壳聚糖微胶囊包埋肝细胞生理功能的维护

背景: 乙酰化率15.3%的壳聚糖在细胞生理条件下的溶解性差,限制了细胞的微囊化过程.目的: 用乙酰化率15.3%的壳聚糖制备乙酰化率50%的壳聚糖,探讨其在细胞生理条件下与异丁烯酸-羟乙基异丁烯-甲基丙烯酸甲酯三元共聚物制备微胶囊包埋肝细胞的可行性.设计、时间及地点: 对照观察实验,于2006-01/10在暨南大学附属第一医院中心实验室完成.材料: 乙酰化率15.3%的壳聚糖由Sigma-Aldrich公司提供,肝细胞采用改良的两步原位胶原蛋白酶灌注法从体质量250～300g的雄性Wistar鼠中分离获取.方法: 微囊化肝细胞利用乙酰化率50%的壳聚糖和三元共聚物在25℃、无菌条件下凝聚制备.主要观察指标: 微胶囊的渗透性以空微胶囊中荧光葡聚糖(FITC-葡聚糖)的渗透率表示.微囊化肝细胞的稳定性通过机械剪切破碎实验测定.微囊化肝细胞白蛋白的合成能力采用ELISA测定.尿素合成能力采用检测试剂盒(Sigma Diagnostic)在540nm波长下比色测定.细胞色素P450活性使用共聚焦激光显微镜测定7-乙氧基试卤灵(细胞色素P450IA1的底物)O位脱烷基化产物的荧光强度来实现定量.测定均以肝细胞平面培养为对照.结果: ①随着乙酰化率50%的壳聚糖质量浓度的增加,Mr20000和40000荧光葡聚糖的渗透率呈下降趋势.Mr70000荧光葡聚糖渗透率很低,随乙酰化率50%的壳聚糖质量浓度变化不明显.②包埋肝细胞密度为2×109>L-1时,震荡24h的破碎率仅为6%左右,未包埋肝细胞微胶囊在相同震荡条件下,4h全部破碎.③培养第1天1×106个细胞中尿素合成达到30μmol/d,明显高于15μmol/d的平面培养实验结果.培养7d后,微囊化细胞和平面培养细胞尿素的合成能力比较接近.④培养前3d 1×106个细胞中白蛋白达到10μg/a左右,培养7d后为5μg/d左右,整个培养过程中均高于平面培养的结果.⑤培养第1天微囊化肝细胞的细胞色素P450活性比平面培养高出近8倍,且在培养1周后细胞色素P450活性仍可以保持第1天培养的50%以上.结论: 生理条件下基于乙酰化率50%的壳聚糖构建的微胶囊在培养过程中有较好的渗透性及结构稳定性.与体外表面培养实验相比,改性后的壳聚糖微胶囊有利于支持肝细胞的体外功能.     

细胞生理条件下壳聚糖微胶囊包埋肝细胞

从乙酰化率15．3％的市售壳聚糖（Fifteen N-acetylated chitosan，FNC）出发制备酰化率50％的壳聚糖衍生物（Half N-acetylated chitosan，HNC），探讨其在细胞生理条件下与异丁烯酸（Methacrylic acid，MAA）-羟乙基异丁烯（Hydroxyethyl methacrylate，HEMA）-甲基丙烯酸甲酯（Methyl methacrylate，MMA）三元共聚物（MAA-HEMA-MMA）制备微胶囊包埋肝细胞的可行性。微囊化细胞实验结果表明，与体外表面培养实验相比，生理条件下基于HNC构建的三维正电微环境有利于支持肝细胞的体外功能，且制备的微胶囊在培养过程中具有较好的渗透性及结构稳定性。     

葛根素在乙醇／硫酸铵两水相体系中的分配特性

目的研究葛根素在乙醇／硫酸铵两水相体系中的分配特性及其影响因素。方法变化体系中乙醇的浓度、添加不同分子量及浓度的PEG、改变体系pH值。结果葛根素的分配系数与回收率和体系中乙醇的浓度成正比，小分子量的PEG更有利于葛根素在上相的分配，增加pH值，对提高葛根素的分配系数有正面影响。结论最佳分配体系是向组成为乙醇（21％）／硫酸铵（20％）的体系中添加5％（W／W）的PEG400，最佳萃取环境为pH=7．8。     

高效液相法测定复方肿节风喷雾剂中异秦皮靛的含量

复方肿节风喷雾剂是由肿节风、板蓝根、鹅不食草等提取加工制成的纯中药制剂。具有清热利咽，消肿止痛作用，主治热毒壅盛所致的咽喉肿硝，声哑失音或急性咽喉炎属风热者。肿节风为方中主药，异秦皮靛是其抗菌消炎的主要活性成分。现以异秦皮靛为指标，建立复方肿节风喷雾剂专属性的含量测定方法。