位点特异性PCR鉴别桃仁中掺入苦杏仁的方法分析

目的 由于中药材传统真伪鉴别方法的局限性,本研究拟通过位点特异性聚合酶链式反应（PCR）建立一种能够快速鉴别桃仁中掺有苦杏仁的方法。方法 通过比对苦杏仁与桃仁的核糖体DNA内转录间隔区（ITS）基因序列,寻找单核苷酸多态性（SNP）位点并设计特异性鉴别引物。利用不同的苦杏仁和桃仁样品进行PCR扩增,对影响PCR反应体系的退火温度、引物浓度、循环数等条件进行优化,并对该方法的专属性和检出限进行了考察。另外,利用建立的PCR鉴别方法对不同来源和不同产地桃仁中掺有不同比例苦杏仁的样品进行检测,以验证该方法的稳定性和准确性。结果 建立了桃仁中掺混苦杏仁的特异性PCR鉴别方法,在退火温度63 ℃和引物循环数30个时仅有苦杏仁能扩增得到432 bp的特异性条带,桃仁样品则无此条带。该方法对苦杏仁的最低检出限为0.2 ng,其对桃仁中掺入苦杏仁的检出限为1%,可用于日常桃仁中掺混苦杏仁的检测。结论 建立的位点特异性PCR方法能够准确地检测桃仁中是否掺有苦杏仁,可为桃仁的质量控制提供实验依据,以保障其临床用药安全。     

PCR-RFLP鉴别当归药材及饮片中掺混伪品——欧当归的方法

目的 该研究拟通过限制性片段长度多态性聚合酶链反应方法（PCR-RFLP）建立一种能快速鉴别当归药材及饮片中掺伪欧当归的方法。方法 通过比对当归和欧当归的核糖体DNA内转录间隔区（ITS）序列酶切位点,选择欧当归的特异性酶切位点Fnu4HⅠ,并设计PCR-RFLP反应引物,对影响PCR-RFLP反应的退火温度、引物浓度、循环数和酶切时间等条件进行优化,并对该方法的准确性进行了考察。另外,利用建立的PCR-RFLP鉴别方法对掺伪不同比例和不同来源的当归掺伪样品进行了适用性考察。结果 建立了当归药材及饮片中掺伪欧当归的PCR-RFLP鉴别方法,在退火温度63 ℃,循环数为30时,掺有欧当归的当归样品经过特异性引物扩增后,能被Fnu4HⅠ限制性内切酶酶切,在100~500 bp检出2条单一DNA条带,当归样品则无此条带。该方法对当归中掺入欧当归的检出限为3%,可用于日常当归中掺混欧当归的检测。结论 建立的PCR-RFLP鉴别方法能够灵敏、准确地检测当归药材及饮片中是否掺有欧当归,可为当归的质量控制提供检验依据,以保障其临床用药安全。