荧光定量PCR检测异尖线虫类病原体

目的运用荧光定量PCR法检测异尖线虫类病原体。方法于鱼类内脏中检获6种异尖线虫类幼虫:抹香鲸异尖线虫、简单异尖线虫、内弯对盲囊线虫、带鱼针蛔线虫、灰海鳗对盲囊线虫和台湾海峡鱼类中一优势种对盲囊线虫。提取各虫体DNA,PCR扩增ITS-2序列,测序并进行数据库比对。依据测序结果设计特异引物,常规PCR检验引物特异性。将ITS-2序列扩增产物回收、纯化后经T克隆转入大肠埃希菌DH5α,提取重组质粒,鉴定后作为标准品模板建立荧光定量PCR标准曲线,并做敏感性和重复性试验。结果构建的荧光定量PCR标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关系数均在0.998以上。重复性实验中,6种虫体对应的变异系数(cv)最小值为0.18%,最大值为2.80%,试验间平均cv最小值为0.55%,最大值为1.94%,无非特异性扩增,溶解曲线的特异性和重复性良好。灵敏度实验中,可检出的最低模板浓度为1×102拷贝/μl,比常规PCR灵敏度高100倍。结论初步建立了SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测异尖线虫类病原体的方法 。     

针刺疗法联合尼莫地平片治疗血管性痴呆临床研究

目的：观察针刺疗法联合尼莫地平片治疗血管性痴呆的临床疗效。方法：选取90 例血管性痴呆患者,按随机数字表法分为对照组及研究组各45 例。对照组给予口服尼莫地平片治疗,研究组在对照组基础上加用针刺疗法。比较2 组治疗前后血清超敏C-反应蛋白（hs-CRP）、精神状态［简易智力状态检查表（MMSE量表）］、智能状态［长谷川痴呆量表（HDS 量表）］ 及日常生活能力量表（ADL 量表） 评分的变化。结果：治疗后,2 组血清hs-CRP 水平均较治疗前下降,研究组hs-CRP 水平低于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。治疗后,2 组MMSE 评分、HDS 评分均较治疗前升高,比较研究组MMSE 评分、HDS 评分均高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。治疗后,2 组ADL 评分均较治疗前升高,研究组ADL 评分高于对照组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论：针刺疗法联合尼莫地平片治疗血管性痴呆效果确切,能有效抑制炎性反应,改善患者认知功能,提高智力水平及日常生活能力。     

严重外伤患者的凝血功能变化

严重外伤对伤员全身各系统功能产生严重的损害,其中外伤出血引起的低体温、酸中毒和凝血功能障碍是导致伤员死亡的主要原因[J].本研究中针对多发伤患者入院时的凝血功能指标进行分析,报告如下.     

简单异尖线虫L-样半胱氨酸蛋白酶基因的克隆与表达

目的克隆简单异尖线虫L-样半胱氨酸蛋白酶基因(AsCP)全长,研究其表达特性。方法根据GenBank中简单异尖线虫表达序列标签L-样半胱氨酸蛋白酶基因的部分信息,设计特异引物,用cDNA末端快速扩增技术扩增3′端部分,获得基因全长序列。根据基因全长序列设计引物,以简单异尖线虫总RNA为模板,RT-PCR扩增AsCP基因编码序列,产物经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切,克隆至表达载体pET32а(+),转化大肠埃希菌BL21(DE3)株,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达效果经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测。结果3′端扩增片段大小为1211bp,拼接完整后基因全长1462bp,编码411个氨基酸,与秀丽隐杆线虫的L-半胱氨酸蛋白酶相似性达36.4%;重组载体pET32a(+)-AsCP经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切后有一条约1150bp的条带,测序结果显示重组载体构建成功。SDS-PAGE结果表明,重组蛋白相对分子质量约为Mr60000(含6个组氨酸的标签),与目的蛋白相符。用不同浓度的IPTG诱导对表达量的影响很小,1mmol/LIPTG诱导2h后表达量达到最高水平。结论成功克隆并表达了L-样半胱氨酸蛋白酶。     

白介素-18和急性生理及慢性健康状况评分Ⅱ及序贯器官功能衰竭估计评分对早期脓毒症预后的评估价值分析

目的 检测和记录脓毒症早期患者白介素(IL)-18、急性生理及慢性健康状况评分(APACHE)Ⅱ及序贯器官功能衰竭评分(SOFA),评价三者对脓毒症早期预后的评估价值.方法 选取38例重症监护病房(ICU)内脓毒症早期患者为脓毒症组,同期住院的20例非脓毒症患者为对照组.根据28 d生存情况分为生存和死亡两种结局.记录患者入选后24 h、48 h、72 h的临床资料,评价APACHEⅡ和SOFA评分,用ELISA法检测血清IL-18.判断其对预后的评估价值.结果 脓毒症组患者确诊后24 h、48 h、72 h时IL-18水平和SOFA评分间均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05).且随疾病进展,IL-18水平呈下降趋势.两组患者APACHEⅡ在各时间点间差异无统计学意义(P＞0.05).脓毒症患者亚组分析,死亡组IL-18水平、APAHCEⅡ和SOFA评分均明显高于存活组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 IL-18在脓毒症早期表达升高,可以反映疾病进展程度.IL-18与APAHCEⅡ和SOFA评分对脓毒症的预后判断价值相似,可以作为早期脓毒症预后的预测指标.     

严重外伤患者的凝血功能变化

严重外伤对伤员全身各系统功能产生严重的损害,其中外伤出血引起的低体温、酸中毒和凝血功能障碍是导致伤员死亡的主要原因[J].本研究中针对多发伤患者入院时的凝血功能指标进行分析,报告如下.     

血液灌流治疗百草枯中毒的临床总结

目的 研究血液灌流(HP)治疗对百草枯中毒患者的疗效.方法 回顾性分析2005年1月至2009年12月收治的222例百草枯中毒患者的临床资料,按治疗方案分为对照组(140例)和HP组(82例).两组均给予常规治疗;HP组加用HP,每日1次,持续4 h.比较两组患者临床指标、实验室指标、序贯器官功能衰竭评分系统(SOFA)评分与预后.结果 HP组患者动脉血氧分压(PaO2)、白细胞计数(WBC)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)均较治疗前明显改善,且明显优于对照组(均P<0.05).HP组患者SOFA评分显著低于对照组[(2.69±0.36)分比(2.78±0.39)分,P<0.05].HP组患者28 d生存率明显高于对照组[48.8%(40/82)比43.6%(61/140),P<0.053.结论 HP能够减轻百草枯中毒患者的器官损害,并改善预后.     

血管升压药物在感染性休克中的应用

"拯救脓毒症运动"提出通过液体复苏和应用血管升压药物等手段尽早恢复中心静脉压、平均动脉压及中心静脉血氧饱和度等指标,以此改善重症感染与感染性休克患者氧供应与氧需求的失衡状态,并最终达到降低病死率的目的 [1]。     

台湾海峡异尖线虫病病原线虫幼虫的rDNA序列分析

目的分析台湾海峡异尖线虫病潜在病原线虫的rDNA序列,为建立病原分子生物学鉴别提供依据。方法剖检台湾海峡常见鱼类的寄生线虫幼虫,镜检分类。提取虫体DNA、用通用引物对rDNA进行PCR扩增、克隆、双向测序及BLAST比对。结果获得6条来自6种线虫幼虫的rDNA序列,其中的3种在GenBank数据库中没有发现匹配的序列;证实在台湾海峡分布的灰海鳗对盲囊线虫成虫和疑似其第三期幼虫实属同种;构建了基于ITS-2的序列间内部相似性程度关系树。结论异尖线虫病原幼虫所具有的分子生物学鉴别信息位点主要集中在ITS-2间隔区。     

脓毒症早期血清白细胞介素-18和10在疾病严重程度及预后评估中的价值研究

Objective To observe the dynamic changes in levels of serum interleukins (IL-18, IL-10)in the early stage of sepsis, and to appraise their values in the evaluation of severity and prognosis of sepsis.Methods Prospective randomized controlled study was conducted. Thirty-eight patients with sepsis who stayed longer than 72 hours in intensive care unit (ICU) from December 2009 to August 2010 were enrolled as sepsis group. At the same time, 20 patients without sepsis served as control group. The patients were classified as survival (n=12) or death group (n = 26) according to 28-day survival. The clinical laboratory examination data were recorded at 24, 48, 72 hours after admission to the ICU, and venous blood was obtained at the same time. The IL-18, IL-10 levels were determined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Results The vital signs, blood routine, liver function, renal function, coagulation function,arterial blood gas, and electrolyte showed no significant difference between sepsis group and control group 24, 48, 72 hours after admission, the levels of IL-18 were lowered, IL-10 elevated, the IL-18/IL-10 ratio was lowered in the sepsis group, and all of them were higher than control group at each time point. The levels of IL-18, IL-10 in death group of patients with sepsis were all higher than those of survival group at 24, 48, and 72 hours [IL-18 (ng/L): 108. 36± 18. 54 vs. 91. 66±21. 49, 92.13±28. 92 vs. 54.16±31.76,91. 78 ± 17. 33 vs. 76. 04 ±22.09; IL-10 (ng/L): 99. 42 ± 12.10 vs. 77. 20 ±9. 47, 103. 39 ± 17. 24 vs.67.88±18.90, 118. 99 ±11. 20 vs. 99. 20± 12. 46, P＜0. 05 or P＜0. 01]. IL-18/IL-10 ratios were all lowered in both non-survivors and survivors with sepsis at 24, 48, 72 hours, while the differences were not statistically significant (1. 09±0. 19 vs. 1. 20±0. 32, 0. 92±0. 18 vs. 0. 98±0. 29, 0. 78±0.15 vs. 0. 77±0. 23, all P＞0. 05). Conclusion The levels of serum IL-18, IL-10 were all elevated in the early stage of patients with sepsis, and in non-survivors they were higher than those of survivors. With the progress of the illness, IL-18 showed a lowering tendency, while IL-10 showed an elevation. The levels of serum IL-18 and IL-10 may be valuable in evaluating the severity of sepsis and prognosis of patients with sepsis.