盐酸埃克替尼对人T淋巴细胞增殖的影响

目的 观察酪氨酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitor,TKI)盐酸埃克替尼对人T淋巴细胞增殖的影响.方法应用免疫磁珠分选的方法从外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中分选出T淋巴细胞,分别加入不同浓度的盐酸埃克替尼培养1 h后,加入PMA刺激T细胞增殖,培养48~72 h后分别收集细胞和细胞培养上清.采用四氮甲唑兰比色法(MTT法)检测各组细胞的增殖情况.结果本研究比较了培养72 h后各组细胞的增殖情况,发现盐酸埃克替尼能够抑制T细胞的增殖,各组抑制率如下:盐酸埃克替尼1000 ng/mL组为(12.0±5.0)%(P=0.053),2500 ng/mL组为20.0±3.6%(P=0.011),5000 ng/mL组为21.6±5.6%(P=0.022).结论盐酸埃克替尼能够抑制T细胞的增殖.     

细胞因子诱导的杀伤细胞治疗恶性黑素瘤临床疗效的初步分析

目的:初步评价细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)在恶性黑素瘤治疗中的效果。方法:收集天津医科大学附属肿瘤医院2005年1月至2010年12月术后接受CIK治疗的38例恶性黑素瘤患者作为CIK治疗组,按1∶3比例选取同期术后未接受CIK治疗的114例恶性黑素瘤患者作为对照组,两组配对因素包括临床分期、性别、年龄、有无溃疡、乳酸脱氢酶(lactate dehyolrogenase,LDH)活性、病理类型、KPS评分(Karnofsky performance status scale)等均衡一致。随访时间为2005年3月至2012年3月,临床疗效的观察终点为总生存(overall survival,OS)期。结果:CIK治疗组与对照组1年OS率分别为86.8%、74.6%(P=0.097),3年OS率分别为76.3%、46.5%(P=0.001),5年OS率分别为71.1%、43.9%(P=0.004);CIK治疗组中位生存期明显长于对照组(CIK治疗组中位生存期未达到观察终点,对照组中位生存期为20.1个月,P=0.004)。单因素和多因素分析显示,病理类型、LDH水平是影响CIK治疗恶性黑素瘤患者疗效的独立影响因素;CIK免疫治疗的疗程数可能与黑素瘤患者OS相关,CIK疗程>8次具有延长黑素瘤患者OS期的趋势。结论:CIK免疫治疗能改善恶性黑素瘤患者的OS期,增加CIK疗程数可能提高其疗效。     

GASP-1基因干扰对非小细胞肺癌细胞恶性侵袭和上皮间质转化以及微管形成的影响

目的 研究G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GASP-1)基因干扰对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞恶性侵袭和上皮间质转化(EMT)及微管形成的影响.方法 以肺癌A549细胞为模型进行研究.将前期试验筛选出的shRNA1用Lipofectamine 2000转染到肺癌A549细胞.分组:对照组、shRNA组和GASP-1-shRNA1组.采用Transwell实验检测细胞侵袭能力,划痕实验检测细胞迁移能力;显微观察上皮间质的形态转化;微管形成实验检测微管的结节数;Western blot 检测EMT标志物E-cadherin、N-cadherin、Fibronectin和VEGF蛋白的表达量.结果 与对照组相比,GASP-1-shRNA1组中每个视野的细胞侵袭数目减少,划痕愈合率降低,表明干扰GASP-1基因可抑制A549细胞侵袭和迁移.与对照组相比,GASP-1-shRNA1组细胞EMT现象被抑制.微管形成实验中,与对照组相比,GASP-1-shRNA1组细胞微管结节数减少,血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达水平降低.结论 GASP-1基因干扰可抑制NSCLC细胞的恶性侵袭、EMT和微管形成.     

肺浸润性腺癌中GASP-1的表达及意义

目的:观察肺浸润性腺癌中G蛋白偶联受体相关分选蛋白1（GASP-1）的表达,探讨其在术后组织中表达的临床意义,分析血清及术后组织中表达的一致性。方法:选择2014年09月至2015年03月确诊为肺浸润性腺癌并行根治手术的患者59例作为研究对象,选择肿瘤组织作为观察组,选择肺原位腺癌59例作为对照组,选择正常肺组织59例作为正常对照组。应用免疫组化法检测三组中GASP-1、观察组中增殖细胞核抗原（PCNA）的表达;构建过表达GASP-1肺腺癌A549细胞系,建立空白对照组和GASP-1过表达组,应用Western Blot法检测PCNA的表达。应用ELISA法检测观察组术前空腹静脉血中GASP-1的表达。结果:三组中GASP-1表达的阳性率差异有统计学意义,GASP-1在不同肿瘤最大径、肺膜侵犯及淋巴结转移分组表达的阳性率中差别有统计学意义;GASP-1的表达与生存时间有关,与PCNA具有正相关性,过表达GASP-1的肺癌细胞系中PCNA表达升高;观察组血清和组织中GASP-1的表达具有正相关性。结论:肺浸润性腺癌中GASP-1高表达,对病变的形成和进展有促进作用,GASP-1可能通过调控细胞增殖发挥促进肿瘤进展的作用,术后检测GASP-1的表达对判断预后有一定价值。血清和组织中GASP-1的表达具有一致性。     

miR-630对三阴性乳腺癌细胞侵袭的影响及其机制研究

目的 研究miR-630在人体三阴性乳腺癌组织中的表达情况,探讨miR-630是否通过下调Sox4影响三阴性乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞的侵袭.方法 收集157例行乳腺癌根治术患者癌组织标本及癌旁正常乳腺组织,其中三阴性乳腺癌36例,通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测各组(正常乳腺组、非三阴性乳腺癌组、三阴性乳腺癌组)组织中与乳腺癌相关的miR-630、miR-21、miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表达情况;蛋白免疫印迹试验(Western blot)检测3组标本中细胞侵袭相关蛋白COL1 A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9的表达情况;进一步在细胞实验中,通过转染miR-630mimic或空质粒后,再转染过表达Sox4的质粒或空质粒至离体培养的细胞中,Western blot检测细胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达情况,划痕实验和Transwell法观察细胞迁移侵袭情况,利用荧光素酶实验验证Sox4是miR-630的靶基因.结果 相比于正常乳腺组,miR-630、miR-21在三阴性乳腺癌组织中的表达降低(P＜0.01);miR-195、miR-134、miR-200a、miR-381、miR-1228的表达在3组间差异无统计学意义(P＞0.05);相比于正常乳腺组及非三阴性乳腺癌组,三阴性乳腺癌组织中COL1A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达增多(P＜0.05).在细胞实验中,相比于空质粒组,转染miR-630 mimic后,MDA-MB-231细胞中COL1 A1、COL1A5、MMP-2、MMP-9、Sox4的表达减少(P＜0.05),MDA-MB-231细胞的迁移侵袭能力减弱(P＜0.01);荧光素酶实验结果显示,miR-630能够显著降低Sox4-3’-UTR质粒的荧光素活性(P＜0.05);相比于过表达miR-630+空质粒组,转染过表达miR-630+过表达Sox4组,MDA-MB-231细胞中COL1A1、COL1A5、MMP-2和MMP-9表达增加(P＜0.05),细胞的迁移侵袭能力增强(P＜0.01).结论 在三阴性乳腺癌组织中,miR-630低表达;miR-630可以通过下调Sox4从而抑制MDA-MB-231的迁移和侵袭.     

血浆proGRP和I-TAC蛋白在小细胞肺癌中的意义

摘 要: ［目的］ 分析血浆样本中的差异蛋白在小细胞肺癌（small cell lung cancer，SCLC）诊断及预后中的价值。［方法］ 首先应用GSH-CAA-X00蛋白芯片技术检测4例SCLC治疗前后及4名健康人外周血，结合生物信息学分析筛选差异蛋白。应用ELISA检测36例SCLC治疗前后及8名健康人血浆样本中关键差异蛋白胃泌素释放肽前体(progastrin releasing peptide，proGRP)、干扰素诱导T细胞趋化因子（interferon-inducible T cell alphachemoattractant，I-TAC）的表达，分析其表达与SCLC临床指征之间的关系。［结果］蛋白芯片结果显示在健康人和 SCLC 患者治疗前血浆样本中符合筛选且有统计学意义的差异蛋白有 PDGF-AB、S100A8、GHR、GP73、GRO、proGRP、I-TAC等，在 SCLC 患者治疗前后血浆样本中符合筛选且有统计学意义的差异蛋白有 MMP-3、NSE、LRIG3、proGRP、I-TAC等。PDGF-AB、S100A8、GHR、GP73、GRO、MMP-3、NSE、proGRP、I-TAC在健康人、SCLC患者治疗前、治疗后的表达趋势为先上升后下降，其中proGRP、I-TAC在两组间的变化最为显著且都具有统计学意义。ELISA结果显示proGRP、I-TAC与芯片结果一致，即与健康人相比，在SCLC患者表达升高，经治疗后下降，但与临床指征无相关性。［结论］ 差异蛋白尤其是proGRP、I-TAC可能是SCLC的潜在诊治肿瘤标志物，单独使用或与其他常用生物标志物联合使用可能有助于SCLC的早期诊断及预后判断。     

MicroRNA-630 对三阴性乳腺癌细胞增殖的影响及其机制研究

研究 MicroRNA-630（miR-630）是否通过下调 4 影响三阴性乳腺癌细胞系（MDA-MB-231）细胞的增殖。方法 转染 miR-630mimic 和 miR-NC 至离体培养的 MDA-MB-231 细胞中,Western blot检测 MDA-MB-231 细胞中 27、 67、 4 的表达情况,MTT 法检测细胞增殖情况,利用荧光素酶素实验验证 4 是 miR-630 的靶基因;再通过转染过表达 4 的质粒至 MDA-MB-231 细胞,检测 MDA-MB-231细胞中 27、 67、 4 的表达情况,MTT 法观察细胞增殖情况。结果 相比于空质粒组,转染 miR-630-mimic 后,MDA-MB-231 细胞中 Ki67、Sox4 的表达减少（ <0.05）,27 表达增加（ <0.05）,MDA-MB-231细胞的增殖减少（ <0.05）;荧光素酶试验结果显示,miR-630 能够降低 4-3''-UTR 质粒的荧光素活性（ <0.05）;相比于 miR-630+ 空质粒组,转染过表达 4 质粒后,MDA-MB-231 细胞中 67 表达增加（ <0.05）,27 表达减少（ <0.05）,细胞的增殖增加（ <0.05）。结论 miR-630 可以通过下调 4 从而抑制MDA-MB-231 的增殖。     

G蛋白偶联受体相关分选蛋白1在非小细胞肺癌中表达的临床意义及其与顺铂化疗抵抗的关系

目的 探究G蛋白偶联受体相关分选蛋白1(GPRASP1)的表达与非小细胞肺癌(NSCLC)细胞的顺铂(DDP)敏感性的关系。方法 收集癌旁组织、原发NSCLC组织及复发NSCLC组织，用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测GPRASP1和腺苷三磷酸结合盒式亚家族A成员5(ABCA5)mRNA的表达情况。空白组和过表达组分别用慢病毒转染空白载体和GPRASP1过表达载体于A549细胞中；对照组和抵抗组分别用慢病毒转染对照小干扰RNA(si-control)于A549细胞及DDP耐药细胞中；干扰组用慢病毒转染GPRASP1小干扰RNA(si-GPRASP1)于DDP耐药细胞中。用CCK-8实验法检测细胞对DDP的半抑制浓度(IC₅₀),用RT-PCR法检测各组细胞中GPRASP1与ABCA5的表达情况。结果 癌旁组织、NSCLC组织与复发NSCLC组织中GPRASP1 mRNA表达量分别为(1.27±0.16)×10^-2、(2.68±0.30)×10^-2和(3.89±0.72)×10^-2,ABCA...