乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白对大鼠佐剂型关节炎滑膜细胞因子的作用

目的:观察乌梢蛇Ⅱ型胶原蛋白(tyPe Ⅱ collagen,CⅡ)对大鼠佐剂型关节炎(adjuvant arthritis,AA)滑膜细胞因子的作用.方法:限制性胃蛋白酶降解法提取乌梢蛇CⅡ,SDS-PAGE凝胶电泳法和紫外分光光度计法鉴定;采用完全弗氏佐剂(complete Freud′s adjuvant,CFA)足垫皮下注射诱导AA大鼠模型;收集滑膜细胞上清液,L929细胞毒性法检测滑膜细胞上清液中TNF-α生物活性,MTT法检测滑膜细胞上清液中IL-1β生物活性;ELISA法检测滑膜细胞上清液细胞因子水平.结果:提取的CⅡ分子量约为118kD～120 kD,紫外光谱吸收仪测定提取的CⅡ吸收峰为230nm,均与标准的牛鼻中隔CⅡ相符;乌梢蛇CⅡ各剂量组体外对滑膜细胞上清液TNF-α和IL-1β活性没有直接作用;乌梢蛇CⅡ中剂量组可抑制AA大鼠的滑膜细胞和派氏淋巴结共培体系上清液TNF-α和IL-1β活性(P＜0.01),乌梢蛇CⅡ低、高剂量可抑制AA大鼠的滑膜细胞和派氏淋巴结(PP)共培体系上清液IL-1β活性(P＜0.05);灌服乌梢蛇CⅡ低、中剂量组与模型组比较,TNF-α活性下降(P＜0.05);中剂量组与模型组比较,IL-1β活性下降(P＜0.05);模型组与空白对照组比较,滑膜上清液TNF-α和IL-1β水平显著升高(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ中、高剂量组与模型组比较,均能抑制滑膜上清液TNF-α和IL-1β水平(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ低剂量组能显著抑制滑膜上清液IL-1β水平(P＜0.01);乌梢蛇CⅡ中剂量能显著升高滑膜上清液TGF-β(P＜0.01);结论:乌梢蛇CⅡ体外对滑膜细胞炎症因子无直接作用,灌服乌梢蛇CⅡ可以抑制滑膜细胞炎症因子的水平和活性.     

骨灵片对去势大鼠骨小梁三维结构/骨强度的干预研究

目的 通过观察补肾中药骨灵片对骨质疏松大鼠腰椎松质骨二维平面和三维结构的改变以及对骨强度的影响,进一步探讨骨灵片抗骨质疏松的作用机制.方法 选取3月龄SD雌性大鼠18只,随机分为假手术组,去卵巢组,骨灵片低、中、高3个剂量组(根据人鼠剂量换算标准),以雌激素为对照组.通过硬组织切片观测二维形态计量学.在其基础上利用连续切片摄像及图像数码处理技术重建腰椎骨小梁的空间结构.结合计算机3D-Doctor软件测量相关三维参数.结果 去势后的模型组较之假手术组,骨小梁分离度明显升高,其余参数均显著下降(P<0.01);经骨灵片干预后的各组与去卵巢组比较可见,骨灵片各剂量组的骨小梁厚度显著增加,低剂量组对于骨小梁的面积百分数无明显增高,中、高剂量组在骨小梁数量、面积百分数、分离度上的改善较低剂量组显著.三维重建后的结果显示,高剂量组的骨小梁体积百分数和各剂量组的体元总数明显升高(P<0.01);骨灵片组与雌激素对照组相比,中剂量组在骨小梁厚度、体积百分数上的增加有显著差异(P<0.05),高剂量组的体元总数显著升高(P<0.01);相关分析显示三维体元总数及骨小梁体积百分比与二维骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁数量呈显著正相关,与骨小梁分离度呈明显负相关.各组骨小梁体积百分数在三维重建前后无显著差异(P0.05).结论 构建的三维模型结合相关参数测量的结果反映出模型组在骨小梁结构上存在典型的骨质疏松改变;经骨灵片干预后的大鼠,骨小梁的结构较之模型组有明显改善,尤其是中、高剂量组在骨结构的厚度、紧密性以及体积百分数上有显著升高.结合骨灵片对骨密度以及骨力学的改善,提示该药可以通过增强骨小梁实际结构的方式,起到增加骨强度,改善骨负荷,有效抗骨质疏松的作用.     

医院动物实验伦理学审查的意义与规范

阐述了实验动物对医院医、教、研的作用,即借助实验动物完成的新药新技术对于医院的发展起到了很大的促进作用;实验动物平台是医院教学工作不可缺少的重要的组成部分;实验动物是医学研究进步与发展的重要支撑条件,是提升医院科研水平与竞争实力、实现可持续发展的重要平台.讨论了保护、关爱动物对建立和谐医院、提高医生医德、促进科技交流的意义,并简要介绍了某医院规范实验动物伦理审查的一些经验与体会.     

TLR7激动剂Imiquimod减弱转染IL-10的小鼠髓样树突状细胞的负向调节功能

目的:观察Toll样受体7(Toll like receptor 7,TLR7)激动剂Imiquimod 对白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)转染小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone-marrow derived dendritic cell,mDC)免疫功能影响?方法:转染IL-10至小鼠mDC,TLR7激动剂Imiquimod刺激48 h,利用流式细胞仪检测DC表面标志MHCⅡ?CD80?CD86及FasL等分子的表达;ELISA检测细胞产生IL-6?肿瘤坏死因子α(TNF-α)?结果:IL-10抑制mDC表达MHCⅡ?CD80?CD86分子,降低其分泌IL-6?TNF-α,促进其表达FasL,而TLR7激动剂刺激增加了IL-10转染mDC表达MHCⅡ?CD80?CD86分子,促进其产生IL-6?TNF-α,抑制FasL表达?结论:TLR7激动剂可逆转IL-10诱发的DC免疫应答低下?     

骨灵片对去势大鼠骨小梁三维结构／骨强度的干预研究

目的通过观察补肾中药骨灵片对骨质疏松大鼠腰椎松质骨二维平面和三维结构的改变以及对骨强度的影响．进一步探讨骨灵片抗骨质疏松的作用机制。方法选取3月龄SD雌性大鼠18只，随机分为假手术组。去卵巢组。骨灵片低、中、高3个剂量组（根据人鼠剂量换算标准），以雌激素为对照组。通过硬组织切片观测二维形态计量学．在其基础上利用连续切片摄像及图像数码处理技术重建腰椎骨小梁的空间结构，结合计算机3D-Doctor软件测量相关三维参数。结果去势后的模型组较之假手术组，骨小梁分离度明显升高，其余参数均显著下降（P〈0．01）；经骨灵片干预后的各组与去卵巢组比较可见，骨灵片各剂量组的骨小梁厚度显著增加．低剂量组对于骨小梁的面积百分数无明显增高，中、高剂量组在骨小梁数量、面积百分数、分离度上的改善较低剂量组显著。三维重建后的结果显示，高剂量组的骨小梁体积百分数和各剂量组的体元总数明显升高（P〈0．01）：骨灵片组与雌激素对照组相比，中剂量组在骨小梁厚度、体积百分数上的增加有显著差异（P〈0．05），高剂量组的体元总数显著升高（P〈0．01）；相关分析显示三维体元总数及骨小梁体积百分比与二维骨小梁面积百分数、骨小梁厚度、骨小梁数量呈显著正相关，与骨小梁分离度呈明显负相关。各组骨小梁体积百分数在三维重建前后无显著差异（P〉0．05）。结论构建的三维模型结合相关参数测量的结果反映出模型组在骨小梁结构上存在典型的骨质疏松改变；经骨灵片干预后的大鼠。骨小梁的结构较之模型组有明显改善，尤其是中、高剂量组在骨结构的厚度、紧密性以及体积百分数上有显著升高。结合骨灵片对骨密度以及骨力学的改善，提示该药可以通过增强骨小梁实际结构的方式，     

骨灵片对骨质疏松大鼠血清OPG/RANKL、PICP和相关细胞因子的影响

目的观察骨灵片对骨质疏松症（OP）大鼠血清OPG、RANKL及PICP和相关细胞因子（IL-6、TNF-α和IL-4）表达的影响。方法随机将大鼠分为正常对照组、模型组、骨灵片高、中、低剂量组,采用去势法建立大鼠OP动物模型,术后1个月,骨灵片组给予骨灵片,给药后3个月,采用ELISA法检测血清OPG、RANKL及PICP和IL-6、TNF-α、IL-4。结果与模型组比较,骨灵片各组的OPG、PICP值显著升高（P〈0.05,P〈0.01）,而RANKL、IL-6和TNF-α值均显著下降（P〈0.01,P〈0.01,P〈0.05）,骨灵片高、中剂量组的IL-4值显著升高（P〈0.05）。结论骨灵片可能通过上调OPG,下调RANKL的表达,影响OPG系统,并可能通过调节IL-6、TNF-α、IL-4水平,影响破骨细胞功能,抑制骨吸收,同时可能通过增加PICP表达而使I型胶原的合成增加,进而影响骨的韧性和强度,达到防治OP的目的。     

犬胸段人工食管移植手术及其护理

目的 探讨手术方法及其术后护理对犬胸段人工食管移植成活率的影响。方法 用8cm长的人工食管分别原位替换30只杂种犬的胸段食管，采用“内套式”吻合法，间断、全层缝合，并按人的护理要求进行护理。结果 30只实验犬手术的成活率为96．7％，吻合口瘘的发生率为3．3％。结论 精密恰当的手术与精心细致的护理对于提高犬胸段人工食管移植的成活率有较大的帮助。     

浅谈实验动物安乐死

在动物实验过程中或结束后,通常会为免除或减轻动物痛苦、节约动物饲养成本、获取精确的实验数据等原因,对实验动物施行安乐死。实施实验动物安乐死,应当由经过伦理道德、技术和心理培训的人员选择适当的仁慈终点,根据动物的品种、年龄、数量、身体状况及实验目的选择最合适的安乐死方法,使动物在无痛苦的状态下迅速失去意识,直至死亡。     

类风湿关节炎大鼠模型的构建及昆明山海棠对大鼠佐剂性关节炎的干预研究

目的:制作和比较佐剂性关节炎大鼠模型及胶原性关节炎大鼠模型,选择外观及病理变化更明显的模型来观察昆明山海棠制剂对其的干预作用.方法:构建AA和CIA大鼠模型,采用肿胀度评分法观察造模前后大鼠关节变化情况,造模后28 d分离关节滑膜、切片HE染色,观察滑膜炎症,ELISA方法检测血清中细胞因子(IL-1β、TNF-α、TGF-β)水平;观察昆明山海棠对大鼠关节肿胀度、血清细胞因子(IL-1β、TNF-α、TGF-β)及关节滑膜组织炎症的影响.结果:从造模后16 d开始AA组和CIA组的关节肿胀度升高(P＜0.01);AA组在出现肿胀的时间及程度上与CIA组比较有显著差异(P＜0.01);造模后28 d,两个模型组血清中IL-1β、TNF-α水平升高,TGF-β水平下降(P＜0.01),同时,两个模型组间也存在显著差异(P＜0.05);造模后,AA组滑膜组织有大量炎性细胞浸润、纤维素样渗出及出现丰富的血管翳;经过昆明山海棠的干预,高、中剂量组关节肿胀得到明显改善(P＜0.01);昆明山海棠高、中剂量能抑制血清中IL-1β、TNF-α水平及提高TGF-β水平(P＜0.01).结论:AA大鼠模型与CIA模型比较出模时间更早,症状更明显;昆明山海棠能改善AA大鼠关节肿胀度,抑制血清中细胞因子的水平,对AA大鼠有明显的治疗作用.