复肾功方对慢性肾衰竭大鼠Wnt/β-catenin信号途径的影响

目的:观察复肾功方对慢性肾衰竭(CRF)大鼠分泌型糖蛋白(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)信号途径的影响,探讨其减少细胞外基质(ECM)的沉积,抗肾小管间质纤维化(TIF)及延缓CRF进展的作用机制。方法:将55只雄性SD大鼠随机将分为正常组,模型组,复肾功方低、中、高剂量组,每组11只。正常组常规饲养,其余4组大鼠则用腺嘌呤含量为0.5%的饲料建立CRF模型,连续喂养21 d。造模成功后所有大鼠改用常规饲料,正常组和模型组大鼠给予20 mL·kg~(-1)生理盐水灌胃;复肾功方低、中、高剂量组大鼠则按体质量分别灌胃4,8,16 g·kg~(-1)复肾功方水煎剂,1次/d,连续灌胃30 d。实验结束后,马松(Masson)染色观察大鼠肾组织病理形态学变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测肾组织Wnt4,β-catenin mRNA的表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾组织Wnt4,β-catenin,基质金属蛋白酶-7(MMP-7)蛋白的表达,免疫组化检测肾组织Wnt4,β-catenin蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肾小管间质纤维化明显增多,肾组织Wnt4,β-catenin mRNA及Wnt4,β-catenin,MMP-7蛋白的表达均显著升高(P0.01);与模型组比较,复肾功方各组大鼠肾组织Wnt4,β-catenin mRNA及Wnt4,β-catenin,MMP-7蛋白表达均明显降低(P0.05)。结论:复肾功方减少ECM的沉积、抗肾小管间质纤维化、延缓CRF进展可能与抑制Wnt/β-catenin信号途径的激活有关。     

复肾功方对慢性肾衰竭大鼠p38 MAPK信号通路的影响

目的:观察复肾功方对慢性肾衰竭(CRF)大鼠p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号通路的影响,探讨其减轻肾组织炎症反应及延缓肾间质纤维化发展的作用机制。方法:将55只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,复肾功方低、中、高剂量组,每组11只。正常组常规饲养,其余4组大鼠食用含0. 5%腺嘌呤饲料制造CRF模型,连续造模21 d。造模成功后,所有大鼠改用常规饲料。正常组和模型组灌胃生理盐水20 mL·kg-1,复肾功方低、中、高剂量组分别以4,8,16 g·kg-1灌胃水煎剂,每日1次,连续30 d。实验结束后,Masson染色观察肾间质纤维化程度,免疫组化检测肾脏单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的表达情况,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾脏磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-p38 MAPK)及转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白的表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠肾间质胶原沉积明显增多,肾脏组织MCP-1平均光密度值和p-p38 MAPK,TGF-β1蛋白表达水平均明显升高(P0. 05);与模型组比较,复肾功方各剂量组肾间质胶原沉积明显减少,肾脏MCP-1平均光密度值及p-p38 MAPK,TGF-β1蛋白表达水平均明显降低(P0. 05)。结论:复肾功方能有效抑制CRF大鼠肾脏组织相关炎症因子表达,从而减轻肾组织炎症反应,延缓肾间质纤维化的发展,其机制可能与抑制p38 MAPK信号通路的激活有关。     

复肾功方对慢性肾衰竭大鼠Klotho蛋白及mRNA表达的影响

目的探讨复肾功方(Fushengong decoction,FSGD)对慢性肾衰竭(Chronic renal failure,CRF)大鼠Klotho蛋白及mRNA表达的影响。方法将55只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组及复肾功方低、中、高剂量组,每组11只。采用腺嘌呤含量为0.5%的饲料建立CRF模型,连续喂养21 d。模型复制成功后,所有大鼠改用常规饲料喂养;复肾功方低、中、高剂量组按照体质量分别以含生药4、8、16 g·kg^-1的复肾功方水煎剂灌胃给药,正常组及模型组给予同体积生理盐水,给药体积20 mL·kg^-1·d^-1,每日1次,连续灌胃给药30 d。实验结束后,取各组大鼠血清检测血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)的含量;HE染色法检测大鼠肾脏组织的病理形态学变化;采用Western Blot法和免疫组化法检测肾脏组织Klotho蛋白的表达;Real-time PCR法检测肾脏组织Klotho mRNA的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血清SCr、BUN的含量均显著升高(P<0.01),肾脏组织病理损害明显,肾脏Klotho蛋白及mRNA的表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,复肾功方各剂量组大鼠的肾脏组织病理损害明显减轻,血清SCr、BUN含量显著降低(P<0.05,P<0.01),大鼠肾脏组织Klotho蛋白及mRNA的表达明显升高(P<0.05)。结论复肾功方能够降低CRF大鼠血清SCr、BUN的含量,减轻肾损伤,可能与上调肾脏组织的Klotho蛋白及mRNA的表达有关。