人胚胎脑海马神经前体细胞的分离培养及形态学研究

目的 :从人胚胎脑海马区分离、培养并鉴定神经前体细胞 ,观察其形态学变化。方法 :取胎龄 8～ 12周人胚胎脑海马区细胞 ,用含人表皮生长因子 (h -EGF)、人碱性成纤维细胞生长因子 (h -bFGF)以及人白细胞抑制因子 (h -LIF)的DMEM F12培养液离体培养 ,以 1%胎牛血清 (FBS)和多聚赖氨酸诱导分化 ,倒置显微镜下测量形态指标 ,免疫细胞化学反应分析其神经化学性质。结果 :原代培养中 ,可见许多悬浮生长并渐增大的细胞球 ,以及很少数贴壁生长的成簇或单个细胞。将球吹打传代后 ,又有许多新的细胞球生成。取细胞球诱导分化 ,则见细胞从球迁出、伸出突起并渐分支 ,细胞分别 β -Ⅲtubulin、NF - 2 0 0、GFAP、Galc等免疫细胞化学反应阳性。 结论 :人胚胎脑海马区有神经前体细胞存在 ,离体培养时能分裂增殖和自我更新 ,并能被诱导分化为神经元前体细胞、神经细胞、星形胶质细胞和少突胶质细胞     

90锶-90钇敷贴在耳部瘢痕疙瘩术后患者中的应用效果

目的:探讨耳部瘢痕疙瘩术后采用90锶-90钇敷贴联合复方倍他米松注射液皮下注射的临床效果.方法:分析85例耳部瘢痕疙瘩行内核切除手术治疗患者的临床资料,按其术后治疗方案不同分组.对照组42例,采用复方倍他米松注射液皮下注射治疗;观察组43例,在对照组基础上予以90锶-90钇敷贴治疗.比较2组总有效率、治疗前后瘢痕严重程度(VSS评分)、症状(红斑、硬结、瘙痒)积分、局部组织基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、基质金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)、I型前胶原肽(PINP)表达、治疗期间不良反应情况、治疗后6个月、1年复发率.结果:观察组总有效率(95.35％)高于对照组(66.67％),差异有统计学意义(P<0.05);治疗后观察组VSS评分[(1.58±0.69)vs(2.77±0.81)分]、症状积分[(1.73±0.80)vs(2.91±0.94)分]低于对照组(P<0.05),观察组MMP-1[(20.88±2.54)vs(29.24±2.91)ng·mL-1]、TIMP-1[(32.43±3.16)vs(42.74±3.78)ng·mL-1]、PINP[(7.30±1.57)vs(8.94±1.80)ng·mL-1]水平低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);2组不良反应发生率和治疗后6个月、1年复发率比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论:手术切除耳部瘢痕疙瘩后采用90锶-90钇敷贴联合复方倍他米松注射液皮下注射可有效促进患者瘢痕减退.     

嗅茎切断对脑室下层细胞迁移的影响

为探讨嗅茎切断对大鼠前脑侧脑室脑室下层细胞迁移的影响 ,本实验在嗅球后切断嗅茎 ,手术后 30 d、6 0 d后灌注固定处死 ,制作脑的连续石蜡切片 ,计量嗅球后份平面吻侧迁移流的细胞密度 ,计算机图象分析吻侧迁移流横截面积 ,用免疫组织化学技术对吻侧迁移流内的细胞进行定性分析。结果发现 ,手术切断嗅茎导致手术侧吻侧迁移流细胞在切断平面的尾侧细胞密度增加 ,吻侧迁移流的横截面积增大 ,积聚的细胞为多唾液酸 -神经细胞粘附分子阳性的神经元前体细胞。结果提示 ,手术切断嗅茎导致吻侧迁移流内神经元前体细胞在切断平面的尾侧积聚     

Bcl-2、Bax蛋白在NRs抗体预处理后缺氧缺糖海马脑片CA1区的表达变化

目的 :观察用NMDA受体亚单位抗体预处理后再缺氧缺糖的海马脑片CA1区Bcl -2和Bax蛋白的表达变化。方法 :将体外培养至 2周的海马脑片分为正常对照组 (HOTC组 ) ,实验对照组 (仅分别预加NR1抗体、NR2A抗体、NR2B抗体不缺氧缺糖 ) ,实验组 (分别预加NR1抗体、NR2A抗体、NR2B抗体后再缺氧缺糖 1hr)。作HE染色 ,Bcl-2、Bax免疫组化反应染色。结果 :Bcl -2蛋白在NR1+OGD组、NR2A +OGD组和NR2A +NR2B +OGD组区的表达均明显弱于OGD组 (3组均P <0 .0 5 ) ;其在NR2B +OGD组和HOTC组的表达则强于OGD组 (两者P <0 .0 5 )。Bax蛋白在NR1+OGD组、NR2A +OGD组和NR2A +NR2B +OGD组的表达均强于OGD组 (NR2A +OGD组P <0 0 5 ) ;在NR2B +OGD组和HOTC组其表达则明显弱于OGD组 (后者P <0 .0 5 )。结论 :单纯缺氧缺糖可引起海马脑片CA1区锥体细胞的损伤同时引起Bcl -2蛋白和Bax蛋白的表达变化 ;预加NMDA受体亚单位NR1、NR2A抗体和NR2A +NR2B抗体可以加重缺氧缺糖性海马脑片CA1区细胞损伤程度 ;预加NR2B抗体则可减轻其损伤程度     

嗅茎切断对脑室下层细胞迁移的影响

背景：在成年大鼠的脑室下层存在神经元前体细胞,这些细胞持续不断沿着嘴侧迁移流不停地向嗅球迁移并分化嗅球内的中间神经元,阻断嘴侧迁移流对这些细胞的迁移以及分化是否产生影响尚不得而知.目的：探讨嘴侧迁移流阻断对脑室下层细胞迁移的影响.设计：随机对照实验.单位：中国科学技术大学生命科学学院;徐州医学院人体解剖学教研室.材料：实验于1997-09/1999-01在徐州医学院动物实验中心完成,选用成年雄性SD大鼠25只.随机分为嗅茎切断30 d组（n=10）和60 d组（n=15,其中5只作免疫组织化学）.方法：在嗅球后切断嗅茎,手术30,60 d后将动物灌注固定处死,制作脑的连续石蜡切片,计量嗅球后份平面嘴侧迁移流的细胞密度和横截面积、用免疫组织化学的方法对嘴侧迁移流内的细胞进行定性分析.主要观察指标：嗅茎后份平面的细胞密度,横截面积和唾液酸-神经细胞黏附分子的表达.结果：纳入25只SD大鼠,因手术动物死亡和嗅茎切断手术失败,用于分析的动物只有13只,30 d组5只,60 d组8只（其中用于免疫组织化学的3只）.①嗅茎切断后嗅茎后份平面嘴侧迁移流形态学及数量变化：在Nissl染色的切片上,嘴侧迁移流细胞较密集,染色深,和周围组织区别明显.未见明显的核固缩、核碎片等细胞死亡的特征.嗅茎切断30 d组和60 d组手术侧嗅茎后份平面的细胞密度均高于对照侧（P＜0.01）,60 d组手术侧嘴侧迁移流在嗅茎后份平面的相对细胞密度高于30 d组手术侧的细胞密度（P＜0.01）.两组手术侧横截面积均大于对照侧（P＜0.01）,但嗅茎切断60 d组和30 d组手术侧无差异（P＞0.05）.②嗅茎切断手术后嘴侧迁移流细胞的免疫组织化学反应：嗅茎切断60 d后,嗅茎后份平面嘴侧迁移流内积聚的细胞表现为多唾液酸-神经细胞黏附分子阳性.结论：切断嗅茎导致嘴侧迁移流内神经元前体细胞在切断平面的尾侧积聚,这些集聚的细胞可能发生分化.     

NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B在生后大鼠海马的免疫组织化学表达

目的 :观察大鼠海马NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B三种蛋白质的生后发育变化。方法 :生后不同时段的SD大鼠各 5只 ,作HE染色 ,NR1、NR2A、NR2B组化反应染色。结果 :生后各时间点海马结构各区锥体细胞及颗粒细胞胞体中均有NR1、NR2A、NR2B的表达 ,NR2B还在锥体细胞的顶树突中有较强表达。NR1与NR2B在P1d和P4d ,两者在CA3区的表达均高于CA1区 ,P1w后两者在CA1区的表达则高于CA3区 ,在P2w～P3w其表达至峰值。而NR2A在P1d、P4d时其在海马结构各区的表达较高 ,随发育时间表达下降 ,约在P4w降至谷底。整个发育过程中 ,NR1在海马各区的表达始终高于NR2A和NR2B的表达。提示生后早期中NR1、NR2A、NR2B的表达具有发育性时空差异     

成年大鼠纹状体海人藻酸损伤后nestin的表达

目的　 研究成年大鼠纹状体海人藻酸 (kainicacid,KA)损伤后不同时间点nestin的表达并探讨其机制。方法　向成年SD大鼠纹状体内立体定位注射 0 .5 μlKA(1mg/ml) ,分别于手术后第 1、3、7、14天用免疫组织化学法检测纹状体内nestin表达的变化。结果　 正常纹状体内可观察到微弱的淡染nestin样免疫活性阳性细胞 ;大鼠纹状体KA损伤后 1d ,nestin样免疫活性增强 ;第 3天nestin样免疫活性达峰值 ,nestin样免疫活性阳性细胞的胞体肥大 ,突起粗大 ,分支增加 ;此后nestin样免疫活性阳性细胞染色强度减弱 ,其胞体和突起逐渐变小变细。 结论　 成年大鼠纹状体内注射海人藻酸可诱导nestin的大量表达 ,该表达可能与脑损伤后的自身修复相关。     

MK-801对海马脑片培养缺氧缺糖损伤中bcl-2、bax蛋白质表达的影响

目的 :观察NMDA受体拮抗剂MK -80 1对缺氧缺糖海马脑片CA1区Bcl-2蛋白和Bax蛋白表达的影响。方法 :将体外培养 2周的海马脑片随机分为正常对照组 (HOTC)、单纯缺氧缺糖组 (OGD)和预加MK -80 1后再缺氧缺糖组 (MK -80 1+OGD) ,作HE染色 ,Bcl -2、Bax免疫组化反应染色。结果 :HOTC组、OGD组和MK -80 1+OGD海马脑片CA1区均有不同程度Bcl -2、Bax蛋白表达和细胞缺失形成的空洞。HOTC组MK -80 1+OGD组Bcl-2蛋白的表达均强于OGD组 (2组均P <0 .0 5 ) ;Bax蛋白的表达均弱于OGD组 (2组均P <0 .0 5 ) ,同时细胞缺失形成的空洞有所减少。结论 :MK -80 1可以引起缺氧缺糖性海马脑片CA1区Bcl-2蛋白和Bax蛋白的表达变化并减轻其锥体细胞损伤程度     

海马脑片缺氧缺糖模型的制备方法

离体神经组织培养尤其是海马脑片培养，可以弥补在体动物实验方面的一些局限性，是现代神经科学工作者常用的研究方法之一。实验证实，离体海马脑片缺氧缺糖培养模拟“脑缺血”，可以重现在体动物实验时海马各区对缺血敏感性不同的特点，所以许多学者利用海马脑片缺氧缺糖培养模型来研究缺血性脑损伤的细胞和分子机制。目前海马脑片缺氧缺糖模型的制备有多种．但各方法间存在着差异，本文对目前运用较多的浸没法、充N2法和三气缺氧培养箱法进行了比较，并将其中两种方法予以结合。以期为海马脑片缺氧缺糖模型的应用提供参考。     

NR2B反义寡核苷酸对脑缺血海马CA1区NR2BmRNA表达的影响

为研究NMDA受体2B亚单位(NR2B)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide to NR2B,ANR2B)对短暂性脑缺血后海马CA1区NR2B mRNA表达的影响,分别向成年SD大鼠海马CA1区内立体定位注射ANR2B、NR2B正义寡核苷酸(SNR2B)、无菌生理盐水(NS),或者插针不注射(NSNO),24h后行四动脉阻断前脑缺血手术(缺血15min、再灌注24h),经心冲灌固定取脑,连续冰冻切片,原位杂交组织化学方法染色,光镜下观察各组每侧鼠脑NR2B mRNA的表达变化,并用LEICAQWin进行图像分析。结果显示,单纯缺血组海马各区的NR2B mRNA显色强度明显增加;缺血再灌组、假手术组和正常组海马CA1区内ANR2B注射点及其周围的NR2B mRNA显色明显下降;而在注射SNR2B、NS或NSNO的各组海马切片上,NR2B mRNA显色均无明显变化。结果表明ANR2B可以特异性地在体局部防止缺血后NR2B mRNA的高水平表达。