藏药波棱瓜子总木脂素对大鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用及机制探讨

目的:研究藏药波棱瓜子总木脂素对大鼠慢性酒精性肝损伤的保护作用及其机制。方法:60只雄性Wistar大鼠按体质量随机分成正常对照组、模型组、易善复(95 mg/kg)阳性对照组及波棱瓜子总木脂素高(400 mg/m L)、中(200 mg/m L)、低(100 mg/m L)剂量组。各给药组每日上午9点给予2 m L相应药物,0.5 h后,除正常对照组外各组给予56度白酒灌胃,连续造模8 w后,测定各组大鼠血清ALT、AST及肝脏GSH-Px、MDA、SOD、GSH、CAT、TG、ADH、ALDH2水平。荧光定量PCR法测定大鼠肝微粒体CYP2E1 mRNA表达,蛋白质印迹法(Western blot)测定肝微粒体CYP2E1蛋白表达。观察肝组织病理学改变。结果:与模型组比较,除低剂量组TG及高剂量组GSH-Px差异无统计学意义(P>0.05)外,波棱瓜子总木脂素各组大鼠血清ALT、AST水平显著降低;肝组织MDA、TG、ADH水平及肝微粒体CYP2E1 mRNA和蛋白表达显著降低;肝组织SOD、GSH、GSH-Px、CAT、ALDH2水平显著升高(P<0.05或P<0.01)。HE显示与模型组比较波棱瓜子总木脂素各组肝组织破坏程度较轻。结论:藏药波棱瓜子总木脂素对大鼠慢性酒精性肝损伤有保护作用。     

藏药波棱瓜子总木脂素对大鼠肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的通过研究藏药波棱瓜子总木脂素(TLHPS)对大鼠肝星状HSC-T6细胞的增殖抑制作用及诱导其凋亡的作用,进一步探讨TLHPS抗肝纤维化的作用机制。方法实验分为对照组,TLHPS 10、20、30、40μg/mL组,阳性药秋水仙碱0.1μg/mL组。用加入各组药物的培养基分别培养HSC-T6细胞24、48、72 h,采用CCK8法检测各组细胞24、48、72 h的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率及细胞周期,Western blotting法检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax、核转录因子-κB(NF-κB)的表达水平。结果与对照组相比,TLHPS 10、20、30、40μg/mL组对HSC-T6细胞24、48、72 h时的增殖抑制率明显增高(P0.01),且各组HSC-T6细胞早期凋亡率与晚期凋亡率明显升高(P0.05,0.01),G0/G1期细胞数明显增多(P0.01),G2/M期细胞数无明显差异(P0.05),S期细胞数明显减少(P0.01)。Western blotting结果显示,与对照组相比,TLHPS10、20、30、40μg/mL组Bcl-2蛋白表达明显降低(P0.05,0.01),TLHPS 40μg/mL组Bax蛋白表达明显升高(P0.01),TLHPS 20、30、40μg/mL组NF-κB表达明显降低(P0.01)。结论 TLHPS抗肝纤维化的作用机制可能是通过降低Bcl-2、NF-κB的表达抑制肝星状细胞增殖并诱导其凋亡。     

美洲大蠊不同炮制品对CCl_4致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探索不同炮制方法下美洲大蠊对CCl_4致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法采用CCl_4致小鼠急性肝损伤模型,各实验组按炮制给药方法分为空白组、模型组、原药组、清炒组、盐炙组、麸炒组、米炒组、联苯双酯组。连续给药1周后,除空白组外,各实验组腹腔注射0.2%CCl_4橄榄油溶液,禁食不禁水24 h后,摘除小鼠眼球取血,分离血清。测定血清谷草转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)的活性;取肝脏测肝脏系数,固定于10%的甲醛溶液中,进行肝脏病理组织学考察。然后采用索式提取器测定各炮制组油脂含有量,采用考马斯亮蓝法测定各炮制组蛋白质含有量,采用苯酚-硫酸分光光度法测定各炮制组多糖含有量。结果与模型组比较,各炮制组与原药组均能显著降低小鼠肝脏系数,各炮制组能显著降低小鼠血清中AST、ALT水平(P0.01),而原药组对小鼠血清中AST、ALT水平的降低与模型组比较不具显著性差异(P0.05),HE染色表明麸炒组病变最轻。与原药组比较,各炮制组油脂含有量下降;蛋白质含有量以盐炙组最低,原药组最高;多糖含有量在盐炙组、清炒组均较高,在原药组、麸炒组、米炒组均较低。结论美洲大蠊各炮制品均能对CCl_4致小鼠急性肝损伤起保护作用,以米炒、麸炒组效果最佳,原药组效果最差。     

藏药波棱瓜子总木脂素对四氯化碳致大鼠肝纤维化的保护作用及机制探讨

该实验探讨藏药波棱瓜子总木脂素对四氯化碳(CCl_4)致大鼠肝纤维化的保护作用及其作用机制。将SD大鼠48只随机分为空白对照组、模型组、总木脂素低、中、高剂量(100,200,400 mg·kg~(-1))组、阳性药甘利欣(25 mg·kg~(-1))组,每组8只。空白组正常饲养,模型组、总木脂素低、中、高剂量组以及甘利欣组大鼠均隔2~3 d皮下注射3 m L·kg~(-1)含40%CCl_4的橄榄油溶液连续造模8周。期间空白组、模型组灌胃等量生理盐水2 m L,总木脂素低、中、高剂量组、甘利欣组灌胃给药相应剂量。8周后最后一次造模6 d后处死大鼠。生化分析法测定各组大鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)含量。ELISA法检测血清肝纤维化指标转化生长因子-β_1(TGF-β_1)、透明质酸(HA)、羟脯氨酸(HYP)、超氧化物歧化酶(SOD)的水平,肝组织进行HE和Masson胶原染色,进行病理分析并评分。结果显示与模型组大鼠比较,总木脂素组大鼠血清中ALT,AST,ALP,TGF-β_1,HA和HYP水平显著降低(P0.05,P0.01),肝脏组织匀浆液中SOD浓度水平明显升高(P0.05,P0.01),肝脏病理损伤明显减轻(P0.05,P0.01),肝纤维化评分明显降低(P0.05,P0.01)。通过以上实验说明波棱瓜子总木脂素能有效减轻CCl_4致大鼠肝纤维化的肝脏损伤,降低肝纤维化程度,其机制可能与其保肝降酶抑制TGF-β_1表达有关。     

中药美洲大蠊的生药鉴别研究

目的寻找快速鉴别美洲大蠊的方法,并鉴别不同来源美洲大蠊药材的真伪性。方法采用显微鉴别和薄层色谱对不同来源的美洲大蠊药材进行真伪性考察。结果美洲大蠊粉末显微鉴别局部特征明显,可明显观察到足部碎片,刚毛,体表碎片,翅部碎片。以正丁醇-冰醋酸-水-甲醇(19∶5∶5∶3)为展开剂,0. 5%茚三酮105℃共热,15批次不同来源的美洲大蠊药材所得薄层色谱点斑点清晰,在相同位置有5个共有斑点。结论粉末显微鉴别和薄层色谱可作为快速鉴别美洲大蠊的方法,15批次不同来源的美洲大蠊药材均为真品。