拉曼光谱检测在辅助生殖领域的研究进展

辅助生殖技术（ART）的体外受精/胞浆内单精子注射-胚胎移植（IVF/ICSI-ET）需要实验室条件下处理两种配子、体外受精、体外培养形成胚胎或囊胚并挑选质量好的胚胎进行移植,使母亲妊娠,是目前解决不孕不育最有效的手段。因此,客观评估配子及植入前胚胎的质量显得非常重要。拉曼光谱不受被测物形态限制,无需样本制备或标记等复杂操作,属于无损伤检测。由于其具有检测迅速、耗时短、敏感度高及分析准确等特点,因此近年被广泛应用于快速检测蛋白质、核酸和脂类等生物大分子损伤。拉曼光谱技术主要有表面增强拉曼光谱技术、共焦显微拉曼光谱技术和傅里叶变换拉曼光谱技术3种。本文概述拉曼光谱的特点及上述3种主要拉曼光谱技术在生物样品分析方面的应用,探讨拉曼光谱技术应用于对精液、卵子和植入前胚胎质量检测的可能性,在辅助生殖领域具有潜在的应用前景。     

HPLC法测定肾乐胶囊中橙皮苷的含量

目的:建立HPLC测定肾乐胶囊中橙皮苷含量的方法。方法:采用HPLC法对肾乐胶囊中橙皮苷进行含量测定。测定条件:采用Diamonsil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(40∶60),检测波长:283 nm,流速:1.0mL.min-1,柱温:35℃。结果:在本法条件下,橙皮苷与其他杂质峰分离良好,进样量在8.544～85.44 mg.mL-1与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 9),平均加样回收率为101.6%,RSD为0.54%(n=6)。三个批次的肾乐胶囊中橙皮苷的平均含量为2.75 mg.g-1。结论:采用该方法测定肾乐胶囊中的橙皮苷,简便易行,结果准确,可作为肾乐胶囊的质量控制方法。     

拉曼光谱检测在辅助生殖领域的研究进展

辅助生殖技术(ART)的体外受精/胞浆内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)需要实验室条件下处理两种配子、体外受精、体外培养形成胚胎或囊胚并挑选质量好的胚胎进行移植,使母亲妊娠,是目前解决不孕不育最有效的手段。因此,客观评估配子及植入前胚胎的质量显得非常重要。拉曼光谱不受被测物形态限制,无需样本制备或标记等复杂操作,属于无损伤检测。由于其具有检测迅速、耗时短、敏感度高及分析准确等特点,因此近年被广泛应用于快速检测蛋白质、核酸和脂类等生物大分子损伤。拉曼光谱技术主要有表面增强拉曼光谱技术、共焦显微拉曼光谱技术和傅里叶变换拉曼光谱技术3种。本文概述拉曼光谱的特点及上述3种主要拉曼光谱技术在生物样品分析方面的应用,探讨拉曼光谱技术应用于对精液、卵子和植入前胚胎质量检测的可能性,在辅助生殖领域具有潜在的应用前景。     

24 h 快速眼动睡眠剥夺大鼠血清的蛋白质组学初步研究

摘要： 目的 探讨睡眠剥夺大鼠血清蛋白质组中差异表达蛋白质及其意义。方法 采用改良多平台水环境法 建立 24 h 快速眼动睡眠剥夺大鼠模型。采用随机数字表法将大鼠均分为模型（M）组、 模型对照（MC）组、 空白对照 （BC） 组, 每组 8 只大鼠。观察大鼠体质量变化, 采用 Morris 水迷宫实验检测睡眠剥夺对大鼠学习记忆能力的影响, 并用双向电泳技术筛选血清差异蛋白, LC-MS/MS 技术鉴定差异蛋白。结果 BC 组和 MC 组大鼠建模前后体质量 差异均无统计学意义。M 组大鼠毛发光泽下降, 精神稍差, 较亢奋, 体质量在睡眠剥夺后显著降低。24 h 快速眼动 睡眠剥夺对大鼠学习记忆能力无显著性影响。各组之间蛋白质点数目差异无统计学意义。质谱鉴定出 4 种表达下 降的蛋白, 分别为 Serotransferrin; Glutathione peroxidase 3; Ig kappa chain C region, B allele; Collagen alpha-2(I) chain。 结论 短期睡眠剥夺对机体的损伤可能与铁离子代谢、 氧化应激和免疫功能等有关     

人血白蛋白免疫优势抗原表位的筛选及鉴定

目的：筛选人血白蛋白（HSA）免疫优势抗原表位,为建立一种高特异性HSA制品快速检测方法提供基础。方法采用生物信息学方法比较人与其他物种（猪、马、牛、羊）白蛋白基因序列并预测其抗原表位,获得HSA免疫优势抗原表位;利用大肠杆菌优势密码子获得相应基因,插入PGEX-4T-2载体克隆表达得到重组HSA表位抗原;间接ELISA评价上述重组表位的特异性。结果筛选3个HSA抗原表位,分别位于H1〔126～162氨基酸（aa）〕、H2（314～355aa）、H3（373～424aa）,获得相应基因片段;得到重组抗原的相对分子质量（Mr）分别为3.01×104、3.06×104和3.17×104;抗原活性检测显示373~424aa序列表位具有较高活性,其酶标抗体竞争抑制反应的IC50为1.635 mg/L,高于酶标HSA抗体。结论实验获得了特异性HSA免疫优势抗原表位,对研制一种快速、特异的HSA检测试剂具有重大意义。     

HPLC法同时测定感冒清热颗粒中葛根素与胡薄荷酮的含量

目的：建立HPLC法同时测定感冒清热颗粒中葛根素与胡薄荷酮含量的方法。方法：采用DiamonsilC18色谱柱（250mm×4．6mm,5μm）,用甲醇．水梯度洗脱,检测波长252nm,柱温40℃,流速1．0mL·min^-1,进样量10此。结果：葛根素、胡薄荷酮与其他杂质峰分离良好。葛根素在5．532～88．512gg·mL^-1。与峰面积呈良好的线性关系（r=1．0000）;胡薄荷酮在0．786～12．573μg·mL^-1与峰面积呈良好的线性关系（r=0．9999）,葛根素、胡薄荷酮平均加样回收率分别为100．73％和99．78％,RSD分别为0．62％（n=6）和0．75％（n=6）;不同厂家生产的感冒清热颗粒中葛根素和胡薄荷酮的含量差异较大。结论：该方法操作简便．结果准确．可作为感冒清热颗粒的质量控制方法。     

女性关键生育力评价指标雌二醇、抗苗勒管激素及窦卵泡数目的拉曼光谱检测

目的 选取评价女性生育力的关键指标雌二醇（E2）、抗苗勒管激素（AMH）及窦卵泡数目（AFC）,探究其在健康女性和不孕女性血清样本中表面增强拉曼光谱（SERS）的差异性及其应用于临床女性生育力评价初筛的可能价值。方法 收集南京医科大学第一附属医院生殖医学中心育龄期的健康女性和不孕女性血清标本共236份,所有受试者年龄均处于育龄阶段（22~49岁）,平均年龄为（30.8±5.1）岁。依据临床检测结果,将血清标本分为E2高值组（>5 000 pmol/L,78例）与E2低值组（<500 pmol/L,86例）、AMH高值组（≥ 1.1 ng/mL,33例）与AMH低值组（<1.1 ng/mL,30例）、AFC高值组（>14个,68例）与AFC低值组（<7个,34例）。建立血清SERS分析法并检测各组样本的拉曼光谱,对信号进行正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）、受试者工作特征（ROC）曲线分析及置换检验等统计学处理。结果 血清标本的平均拉曼光谱形态和谱峰E2高值组与低值组之间、AMH高值组与低值组之间、AFC高值组与低值组之间基本相似,但谱峰强弱在3个指标的高值组与低值组之间存在差异。在OPLS-DA模型中,E2、AMH和AFC 3个指标的高值组与低值组之间均具有明显的组间分离趋势,其ROC曲线下面积分别为0.996与0.996、0.995与0.995、1与1。结论 SERS技术具备应用于临床女性生育力初筛的潜力,血清SERS图谱作为不孕不育早期诊断的一种辅助手段值得进一步研究。