清心开窍方3种提取部位改善阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力的机制研究

目的探讨清心开窍方3种提取部位（皂苷成分、挥发油成分、多糖成分）改善阿尔茨海默病（Alzheimersdisease,AD）大鼠学习记忆能力及其机制研究。方法动物实验采用对照观察法。雄性SD大鼠56只,称体重后按随机数字表法分为7组：正常组、假手术组、模型组、安理申组、皂苷组、挥发油组及多糖组,每组8只。采用双侧海马注射Aβ1－402μL（2.5μg/μL）制备AD大鼠模型,造模后第2天开始灌胃,连续灌胃2周（每天上午10：00开始）,皂苷组、挥发油组、多糖组剂量分别为9mL/（kg?d）（2.1g/mL）、3.33mL/（kg?d）（5.7g/mL）、8.33mL/（kg?d）（2.28g/mL）,安理申组给药剂量为1.67mg/（kg?d）,对照组和模型组予等体积生理盐水。2周后,采用水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力,采用免疫组化法检测AD大鼠皮层及海马区突触结合蛋白-1（Syt-1）、白介素-1β（IL-1β）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）及β-淀粉样蛋白前体蛋白（β-APP）表达。结果清心开窍方3种提取部位能改善AD大鼠学习记忆能力;定位航行试验（逃避潜伏期）,多糖组大鼠逃避潜伏期与模型组比较,差异无统计学意义（P>0.05）,其余治疗组大鼠逃避潜伏期均缩短（P<0.05）;与安理申组比较,各有效成分组大鼠逃避潜伏期均延长（P<0.05,P<0.01）。空间搜索试验（穿台次数）,与模型组比较,安理申组及皂苷组大鼠平均穿台次数显著增加（P<0.05）;与安理申组比较,有效成分组大鼠平均穿台次数显著减少（P<0.01）。与假手术组比较,模型组皮层及海马区Syt-1、IL-1β、GFAP及β-APP表达水平升高（P<0.01）;与模型组比较,皂苷组、挥发油组皮层Syt-1表达增加,挥发油组、多糖组皮层IL-1β表达增加,3种提取部位组海马区GFAP表达增加（P<0.05,P<0.01）,其余治疗组皮层及海马区Syt-1、IL-1β、GFAP及β-APP表达水平降低,差异有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;与安理申组比较,皂苷组、挥发油组、多糖组皮层与海马区Syt-1、IL-1β、GFAP及β-APP表达显著增加（P<0.05,P<0.01）。结论清心开窍方3种提取部位可能是通过降低大鼠皮层及海马区Syt-1、IL-1β、GFAP及β-APP表达发挥抗AD的作用。     

清心开窍方有效成分对AD大鼠学习记忆能力及其海马区Bax、Bcl-2、Caspase-3和βAPP表达的影响

目的探讨清心开窍方中皂苷、挥发油及多糖有效成分对淀粉样蛋白(Aβ)1-40海马注射诱导痴呆(Alzheimer's disease,AD)大鼠海马区Bax、Bcl-2、Caspase-3及βAPP表达的影响。方法选取112只雄性SD大鼠,随机分为7组,每组16只,分别为正常组、假手术组、模型组、安理申组、皂苷组、挥发油组、多糖组。采用海马注射Aβ_(1-40)诱导AD大鼠模型。造模后第2天开始灌胃,正常组、假手术组、模型组给予等量双蒸水灌胃,安理申组[盐酸多奈哌齐片,1.67 mg/(kg·d)]、皂苷组[9 m L/(kg·d)]、挥发油组[3.33 m L/(kg·d)]、多糖组[8.33 m L/(kg·d)]灌胃,每天1次,连续2周(上午10:00)。灌胃结束后,采用Morris水迷宫测试大鼠的空间学习记忆能力;采用TUNEL染色检测海马CA1区细胞凋亡;采用免疫组化、实时定量荧光PCR及WB法检测AD大鼠海马区Bax、Bcl-2、Caspase-3及βAPP表达。结果造模前各组大鼠同一时间点的逃避潜伏期、穿台次数比较,差异均无统计学意义(P0.05),且逃避潜伏期随时间推移逐渐缩短。造模后,与模型组比较,除挥发油组、多糖组外,安理申组、皂苷组逃避潜伏期均缩短,穿台次数显著增多(P0.05,P0.01);与模型组比较,皂苷组、挥发油组、多糖组大鼠海马CA1区凋亡细胞数量明显减少(P0.05,P0.01);Bcl-2表达上调,Bax、Caspase-3、βAPP表达下调,Bcl-2/Bax比值明显提高(P0.05,P0.01)。结论清心开窍方3种有效成分能不同程度地改善AD大鼠的学习记忆能力,其机制可能与降低海马区Bax、Caspase-3及βAPP表达,提高Bcl-2表达,抑制AD大鼠海马区内细胞凋亡有关。