, verapamil, W7, and PD98059 downregulated PGE2 induced OCIL mRNA expression by 56%, 40%, 65%, and 60%, respectively( all P＜0. 0l ). While chelerythrine enhanced PGE2 induced OCIL mRNA expression by 30% ( P＜0. 05 ). PGE2 up-regulated the expression of OCIL in rat osteoblastic cells via PKA, MAPK, and Ca2+/Calmodulin signaling pathways.     

前列腺素E2调节成骨细胞核因子-κB受体激活物配基和护骨素表达的信号通路研究

目的 探讨前列腺素E2(PGE2)对大鼠成骨细胞核因子-κB受体激活物配基(RANKL)和护骨素(OPG)mRNA表达的调节及其信号转导机制.方法 培养大鼠UMR106成骨细胞,采用不同浓度的PGE:和不同的信号通路调节剂干预细胞后,提取细胞总RNA,采用实时荧光定量PCR检测RANKL和OPG mRNA的表达水平.结果 PGE2、福司可林和db-cAMP均促进RANKL mRNA表达和抑制OPG mRNA的表达,RANKL mRNA表达分别为对照组的2.8倍(P=0.002)、2.2倍(P=0.006)和2.1倍(P=0.005).OPG mRNA表达分别为对照组的12%(P<0.01)、85%(P=0.005)和70%(P=0.013).A23187则下调RANKL和OPG表达58%(P=0.002)和53%(P=0.017).KT-5720下调PGE2诱导的RANKL mRNA表达约53%(P<0.01),而白屈菜红碱、维拉帕米、钙调蛋白抑制剂(W7、KN-62和PD98059)则对PGE:诱导的RANKL mRNA表达无明显影响(P>0.05).KT-5720、维拉帕米和W7分别阻断PGE2对OPG mRNA表达的抑制作用47%(P=0.01)、38%(P=0.029)和43%(P<0.01),而KN-62、PD98059和白屈菜红碱则均不影响PGE2对OPG表达的调节(P>0.05).结论 PKA信号通路介导了PGE2诱导的RANKL表达,而PGE2对OPG表达的下调作用则由PKA和Ca2+钙调蛋白信号通路介导.     

药理学家眼中的中西医结合——杨宝峰院士访谈录

中医中药是中国伟大的宝库,也是世界医学的瑰宝。中西医结合在理论研究和实践运用都日趋深入,成果斐然,世界瞩目。中医中药既要传承更要与时倶进,发展中西医结合,国家政策是引领,学科交叉和团队合作是关键。中西医两种医学相互渗透,相互结合,是未来医学的发展方向,唯有如此才能更好地造福人类,推动健康事业的发展。     

改良TRIZOL法从矿化骨组织中提取总RNA

目的：通过对TRIZOL法加以改进，建立一种快速、有效提取矿化骨组织中总RNA的方法。方法：改进TRIZOL法提取骨组织中的总RNA，在异丙醇沉淀RNA时加入高浓度的盐溶液。通过紫外分光光度法和1％甲醛变性琼脂糖凝胶电泳鉴定所提取的RNA。进而以其逆转录所得的cDNA为模板经PCR扩增OPG基因予以鉴定。结果：改良TRIZOL法获得的总RNA完整，纯度好，产量高。结论：改良TRIZOL法是一种从矿化骨组织中提取总RNA的高效、便捷、可靠的方法。     

丹酚酸B对糖尿病动脉粥样硬化斑块内血栓相关因子的影响

[目的]观察丹酚酸B对抗糖尿病动脉粥样硬化斑块血栓形成的作用及可能的发生机制。[方法]选取50只8周龄雌性ApoE-/-小鼠,腹腔注射链尿佐菌素200 mg/kg联合高脂饲料喂养12周,将血糖水平>11.1 mol/L 40只ApoE-/-小鼠作为糖尿病动脉粥样硬化模型小鼠,随机分为模型组(MOD)、丹酚酸B高剂量组(SalBH)、丹酚酸B中剂量组(SalBM)与洛伐他汀组(LVT)4组,每组10只。各组均连续灌胃8周。实验期满后,测定空腹血糖水平;酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清I型纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)的浓度。免疫组织化学染色检测斑块内组织因子(TF)的表达,利用Image-Pro Plus Version 6.0(IPP)图像分析系统计算结果。[结果]与MOD组比较,各治疗组TF平均光密度值明显降低(P<0.05);与MOD组比较,SalBM组PAI-1浓度明显降低(P<0.05)。[结论]丹酚酸B能够降低糖尿病动脉粥样硬化斑块内TF的表达和血清PAI-1含量,提示丹酚酸B可能是通过以上机制来减少粥样硬化斑块内的血栓形成。     

浅议生物化学PBL教学法的合理应用

通过总结生物化学PBL教学法的实践经验,对目前基础医学PBL教学法应用中存在的问题进行探讨,认为PBL教学模式的实施,应与课程内容、学生层次、教师素质、教学资源等因素契合,灵活应用,才能充分发挥其优势。     

中西医结合治疗慢性前列腺炎文献研究

目的:通过收集和总结文献,探讨中医、西医、中西医结合治疗慢性前列腺炎的方法,从而为进一步研究该病的治疗方法提供帮助。方法:使用计算机搜索中国学术期刊全文数据库(CNKI)、中国生物医学文献数据库(CMCC)、维普中文期刊数据库(VIP)、万方数据资源系统中国内外发表的关于治疗慢性前列腺炎的临床研究文献,整理中医、西医、中西医结合对于不同分型慢性前列腺炎的治疗方法,对中医、西医、中西医结合治疗该病的优缺点进行归纳总结。结果:共收集符合纳入标准的中医和中西医治疗慢性前列腺炎的文献133篇,排除不合格文献97篇,最终纳入36篇。最终分别总结出中医辨证论治法、内治法、外治法和中西医结合疗法4种慢性前列腺炎的治疗方法。结论:中医和西医在治疗慢性前列腺炎方面各有所长,缺点也相对明显。中医治疗和中西医结合治疗是我国特有的诊疗方法,针对慢性前列腺炎的疗效优于单纯中医治疗和西医治疗。但目前中西医结合医学还不成熟,缺乏相应的理论体系来指导中医和西医临床治疗方法的结合。     

中药续断含药血清对成骨细胞增殖和骨基质蛋白产生的影响

目的 观察中药续断含药血清对体外培养的成骨细胞增殖和骨基质蛋白产生的影响.方法 ①制备大鼠含药血清:取雌性与雄性Wistar大鼠各12只,按性别随机分为4组,分别为:雄性给药组,雄性对照组,雌性给药组,雌性对照组,每组各6只,给药组按体重 (4.5 g生药/kg体重)分别给予续断水提液灌胃、对照组按体重分别给予等量生理盐水,灌胃1 w后取血,离心提取血清.②分离、培养大鼠的原代成骨细胞.③将各组大鼠血清稀释为2.5%、5%和10% 3个浓度分别培养大鼠成骨样细胞,采用四氮唑蓝法(MTT)检测细胞增殖能力,同时采用生化和放免法进行了细胞碱性磷酸酶(AKP)检测和细胞培养液骨钙素(OC)检测.结果 当培养基中含药血清浓度为2.5%、5%时,雌性给药组成骨细胞增殖率、AKP和OC的量均高于雄性给药组和雌性对照组(P<0.01);当血清浓度为10%时,雌性给药组与雌性对照组比较,存在显著性差异(P<0.05).雌性给药组与雄性给药组比较,无显著性差异(P>0.05).在各浓度的血清中,雄性给药组与雄性对照组之间均无显著性差异.结论 中药续断的含药血清具有刺激骨基质蛋白(碱性磷酸酶和骨钙素)生成和分泌的作用,并具有刺激成骨细胞增殖的作用.这种作用在雌性大鼠的血清中表达强于雄性大鼠.     

高糖高脂诱导脐静脉内皮细胞凋亡及对线粒体膜电位的影响

[目的]明确糖基化终末产物(AGEs)和氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)联合诱导内皮细胞凋亡及其作用机制。[方法]以AGEs和ox-LDL联合作用人脐静脉内皮细胞24 h,hochest33258染色后观察凋亡,Rhodamin123染色后流式细胞术检测线粒体膜电位。[结果]研究表明AGEs和ox-LDL共同作用可增加内皮细胞的凋亡率,降低内皮细胞线粒体膜电位。[结论]提示高糖高脂促进内皮细胞凋亡,可能和降低线粒体膜电位有关。     

GSTT1基因、GSTM1基因多态性与乳腺癌关系的对照研究

目的：探讨女性乳腺癌人群中GSTT1基因、GSTM1基因多态性在乳腺癌发生发展中的作用。为筛选易感人群、早期诊断及有效地预防和治疗措施的建立提供参考依据。方法：采用聚合酶链反应（PCR）、限制性片段长度多态性（RFLP）及琼脂糖凝胶电泳法对105例正常人和100例乳腺癌患者GSTT1基因、GSTM1基因的多态性分布进行检测，Logistic回归等方法估计基因、基因与乳腺癌相关危险因素的交互作用对乳腺癌发病的危险度。结果：GSTT1、GSTM1基因和乳腺癌的危险性呈负相关，OR（95％CI）分别为0．322（0．175～0．593）和0．340（0．188～0．615）；GSTT1基因与GSTM1基因的交互作用和乳腺癌的发病有统计学关联，GSTM1基因和GSTT1基因同时缺失的人群OR（95％CI）为12．338（3．621～22．042）；GSIT1基因及GSTM1基因与多个乳腺癌相关危险因素存在交互作用。结论：GSIT1、GSTM1基因的缺失是乳腺癌发病的危险因素；特定的环境暴露背景下，基因在与环境危险因素的相互作用促进乳腺癌的发生。