四君子汤中总多糖、总黄酮和总皂苷的纯化工艺研究

目的:建立四君子汤中总多糖、总黄酮和总皂苷的最佳纯化工艺。方法:以D-葡萄糖为对照品,采用苯酚-浓硫酸比色法测定四君子汤中总多糖的含量;以芦丁为对照品,采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定四君子汤中总黄酮的含量;以甘草酸为对照品,采用1%香草醛乙酸-高氯酸比色法测定四君子汤中总皂苷的含量。分别以总多糖、总黄酮和总皂苷含量为指标,采用单因素试验及正交试验法优选四君子汤中总多糖、总黄酮及总皂苷的最佳纯化工艺。结果:总多糖的最佳纯化工艺是醇浓度为85%,浓缩密度1∶1.25,静置时间6 h,测得总多糖含量为118.93 mg/g;总黄酮的最佳纯化工艺是醇浓度为75%,浓缩密度为1倍,静置时间为6 h,测得总黄酮含量为15.40 mg/g;总皂苷的最佳纯化工艺是浓缩密度1∶1,醇浓度85%,静置时间6 h,测得总皂苷含量为9.466 mg/g。结论:优选出的最佳纯化工艺稳定可行,为四君子汤的质量评价提供科学依据。     

委陵菜HPLC指纹图谱及多指标含量测定研究

目的建立委陵菜的指纹图谱及多指标含量测定方法,为委陵菜的质量标准提升提供实验依据。方法采用HPLC法,色谱柱Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温25℃;进样量10μL;检测波长260 nm;建立10批委陵菜的指纹图谱,用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2004版)进行评价,聚类分析将10批药材分为2类;建立同时测定委陵菜药材中没食子酸、槲皮素及山柰酚3种成分的含量测定方法。结果建立了委陵菜的HPLC指纹图谱,共标定了12个共有峰;没食子酸、槲皮素和山柰酚线性关系良好,相关系数(r)均大于0.999。精密度、稳定性、重复性的RSD均小于3%,平均回收率分别为97.44%、97.64%、99.19%。结论建立的委陵菜的指纹图谱及多指标含量测定方法专属性强、重复性好,能有效地控制委陵菜的内在质量,为提高委陵菜的质量评价方法提供参考。     

基于网络药理学的四君子汤治疗胃炎的作用机制研究

目的通过网络药理学预测四君子汤治疗胃炎的主要活性成分和作用靶点,探讨其多成分-多靶点-多通路的潜在作用机制。方法通过中医药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)数据库收集四君子汤及其中4味中药党参、白术、茯苓、甘草的化学成分,经口服吸收率(OB)、类药性(DL)、半衰期(HL)3个条件筛选得到药物的有效成分,通过SwissTargetPrediction数据库进行有效成分靶点预测;同时从TTD、Drugbank和DisGeNET数据库对胃炎的靶点进行检索及筛选;成分靶点与疾病靶点映射后使用Cytoscape 3.2.1软件构建药物有效成分-靶点蛋白相互作用网络,使用String数据库绘制靶点蛋白-靶点蛋白相互作用网络;对靶点蛋白利用DAVID数据库进行GO分析和KEGG分析,构建核心有效成分-核心靶点-代谢通路网络图。结果从四君子汤中筛选出68个化学成分,涉及治疗胃炎的10个靶点;GO分析结果表明其涉及单孢素代谢过程、杂环代谢过程、药物代谢过程、药物分解过程、类固醇代谢过程等9个生物过程,涉及氧结合、单加氧酶活性、氧化还原酶活性等10个分子功能,包括细胞器膜、内质网膜等6个细胞组成;KEGG分析结果表明其可能通过药物代谢-细胞色素P450、亚油酸代谢、细胞色素P 450对外源性物质代谢的影响、神经活性配体与受体的相互作用、化学致癌、类固醇激素生物合成、视黄醇代谢7个信号通路治疗胃炎。结论四君子汤通过多靶点、多通路治疗胃炎,为今后分子机制的研究奠定一定的基础。     

GnRHa治疗对特发性中枢性性早熟和快速进展型早发育儿童的远期影响

目的探讨促性腺激素释放激素类似物(GnRHa)长期治疗对中枢性性早熟(CPP)和快速进展型早发育(EFP)患儿终身高获益、性腺功能、体重指数(BMI)等远期影响,探讨身高获益的影响因素及早期预判指标。方法随访GnRHa治疗2年以上达终身高的50例CPP及44例EFP患者(女性80例,男性14例),检测治疗前、停治时及达终身高时身高、骨龄、BMI、促性腺激素、子宫卵巢容积(女)、睾丸容积(男)等参数,跟踪女性停药后月经、男性遗精等远期影响。结果(1)女孩:终身高获益GnRHa+生长激素(GH)组较GnRHa治疗组高[(10.69±5.73)cm对(7.42±5.76)cm,P<0.05],初治时身高受损>5 cm比≤5 cm组获益多[(10.65±3.32)cm对(6.51±3.40)cm,P<0.01];超重/肥胖比例初治、停治、达终身高时有减无增。血清LH水平、子宫卵巢容积停治时较治疗前明显下降,停治后半年至1年明显增加;停药后3年100%女孩出现初潮,3年内95%周期达规律。(2)男孩:身高获益GnRHa+GH组与GnRHa治疗组分别为(8.78±5.2)和(7.99±4.82)cm,血清LH水平、睾丸容积停治时较治疗前明显下降,停治后半年至1年明显增加。结论女孩CPP和EFP患儿经GnRHa治疗能明显改善终身高,身高受损严重者身高获益好,可作为身高获益的预判指标。     

浅析喉癌患者手术后护理

目的 探讨喉癌患者术后的护理减少并发症的发生.方法 通过对喉癌患者术后伤口、饮食及心理护理,促使患者早日康复,预防并发具有重要的意义.结果 通过对喉癌患者术后进行护理,有利于患者早日康复,避免并发症发生.结论 针对患者的病情、心理特性.手术后要注意和需要解决的护理问题,从而采取不同的护理措施,有效预防并发症发生.     

基于网络药理学的四君子汤治疗2型糖尿病的作用机制研究

目的通过网络药理学预测四君子汤治疗2型糖尿病(T2DM)的主要活性成分和作用靶点,探讨其多成分-多靶点-多通路的潜在作用机制;并选取AMPK信号通路中的Ins R、PI3K进行动物实验验证。方法通过中医药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)、文献挖掘和本课题组已有研究收集四君子汤及其4味中药党参、白术、茯苓、甘草的化学成分,经口服生物利用度(OB)、类药性(DL)、半衰期(HL)3个条件筛选得到药物的有效成分,通过Swiss Target Prediction数据库进行有效成分靶点预测;同时从TTD、Drugbank和Dis Ge NET数据库对T2DM的靶点进行检索及筛选;成分靶点与疾病靶点映射后使用Cytoscape3.2.1软件构建药物有效成分-靶点蛋白相互作用网络,对该网络进行拓扑学分析筛选节点自由度(degree)≥平均自由度的节点得到核心有效成分-核心靶点网络,同时使用String数据库绘制核心靶点蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络;对核心靶点基因利用DAVID数据库进行GO分析和KEGG分析,构建核心有效成分-核心靶点-代谢通路网络图,探讨四君子汤治疗T2DM的潜在作用机制。采用系统对接网站进行相关度前3蛋白对相关度前5成分的分子对接。并进一步采用动物实验进行验证:选取SD大鼠,运用高糖高脂饲料联合小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导T2DM模型,5.65 g/kg四君子汤ig给药28 d,检测各组大鼠的空腹血糖(FBG)及口服葡萄糖耐量(OGTT),RT-PCR法检测AMPK信号通路中Ins R、PI3Km RNA的表达量。结果从四君子汤中筛选出113个化学成分,涉及治疗T2DM的47个靶点;根据节点自由度≥平均自由度,筛选出核心成分22个,核心靶点27个;GO分析结果表明其涉及血糖稳态、脂肪组织发育的正调控等7个生物过程,涉及类固醇激素受体活化、药物结合等4个分子功能,包括质膜、核常染色质2个细胞组成;KEGG分析结果表明其可能通过AMPK信号通路、PPAR信号通路、胰岛素抵抗等14个信号通路治疗糖尿病。分子对接60%成分具有强烈的结合活性,40%成分具有较强的结合活性。四君子汤可显著改善T2DM大鼠OGTT(P<0.001),同时降低FBG(P<0.01),显著升高Ins R、PI3K mRNA(P<0.001)的表达量,验证了网络药理学的部分预测结果。结论四君子汤通过多靶点、多通路治疗T2DM,为其分子机制的研究奠定一定的基础。     

四君子汤调节2型糖尿病小鼠糖脂代谢紊乱的药效学研究

目的探讨四君子汤调节高糖高脂饮食联合腹腔注射(i.p.)小剂量链脲佐菌素(STZ)致2型糖尿病(T2DM)小鼠糖脂代谢紊乱的药效学变化。方法将60只ICR小鼠按血糖随机分为空白组、模型组、阳性组、四君子汤高剂量(SJZT-H)、四君子汤中剂量(SJZT-M)和四君子汤低剂量(SJZT-L)组,采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射小剂量STZ诱导建立小鼠T2DM胰岛素抵抗模型,观察小鼠的一般情况,探讨四君子汤对T2DM小鼠体重(W)、肝脏指数、口服葡萄糖耐量(OGTT)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、总胆固醇(T-CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)、和肝糖原(Liver Glycogen,LG)含量的影响。结果四君子汤各给药组均可显著提高T2DM小鼠的OGTT,显著降低其FBG、FINS、LG、HOMA-IR;四君子汤高中剂量组可显著降低2型糖尿病小鼠的T-CHO以及TG。结论四君子汤能显著改善2型糖尿病小鼠的胰岛素抵抗,促进胰岛素功能的恢复,同时可以调节糖脂代谢紊乱。     

多指标一测多评-响应曲面法优选蜜炙甘草的最佳炮制工艺

目的基于响应曲面法,应用HPLC法定量测定,从多指标一测多评、综合评价的角度建立蜜炙甘草的最佳炮制工艺。方法采用HPLC定量分析,以甘草苷、甘草素、甘草查耳酮A和甘草次酸的含量作为考察指标;采用响应曲面设计法考察甘草加蜜量、浸泡焖润时间、炒制温度、炒制时间对蜜炙甘草炮制工艺的影响,优选出蜜炙甘草最佳炮制工艺。结果色谱柱为Diamonsil C18(2)(200 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱:0～20 min,12%～32%乙腈;20～45 min,32%～70%乙腈;45～75 min,70%～97%乙腈;检测波长260 nm,柱温20℃,体积流量1 mL/min;以甘草苷为内标物,测定并计算得到甘草素、甘草查耳酮A、甘草次酸与其的相对校正因子分别为0.56、0.64、1.42;优选的蜜炙甘草最佳炮制工艺为加蜜量1/4,浸泡焖润时间15 min,炒制锅底温度为160℃,炒制时间13 min。结论该实验含量测定方法学考察结果符合要求,采用响应曲面法优选的蜜炙甘草的最佳炮制方案是可行的,为制定蜜炙甘草的质量标准和现代研究提供了科学依据。     

四君子汤调节2型糖尿病小鼠糖脂代谢紊乱的活性部位筛选研究

目的筛选四君子汤调节2型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus,T2DM)小鼠糖脂代谢紊乱的活性部位。方法采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射小剂量(40 mg·kg^-1)链脲佐菌素(STZ)诱导建立T2DM小鼠胰岛素抵抗(Insulin resistance,IR)模型。将雄性ICR小鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组(盐酸二甲双胍,0.03 g·kg^-1)、SJZT组(四君子汤水提液,8.48 g·kg^-1)、SJZT-U组(四君子汤水提醇沉液,8.48 g·kg^-1)及SJZT-D组(四君子汤水提醇沉物,8.48 g·kg^-1),每组10只。灌胃给药,每天1次,连续28 d。每周测定小鼠体质量;采用血糖仪检测小鼠空腹血糖(FBG);采用ELISA试剂盒测定血清空腹胰岛素(FINS)水平及肝脏中肝糖原(LG)含量;计算IR指数(HOMA-IR);灌胃葡萄糖溶液(1 g·kg^-1)进行口服葡萄糖耐量(OGTT)检测,计算血糖-时间曲线下面积(AUC);采用生化试剂盒检测血清中总胆固醇(T-CHO)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)及甘油三酯(TG)含量。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、AUC、HOMA-IR及FBG、FINS、T-CHO、TG含量均明显升高(P<0.01),HDL-C、LG含量明显降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,各给药组小鼠的AUC、FINS含量明显降低(P<0.05,P<0.01);SJZT及SJZT-D组小鼠的FBG、HOMA-IR明显降低(P<0.01),LG含量明显升高(P<0.01);SJZT及SJZT-U组小鼠的T-CHO含量明显降低(P<0.05);SJZT组小鼠的TG含量明显降低(P<0.05)。结论四君子汤及其不同提取部位能调节T2DM小鼠的糖脂代谢紊乱,其降糖有效部位为水煎液及水提醇沉物,调脂有效部位为水煎液及水提醇沉液。