一测多评法结合指纹图谱在枳壳质量评价中的应用

目的基于一测多评(QAMS)与指纹图谱的方法建立27批枳壳的质量评价方法。方法以柚皮苷为参照,计算芸香柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷的相对校正因子,并测定其含量,比较外标法与QAMS法的差异性。采用HPLC法,建立27批枳壳饮片的指纹图谱,通过聚类分析(cluster analysis,CA)、主成分分析(principal component analysis,PCA)对指纹图谱进行评价。结果QAMS法与外标法测量值之间无显著性差异;建立枳壳饮片指纹图谱方法,相似度均>0.95,共标定11个共有峰,通过与对照品谱图比对,确定了3号峰为芸香柚皮苷、4号峰为柚皮苷、5号峰为橙皮苷、6号峰为新橙皮苷。结论QAMS法结合指纹图谱可为评价枳壳饮片的质量提供参考。     

基于化学计量学方法结合正交偏最小二乘判别分析的陈皮饮片HPLC指纹图谱研究

目的建立陈皮饮片HPLC指纹图谱分析方法,为其质量控制提供技术参考。方法采用HPLC法建立17批陈皮饮片的指纹图谱,通过聚类分析(clusteranalysis,CA)、主成分分析(principalcomponentanalysis,PCA)、正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least square discrimina te analysis,OPLS-DA)对指纹图谱进行评价。结果建立了陈皮饮片指纹图谱,相似度均0.9,确定了25个共有峰,其中14个峰的变量投影重要性(variableimportance projection,VIP)均1,通过与对照品谱图比对,确定了13号峰为芸香柚皮苷、14号峰为橙皮苷、23号峰为川陈皮素、24号峰为3,5,6,7,8,3′,4′-七甲氧基黄酮、25号峰为桔皮素。结论该方法简单可靠,可用于陈皮饮片鉴别和质量控制。     

成年特发性膜性肾病患者血清磷脂酶A2受体抗体及肾组织中磷脂酶A2受体的临床研究

目的探讨成年特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)患者血清磷脂酶A2受体(phospholipase A2 receptor,PLA2R)抗体及肾组织中PLA2R水平变化及临床意义。方法选择2014年1月至2019年6月河北省石家庄市第一医院收治的成年IMN患者114例作为IMN组,继发性膜性肾病患者32例作为继发性膜性肾病组,非肾病者30例作为对照组。应用免疫荧光法检测各组肾脏穿刺标本中PLA2R表达,应用酶联免疫吸附法检测各组血清PLA2R抗体水平。比较各组肾脏组织PLA2R、血清PLA2R抗体水平及实验室指标。结果IMN组肾组织PLA2R阳性率、血清PLA2R抗体、24h尿蛋白、血肌酐水平显著高于继发性膜性肾病组和对照组,血浆白蛋白显著低于继发性膜性肾病组和对照组,继发性膜性肾病组肾组织PLA2R阳性率、血清PLA2R抗体、24h尿蛋白、血肌酐水平显著高于对照组,血浆白蛋白显著低于对照组(P<0.05)。随病理分期的升高成年IMN患者肾组织PLA2R阳性率及血清PLA2R抗体水平逐渐升高,24h尿蛋白、血肌酐水平逐渐升高,血浆白蛋白逐渐降低(P<0.05)。成年IMN患者肾组织PLA2R阳性率、血清PLA2R抗体表达水平与24h尿蛋白、血肌酐呈正相关,与血浆白蛋白呈负相关(P<0.05)。结论成年IMN患者肾脏组织PLA2R、血清PLA2R抗体呈高表达,其水平显著高于继发性IMN患者,且病理分期越高的患者肾脏组织PLA2R阳性率越高、血清PLA2R抗体水平越高。     

川芎祛瘢痕霜基质处方的优化

目的优化川芎祛瘢痕霜基质处方。方法采用D-最优混料设计,以油相、乳化剂、保湿剂、仿生剂、水比例为影响因素,以包括8项主观评价指标在内的肤感评价指标及包括5项客观评价指标在内的物理性质及稳定性评价指标为标准,优化基质处方。结果最优基质处方为烃类油相用量5. 00 g,合成油相用量12. 00 g,复配乳化剂用量8. 00 g,保湿剂用量7. 50 g,仿生剂用量4. 00 g,水用量63. 00 g,川芎挥发油加入量0. 50 g,膏霜稳定性良好。结论 D-最优混料设计可便捷地优化川芎祛瘢痕霜基质处方中重要因素,使其在物理性质上达到最优水平,而且重复性良好。     

D-最优混料设计制备川芎油微囊止痛凝胶膏剂及其药效学初步考察

目的通过将川芎挥发油制成微囊中间体应用到凝胶膏剂,以解决川芎油不稳定特性,并优化处方及评价体外透皮速率,对药效学进行初步研究。方法采用D-最优混料设计,以初黏力、持黏力、剥离强度作为评价指标,优选出最佳制备工艺。通过Franz体外透皮试验仪,以藁本内酯为指标,研究凝胶膏剂的体外透皮行为。通过醋酸扭体实验初步评价药效。结果川芎油微囊止痛凝胶膏剂的最优处方为NP700、甘油、甘羟铝、高岭土、氮酮、酒石酸、PVPK30、0.5%卡波姆940分别为1.250、5.000、0.025、0.250、0.600、0.025、1.000、2.700 g。凝胶膏剂中藁本内酯透皮速率为5.129 7μg/(cm2·h),高温、高湿、强光照射实验于第5、10天保留率分别为93.17%、91.21%,98.94%、92.36%,68.03%、60.78%;镇痛率为63.14%。结论最优处方凝胶膏剂具有良好的黏性,解决了川芎油不稳定的特性,为挥发油类应用到凝胶膏剂等新剂型提供参考。     

miR-762在胰腺癌中的表达及对胰腺癌细胞生物学行为的影响

背景与目的：miR-762在多种恶性肿瘤中存在表达异常,参与肿瘤的增殖、凋亡及侵袭转移。观察miR-762在胰腺癌组织和细胞系中的表达及对胰腺癌细胞增殖、侵袭转移的影响。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR）技术检测于河北医科大学第四医院行胰腺癌根治术的胰腺癌组织和细胞株中miR-762的表达。通过Lipofectamine ^TM 2000将miR-762模拟物（mimics）、miR-762抑制物（inhibitors）及其阴性对照序列（scramble序列）分别转染胰腺癌PANC-1细胞。采用细胞计数试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）实验检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用划痕实验和Transwell侵袭实验检测细胞侵袭转移能力;采用蛋白质印迹法（Western blot）检测上皮-间质转化（epithelial-mesenchymal transformation,EMT）相关分子标志物表达。结果：胰腺癌组织中miR-762 mRNA表达量显著高于癌旁组织（P<0.01）。胰腺癌细胞株BxPC-3、PANC-1、AsPC-1、SW-1990中miR-762 mRNA的表达量也显著高于正常胰腺上皮细胞HPDE（P<0.01）。转染miR-762 mimics后PANC-1细胞miR-762 mRNA表达量显著增加,而转染miR-762 inhibitors后PANC-1细胞miR-762 mRNA表达量显著降低（P<0.01）。同时miR-762 mimics组450 nm处的吸光度（D ₄₅₀ ）值、细胞迁移距离和穿膜细胞数及间质表型细胞标志物N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（vimentin）表达量显著增加,细胞凋亡率及上皮细胞标志物E-钙黏蛋白（E-cadherin）表达量显著降低;而miR-762inhibitors组D ₄₅₀ 、细胞迁移距离和穿膜细胞数及间质表型细胞标志物N-cadherin、vimentin表达量显著降低,细胞凋亡率及上皮细胞标志物E-cadherin表达量显著增加（P<0.05）。结论：miR-762在胰腺癌组织和细胞株中高表达,上调miR-762表达可能通过调控N-cadherin、vimentin、E-cadherin表达促进EMT进程,从而增强PANC-1细胞的增殖和侵袭转移能力。     

基于AHP-熵权法结合D-最优设计响应面法优化玄参蒸制工艺

目的筛选玄参药材最优蒸制工艺参数。方法采用HPLC法同时测定哈巴苷、哈巴俄苷、桃叶珊瑚苷、类叶升麻苷、安格洛苷C、肉桂酸6种成分含量,以AHP-熵权法计算权重系数,多指标综合评分结合D-最优设计考察浸泡时间、蒸制时间、干燥温度对蒸制玄参药材质量的影响,优选玄参蒸制工艺。结果优化所得最佳蒸制工艺参数为浸泡时间15.63min、蒸制时间85min、干燥温度60℃,综合评分为97.20分。考虑实际情况,对浸泡时间进行微调得出玄参最佳蒸制工艺,即浸泡时间为15 min、蒸制时间为85 min、干燥温度为60℃。并通过所得条件平行制备3批样品,计算得综合评分分别为98.53、99.39、98.86,其RSD为0.47%。结论优选的蒸制工艺简单可行,为规范玄参药材的蒸制工艺提供参考,建立测定玄参中6种成分的方法快速可靠,可用于玄参饮片的质量控制。     

菥蓂不同提取物对高尿酸血症小鼠肠道菌群的影响

目的 探索菥蓂不同提取物对高尿酸血症小鼠肠道菌群的影响,以揭示其降尿酸活性物质基础和作用机制。方法 将88只雄性昆明鼠小鼠分为11组,即空白组,模型组,别嘌呤醇组,石油醚提取物高、低剂量组,乙酸乙酯提取物高、低剂量组,正丁醇提取物高、低剂量组,总黄酮提取物高、低剂量组。空白组小鼠灌胃0.5%羧甲基纤维素钠,其他组小鼠均灌胃氧嗪酸钾（500 mg·kg^-1）以复制高尿酸血症模型。造模若干小时后,空白组和模型组均灌胃蒸馏水,别嘌呤醇组给予别嘌呤醇混悬液（50 mg·kg^-1）。各给药组按高、低剂量（5,2.5 g·kg^-1）灌胃给药,每日1次,持续14 d后取血,测定血尿酸（SUA）水平和黄嘌呤氧化酶（XOD）活性,收集新鲜粪便进行16S rDNA测序。结果 与空白组比较,模型组SUA水平和XOD活性明显升高（P<0.05）;与模型组相比,别嘌呤醇组SUA水平和XOD活性显著下降（P<0.01）,菥蓂给药组干预后,除石油醚提取物高、低剂量组和总黄酮提取物低剂量组外,SUA水平均明显降低（P<0.05,P<0.01）,石油醚提取物低剂量组、总黄酮提取物高剂量组和正丁醇提取物高、低剂量组可明显抑制XOD活性（P<0.05,P<0.01）,其中总黄酮提取物高剂量组降低SUA水平和抑制XOD活性最显著。菌群测序结果显示,模型组α多样性和菌群丰度变化显著,且发现拟杆菌门（Bacteroidetes）,厚壁菌门（Firmicutes）和乳酸杆菌科（Lactobacillaceae）与XOD活性显著相关;给药组干预后菥蓂总黄酮提取物高、低剂量组操作分类单元（OTU）,ACE,Chao1,Shannon指数明显升高（P<0.05,P<0.01）;乙酸乙酯提取物低剂量组、总黄酮提取物高剂量组和正丁醇提取物高、低剂量组的拟杆菌门相对丰度显著降低（P<0.01）,厚壁菌门相对丰度显著升高（P<0.01）;乳酸杆菌科相对丰度在正丁醇提取物低剂量组、总黄酮提取物高剂量组中显著升高（P<0.01）。结论 菥蓂降尿酸的有效部位主要为黄酮类成分,通过影响肠道菌群如乳酸杆菌、拟杆菌和厚壁菌进而改善机体SUA水平和XOD活性可能是其作用机制之一。