69份苦玄参种质SSR遗传多样性及品质性状相关标记分析

目的:采用简单重复序列(SSR)分子标记技术对广西苦玄参主产区69份苦玄参种质样本进行遗传多样性及亲缘关系分析,并筛选与苦玄参苷含量相关联的优良种质基因。为苦玄参种质资源评价、遗传进化分析及分子标记辅助育种等提供依据。方法:基于转录组测序技术,开发20对引物进行批量扩增。利用各标记位点的遗传多态信息,分析69份苦玄参种质的遗传多样性及亲缘关系,并通过一元线性和多元逐步回归分析,筛选与苦玄参苷含量相关联的分子标记。结果:20对SSR引物共扩增出76个等位基因,平均每个位点观测等位基因3.8个,高于有效等位基因数(1.9692个),稀有等位基因率为38.2%,等位基因分布不均匀。等位基因多态率范围为0~59%,平均38.24%,各位点多态率差异较大。各位点多态信息含量(PIC)变化范围为0~0.6211,平均0.3780;Shannon多态性信息指数变化范围为0~1.2401,平均0.7590;Nei’s基因多样性指数(Nei)变化范围为0~0.6823,平均0.4409;以上3个指标最高的为P21,最低为P7,各位点遗传多样性存在较大差异。各位点平均观测杂合度为0.3824,低于平均期望杂合度(0.4425),表现为杂合子缺失;平均遗传分化系数Fst为0.3659;基因流Nm平均值为0.4332,种质遗传分化较大,基因流较小。一元线性回归分析和多元逐步回归分析结果表明,与苦玄参苷IA和IB相关的位点各有5个,其中仅有1个位点与2个成分的含量均相关。结论:20个SSR标记位点遗传多样性存在较大的差异,供试69份种质遗传分化大,基因流较小;从供试20个SSR标记中筛选出9个与苦玄参苷含量相关联的标记位点,试验结果可为苦玄参遗传进化分析及良种选育和繁育等提供依据。     

基于网络药理学的防己主要活性成分及药理作用机制分析

目的基于网络药理学方法预测防己主要活性成分及药理作用机制。方法通过TCMSP、UniProt数据库检索筛选防己的化学成分、靶点、疾病,利用DAVID数据库进行GO与KEGG富集分析,Cytoscape绘图。结果筛选出防己7个活性成分,77个潜在靶点基因和168种疾病,GO富集分析获得140条目,KEGG获得58条信号通路。结论防己具有多成分、多靶点及多途径协同作用的特点,通过网络药理学技术分析防己活性成分与潜在靶点的作用机制,可为进一步研究防己药理作用、挖掘新功能及拓宽其应用提供研究思路。     

骆越壮酒抗疲劳及耐缺氧实验研究

目的:研究骆越壮酒对小鼠抗疲劳和耐缺氧作用。方法:动物分组为正常对照组、溶媒组、红景天组和高剂量(35.52 mL/kg)、中剂量(21.81 mL/kg)、低剂量(13.39 mL/kg)骆越壮酒组,小鼠经过灌胃给药28 d后,检测其负重游泳时间及运动后体内血乳酸、乳酸脱氢酶、血清尿素氮、肝糖原及肌糖原等各项生化指标;考察骆越壮酒对小鼠常压耐缺氧时间、急性脑缺血时间的影响以及亚硝酸钠中毒存活时间的影响。结果:中剂量的骆越壮酒组小鼠负重游泳时间显著长于正常对照组(P0.01)。运动后高、中、低剂量的骆越壮酒组小鼠的血乳酸值与血清尿素氮值均显著低于正常对照组(P0.01),而其肝糖原值显著高于正常对照组(P0.01);高剂量与中剂量骆越壮酒组小鼠的肌糖原值显著高于正常对照组(P0.01)。中剂量骆越壮酒组小鼠常压耐缺氧时间长于正常对照组,差异有统计意义(P0.05),其急性脑缺血时间也显著长于正常对照组(P0.01);中剂量骆越壮酒组小鼠亚硝酸钠中毒存活时间显著长于正常对照组(P0.01)。骆越壮酒对运动后小鼠体内乳酸脱氢酶活性影响不显著(P0.05)。结论:适量的骆越壮酒可以提高小鼠的抗疲劳及耐缺氧能力。     

苦玄参转录组EST-SSR引物开发及群体遗传多样性分析

目的研究18个苦玄参种群的遗传多样性及亲缘关系,为苦玄参的资源评价及开发利用提供依据。方法采用EST-SSR引物开发技术,利用SSR分子标记,分析18个种群的遗传多样性,并基于遗传距离对其进行聚类分析,明确各种群间的亲缘关系。结果从100对EST-SSR标记中,筛选出具有多态性的引物48对。随机抽取20对具有多态性的引物对18个种群进行扩增,共扩增出71个等位基因,平均每对引物3.55个。各引物间多态位点百分数(P)为0～40.7%,平均19.9%;多态信息含量(PIC)为0～0.794 1,平均0.397 7;Shannon信息指数(I)为0～1.814 3,平均0.808 4。观测杂合度(Obs_Het)为0～0.442 3,平均值0.212 7;预期杂合度(Exp_Het)变化范围0～0.826 9,平均值0.455 8。18个种群群内近交系数(Fis)值为-0.095 3～0.663 9,平均0.159 2;总群体内亚群间近交系数(Fit)值为0.062 6～0.858 7,平均0.537 2;遗传分化系数(Fst)为0～0.686,平均0.449 6。基因流(Nm)在0.114 4～0.759 4,平均值为0.306 1。各种群基因多样性指数(Nei)为0～0.401 6、I为0～0.620 9,广西梧州最高,云南普洱龙潭乡最低。云南景洪勐龙镇和云南景洪景哈乡遗传距离最近,仅0.031 9;广西龙州和云南勐海县打洛镇遗传距离最大,为0.963 8。在遗传距离0.321 3处,可将18个种群分成4个群体,其中广西3个种群归入同一群体,云南勐满镇、勐伦镇及勐遮镇归为同一个群体,第3个群体为云南勐海县勐宋乡,其余种群归入第4个群体。结论 18个种群遗传分化水平不一致,各种群杂合度差异较大。种群间Nm较小,群体基因交换不大;群体内存在一定的近交率,种群亲缘关系受地理隔离影响较大。     

骆越壮酒对正常小鼠免疫功能的影响

目的:观察骆越壮酒对正常小鼠免疫功能的影响。方法:小鼠灌胃不同剂量的骆越壮酒28 d后,采用绵羊红细胞(SRBC)诱导小鼠迟发型超敏反应(足跖增厚法)以及ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化实验(MTT法)检测细胞免疫功能;采用抗体生成细胞(PFC)和血清溶血素测定方法测定体液免疫情况;以小鼠碳廓清实验和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验测定单核巨噬细胞免疫功能。结果:骆越壮酒可显著促进小鼠的迟发型超敏反应和脾淋巴细胞的增值能力(P0.01);显著提高SRBC免疫后的正常小鼠抗体生成细胞(PFC)数量和血清溶血素含量(P0.01);显著提高小鼠碳廓清吞噬指数和腹腔巨噬细胞的吞噬率和吞噬指数(P0.01)。结论:骆越壮酒对正常小鼠特异性和非特异性免疫机能均有显著的调节作用。     

瑶药童子益母草与益母草药材多指标成分含量差异评价

目的研究瑶药童子益母草与益母草多指标成分含量差异,并结合含量对品质进行评价。方法采用高效液相色谱法测定瑶药童子益母草与益母草中绿原酸、盐酸益母草碱、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷5种化学成分含量,利用SPSS 25.0软件进行成对样品t检验及单因素方差分析推断各样品间含量差异,主成分分析评价药材品质。结果童子益母草与益母草成对样品t检验结果表明,绿原酸、盐酸益母草碱、芦丁、金丝桃苷、异槲皮苷5种化学成分中芦丁含量呈显著性差异,其余成分无统计学差异;单因素方差分析结果表明,不同产地童子益母草和益母草药材中5种化学成分均存在极显著性差异(P0.01);主成分分析结果显示,益母草得分较高的产地为南宁和玉林,上思县得分最低。结论瑶药童子益母草与益母草含量存在显著差异,南宁和玉林的药材质量较佳,为2种益母草及不同产地益母草间含量的比较提供了数据支持。     

广西武鸣骆越壮酒毒理学及补肾壮阳功效研究

目的:观察广西武鸣骆越壮酒灌胃后的急慢性毒性反应和壮阳功效。方法:急性毒性试验将实验小鼠分成9组,剂量组灌胃给予武鸣骆越壮酒,对照组灌胃给予普通稻花香酒,饲养1周,观察小鼠活动、饮食、毛发和大小便,以及给药前和死亡后体质量变化及死亡情况;实验第8天处死小鼠,解剖观察其主要脏器的变化。慢性毒性试验将实验大鼠共80只分成4组,剂量组灌胃给予武鸣骆越壮酒,对照组灌胃给予普通稻花香酒,连续给药3个月;每天观察大鼠的行为表现、粪便性状及其他症状体征;每周测体重一次,根据体重变化调整药量。给药个3月后每组取12只(雌雄各6只)大鼠,进行血常规检查,包括红细胞计数(RBC)、白细胞计数(WBC)、血小板计数(PLT)、血红蛋白(Hgb)以及血生化检查,包括碱性磷酸酶(ALP)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和总胆红素(TB);解剖取出心、肝、脾、肺、肾进行病理学检查;停药1月后,每组剩余8只大鼠进行血生化和病理学检查,组间进行t检验以判断差异。另外,取50只小鼠进行分组,研究骆越壮酒对"阳虚"证小鼠的影响;取60只大鼠进行分组,研究骆越壮酒对大鼠阴茎勃起潜伏期的影响;取80只大鼠进行分组,研究骆越壮酒对其交配行为的影响。对结果进行组间比较t检验。结果:给药后,所有受试动物毛色光洁,饮食和大小便正常,鼻、眼、口腔无异常分泌物;各组小鼠灌胃后均出现先兴奋后抑制现象;半数致死量LD_(50)为26.39 mL/kg;与对照组相比,各剂量组的RBC、WBC、PLT、Hgb、ALP、AST、ALT和TB均无差异,并在停药1个月后仍保持一致;解剖观察,武鸣骆越壮酒各组心、肝、脾、肺、肾等主要器官的病理改变与普通稻花香酒组相比,差异无统计学意义(P0.05)。骆越壮酒可提高阳虚小鼠的体温,对阳虚小鼠的体重没有影响,可显著增大阳虚证小鼠的低温游泳存活时间。此外,骆越壮酒可显著缩短去势大鼠的阴茎勃起潜伏期、大鼠第一次扑捉雌鼠的时间和第一次射精时间,并增大大鼠20min内射精次数。结论:广西武鸣骆越壮酒适量饮用具有补肾壮阳功效且无急性和慢性毒性作用。     

基于防己主要活性成分的品质区划及环境影响因素分析

目的:基于防己主要活性成分,研究防己品质区划及环境影响因素,为防己优质产区的确定和影响含量的主导环境因子提供参考依据。方法:基于防己主要活性成分粉防己碱和防己诺林碱及产地环境因子,采用偏最小二乘法回归分析(PLS),主成分分析(PCA)研究防己品质区划及其环境影响因素。结果:防己诺林碱含量与土壤pH,年均温呈较强正相关,与纬度呈较强负相关;粉防己碱含量与土壤pH呈较强正相关,与经度和年降雨量呈较强负相关;总含量与土壤pH,年均温呈较强正相关,与年降雨量及经度和纬度呈较强负相关。主成分分析结果表明,针对品质形成,50个产区可划分为4个类群,其中广东始兴县、安徽歙县、福建松溪县、广东南雄市、湖南湘乡市防己主成分含量得分较高,为品质形成较佳区域。结论:土壤pH,年均温,年降雨量,经度和纬度为影响防己药材主要活性成分的主导环境因子。品质较优防己生产区为广东始兴县、安徽歙县、福建松溪县、广东南雄市、湖南湘乡市。