乙酰唑胺对表达水孔蛋白1的非洲爪蟾卵母细胞转运水功能的影响

目的观察乙酰唑胺对水孔蛋白1(AQP1)水转运功能的影响。方法将AQP1 cRNA 10 ng注射入非洲爪蟾卵母细胞,观察并记录给予1×10^-7～1×10^-5 mol·L^-1乙酰唑胺后卵母细胞在低渗溶液中的膨胀率,并计算其渗透水通透性(Pf)的变化。结果非洲爪蟾卵母细胞表达AQP1蛋白后,在低渗溶液中迅速膨胀,Pf值显著增加至1.82×10^-2 cm·s^-1,而注射水的阴性对照仅为0.25×10^-2 cm·s^-1。AQP抑制剂HgCl₂使Pf值降至0.64×10^-2 cm·s^-1;1×10^-7～1×10^-5 mol·L^-1乙酰唑胺处理后,Pf值分别降至1.43,1.24和0.93×10^-2 cm·s^-1。结论乙酰唑胺剂量依赖性地降低AQP1介导的渗透水通透性,抑制AQP1转运水的功能。     

脑胰相关蛋白（BPRP）的生物学研究及药物的作用

神经系统疾病与某些内分泌系统，及其它系统的功能紊乱之间存在着复杂的关系。某些神经系统疾病，如脑缺血损伤、老年痴呆、巴金森氏病、Huntington＇s病等，均表现有神经的退行性变。而一些最新的研究表明胰岛功能与上述神经退行性疾病的发生和发展有关。另有报道认为抑郁症的病人易发生糖尿病，而糖尿病病人更易发生抑郁症。     

非洲爪蟾卵非细胞翻译体系的建立及应用

目的　当前人类基因组研究的重心正在由“结构”向“功能”转移。而基因功能的研究离不开基因的表达 ,这就迫切需要一种操作简便 ,适用范围广的表达工具来表达有功能的蛋白质。方法　非洲爪蟾注射HCG催卵 ,2 %半胱氨酸去胶膜 ,高速离心制备卵提取物 ,即为非洲爪蟾卵非细胞翻译体系。通过亚克隆技术将TFAR1 9基因克隆到体外转录质粒中 ,通过酶切线性化模板 ,体外转录 ,加帽合成cRNA ,将其加入到制备的蛙卵提取物中进行体外翻译。结果　用Westernblot鉴定 ,获得了高效翻译 ,并且加入亚精胺和ATP再生系统可以提高翻译的效率。结论　非洲爪蟾卵非细胞翻译体系为表达有功能的蛋白提供了一种极有应用前景的表达工具     

三七中人参三醇苷对脑缺血的保护作用及其机制

目的 :研究三七中人参三醇苷 (PTS)对大鼠局灶性脑缺血的保护作用及作用机制。方法 :以大鼠永久性大脑中动脉阻塞模型 (MCAO)为基础 ,采用免疫转移印迹 (WesternBlot)的方法 ,观察PTS对大鼠脑缺血的保护作用及 3种脑缺血相关蛋白 (VEGF ,HSP70和转铁蛋白 )表达的影响。结果 :ipPTS 12.5mg·kg^-1×7d(术前 5d ,术后2d)可降低MCAO大鼠脑含水量 ,并影响两种脑缺血相关蛋白 (HSP70和转铁蛋白 )的含量 ,但对VEGF表达量在手术后的变化没有明显的影响。结论 :PTS对大鼠局灶性脑缺血有一定的保护作用 ,其机制可能是上调HSP70和下调转铁蛋白 ,并保护血脑屏障。     

非洲爪蟾卵无细胞凋亡体系的建立

目的：建立一种简便、高效的无细胞凋亡体系，探讨外源性细胞核在其中的凋亡过程及z-VAD-fmk对其的抑制作用。方法：超速离心制备非洲爪蟾卵无细胞体系，用细胞色素C激活为凋亡体系。应用荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳、ApoAlert Caspase-3 Colorimetric Assay等方法检测外源细胞核在无细胞凋亡体系中的凋亡过程及z-VAD-fmk的抑制作用。结果：制备的爪蟾卵无细胞体系可由细胞色素C激活为凋亡体系，外源加入的细胞核呈现典型的形态学变化，总DNA特异降解形成DNA ladder。体系内内源特异核酸酶被激活。z-VAD-fmk可抑制DNA ladder的形成。凋亡特异蛋白酶XCPP32活性明显升高。结论：本实验建立的无细胞凋亡体系可以高效的诱导外源细胞核凋亡，重现体内过程。     

非洲爪蟾卵非细胞体系在药物筛选方面应用初探

目的　为寻找具有分子水平、特异、快速、可用来筛选具有调节凋亡作用药物的方法 ,非洲爪蟾卵非细胞体系 (XS 2 0 0 )作为一种药物的筛选平台 ,研究其作为筛选药物方法的可能性。对体系内凋亡过程的影响进行了初步的研究。方法　药物 (激素 :雌激素及其部分拮抗剂 ,中药提取物 :灵芝三萜和多糖 ,小分子药物 :阿司匹林、水杨酸钠和乙酰唑胺 ,维生素C及重组蛋白rhTFAR19)预先与XS 2 0 0共孵育 ,然后加入阈剂量 (0 .0 6 2 5 μmol·L- 1)的细胞色素C和小鼠肝细胞核 ,提取总DNA进行电泳鉴定。结果　rhTFAR19对XS 2 0 0凋亡过程有直接的促进作用 ,而其他药物则无明显作用。结论　XS 2 0 0可以成为一个良好的分子水平的药物筛选平台 ,特异筛选具有调节凋亡作用的药物。     

非洲爪蟾卵无细胞凋亡体系的建立非洲爪蟾卵无细胞凋亡体系的建立

目的建立一种简便、高效的无细胞凋亡体系,探讨外源细胞核在其中的凋亡过程及z-VAD-fmk对其的抑制作用。方法超速离心制备非洲爪蟾卵无细胞体系,用细胞色素C激活为凋亡体系。应用荧光显微镜、琼脂糖凝胶电泳、ApoAlert Caspase-3 Colorimetric Assay等方法检测外源细胞核在无细胞凋亡体系中的凋亡过程及z-VAD-fmk的抑制作用。结果制备的爪蟾卵无细胞体系可由细胞色素C激活为凋亡体系,外源加入的细胞核呈现典型的形态学变化，总DNA特异降解形成DNA ladder。体系内内源特异核酸酶被激活。z-VAD-fmk可抑制DNA ladder的形成。凋亡特异蛋白酶XCPP32活性明显升高。结论本实验建立的无细胞凋亡体系可以高效的诱导外源细胞核凋亡,重现体内过程。     

绿谷灵芝对人脐静脉内皮细胞ICAM-1和VCAM-1表达的影响

目的　采用血清药理学的方法研究绿谷灵芝含药血清对氧化型低密度脂蛋白 (ox LDL)和糖化白蛋白诱导的内皮细胞表面血管细胞粘附分子 (VCAM 1)和细胞间粘附分子 (ICAM 1)表达的影响。方法　通过细胞ELISA和流式细胞仪技术检测细胞表面VCAM 1和ICAM 1表达的变化。结果　细胞ELISA结果显示 0 2 4 g·kg-1、0 72 g·kg-1绿谷灵芝连续灌胃给药 10d后取血分离得到的血清可降低糖化白蛋白诱导的内皮细胞表面VCAM 1和ICAM 1表达 (P <0 0 5 ) ,降低ox LDL诱导的ICAM 1表达 (P <0 0 5 ) ;流式细胞技术检测结果显示 0 72 g·kg-1绿谷灵芝含药血清可降低ox LDL和糖化白蛋白诱导的内皮细胞表面ICAM 1表达(P <0 0 5 ) ,0 12 g·kg-1绿谷灵芝含药血清和无药血清对内皮细胞表面粘附分子的表达无影响。结论　绿谷灵芝含药血清可降低糖化白蛋白和ox LDL诱导的内皮细胞表面粘附分子的表达