芍药甘草汤的历史沿革与现代研究

芍药甘草汤最早见于张仲景《伤寒杂病论》,由白芍和甘草(炙)等比例配伍而成,具有养血敛阴、调和肝脾、缓急止痛之功效,用于血虚津伤和筋脉失濡所致的腿脚挛急、脘腹疼痛。被历代医家推崇并沿用至今,并且拓展出了应用范围。现代药理研究表明,芍药甘草汤具有显著的解痉、止痛、镇咳、平喘及抗炎等作用,用于治疗痉挛性疾病、疼痛性疾病、炎症性疾病、支气管哮喘及妇产科疾病等。笔者从芍药甘草汤的历史沿革与方义衍变、组方配伍分析、药理药效学研究、现代临床应用4个方面进行系统阐述,以期为该经典名方的现代研究开发提供理论依据和文献参考,并为其制剂的临床定位提供理论和实践支撑。     

保元汤古代文献分析与现代研究概况

保元汤是《古代经典名方目录（第一批）》收载的经典名方之一,已具有500多年应用历史,现代广泛用于治疗元气不足、虚损劳怯等。通过分析明、清两代具有代表性的中医古籍结合现代研究,分析、总结了保元汤来源、组成、药效等,综述保元汤的古代和现代文献研究概况,为建立保元汤物质基准质量标准提供了参考。通过研究发现,保元汤早期用以治疗小儿痘疹类疾病,随着社会发展,历代医家通过在临床实践中不断摸索,赋予了保元汤新的内涵,使其临床治疗疾病的范围得到扩充。现代医家将保元汤及其加减方临床用于冠心病、再生障碍性贫血、慢性肾功能衰竭、慢性肾炎、白细胞减少等多种疾病,充分说明保元汤临床效果显著,具有潜在开发价值。     

保元汤物质基准UPLC-PDA指纹图谱的建立及化学成分指认

目的:建立保元汤物质基准的指纹图谱并对其共有峰进行成分指认。方法:制备15批保元汤物质基准,采用超高效液相色谱-二极管阵列检测器法(UPLC-PDA)测定15批保元汤物质基准的指纹图谱,并开展方法学研究;使用ACQUITY UPLC BEH Shield C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相0.05%甲酸水溶液(A)-0.05%甲酸乙腈溶液(B)梯度洗脱(0~0.5 min,5%~19%B;0.5~6 min,19%B;6~10 min,19%~27%B;10~20 min,27%~45%B;20~20.1 min,45%~95%B;20.1~23 min,95%B),流速0.4 mL·min-1,检测波长203 nm和260 nm,柱温30℃,进样量2μL;采用"中药指纹图谱相似度评价系统"(2012版)建立指纹图谱,并生成对照指纹图谱;采用超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法(UPLC-ESI-MS/MS)和对照品比对等方式进行保元汤物质基准的成分指认,质谱条件为全信息串联质谱(MSE)扫描模式检测,质量扫描范围m/z 50~1200。结果:15批保元汤物质基准与对照指纹图谱的相似度均>0.90,共有37个共有峰,通过UPLC-ESI-MS/MS指认了其中22个,分别为甘草苷,人参皂苷Rg1,人参皂苷Rb1,人参皂苷Re等,均来源于人参、黄芪、甘草、生姜4味药材。结论:该方法精密度、重复性、稳定性良好,表征了保元汤组分整体特征,为该经典名方的颗粒剂开发提供了实验依据。     

基于传统煎药工艺的川牛膝饮片标准汤剂制备及质量评价方法研究

目的:制备来自于不同产地的15批次川牛膝饮片标准汤剂,并以其出膏率、指标成分含量及转移率、指纹图谱等数据为指征进行研究。方法:参照传统煎药工艺制备标准汤剂,采用UPLC-DAD法测定指标成分含量,计算转移率、出膏率及指纹图谱数据研究。结果:15批次川牛膝样品制成的标准汤剂中杯苋甾酮含量为0.066～0.210 mg/m L,转移率为61.27%～99.69%,平均转移率为73.27%,标准偏差为11.88%。出膏率范围为17.66%～31.45%,平均出膏率为24.48%,标准偏差为4.54%。指纹图谱共有峰11个,确认1个,为杯苋甾酮(C_(29)H_(44)O_8)。结论:本研究建立的制备工艺符合传统汤剂制备方法,且稳定可行,可用于川牛膝饮片标准汤剂的制备及质量评价,并为配方颗粒、经典名方研究及工业化生产提供基本的数据支撑和参考。     

经典名方保元汤UPLC特征图谱和多指标成分含量测定研究＊

目的 建立保元汤标准汤剂的超高效液相色谱法（Ultra Performance Liquid Chromatography，UPLC）特征图谱，并建立同时测定人参皂苷Rb1和甘草酸2种指标成分含量的方法，为该经典名方的质量控制及评价提供参考。方法 采用ACQUITY BEH Shied C18 column （2.1 × 100 mm，1.7 μm）色谱柱，以0.01%甲酸水（A）-0.05%甲酸乙腈（B）为流动相梯度洗脱，柱温30℃，流速0.4 mL min^-1，检测波长203 nm、237 nm。建立15批保元汤标准汤剂的UPLC特征图谱，应用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”软件（2012版）进行相似度分析，归属共有峰。采用层次聚类分析（HCA），主成分分析（PCA）等对特征图谱数据进行评价。利用UPLC特征图谱方法测定2种成分含量。结果 建立了15批保元汤标准汤剂的特征图谱，相似度均大于0.85，并确认了21个共有峰，指认出毛蕊异黄酮葡萄糖苷、甘草苷、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、甘草酸6个峰。15批保元汤聚为4类，载荷散点图显示毛蕊异黄酮葡萄糖苷、人参皂苷Rg1等7个成分含量对保元汤质量有较大影响。含量测定显示，在一定范围内人参皂苷Rb1、甘草酸线性关系良好（r ≥ 0.997）。标准汤剂中含量测定结果分别在12.62-30.33 μg·mL^-1、63.80-106.67 μg·mL^-1，转移率分别在51.04%-70.06%、54.89%-74.38%；对应实物中含量测定结果分别在0.98-2.27 mg·g^-1、4.42-8.74 mg·g^-1，转移率分别在78.14%-101.19%、89.99%-99.88%。结论 建立的保元汤UPLC特征图谱及双指标成分含量测定方法专属性强、灵敏度高，可为该方剂复方制剂的质量控制与评价提供参考。     

DESI-MSI在半夏泻心汤质量控制中的应用

目的:制备不同产地15批次半夏泻心汤物质基准及对应实物,分别应用超高效液相色谱-二极管阵列检测器检测法(UHPLC-DAD)与解吸电喷雾电离-敞开式离子化质谱成像技术(DESI-MSI技术)对不同产地15批次半夏泻心汤对应实物进行分析,考察DESI-MSI在经典名方质量控制中的优势。方法:以半夏泻心汤为研究模型,采用UHPLC-DAD建立半夏泻心汤物质基准及对应实物指纹图谱,并对指标成分含量、出膏率进行考察。同时,以半夏泻心汤对应实物冻干粉为研究载体,将其复溶后以5μL定量毛细管点样于定性滤纸,并固定于载玻片制成样本,以甲醇-甲酸(1 000∶1)为喷雾溶剂,流量3μL·min~(-1),扫描范围100～1 200 Da,空间分辨率300μm,喷雾电压3 k V,采样锥电压±40 V,喷雾器(N_2)压力0. 5 MPa,喷雾器入射角60度,收集角10度,离子源温度120℃,正、负离子全扫描样本。结果:DESI-MSI能检测到指标成分甘草苷、黄芩苷、汉黄芩苷,及共有峰芹糖基甘草苷、小檗碱、甘草酸等,并对其半定量分析,分析结果与UHPLC-DAD基本一致。同时,DESI-MSI还能检测到来自甘草、黄连、黄芩、大枣和人参的甘草皂苷G_2,巴马汀,黄连碱,芦丁,人参皂苷Rg_1等16种成分,并对其相对含量进行直观呈现,定性分析能力远强于UHPLC-DAD。结论:DESI-MSI技术无需进行复杂的样品处理过程,且灵敏度高、分析能力强,可以在无对照品情况下进行复杂样品的定性和相对含量分析,可作为经典名方物质基准、对应实物及配方颗粒样品的质控手段。