两种化学发光电泳迁移率变动分析技术的比较

采用DIG及Biotin标记寡核苷酸,研究了两种非放射性标记电泳迁移率变动分析的实验方法,即化学发光电泳迁移率变动分析实验(chemi-EMSA)的可靠性,并对两种标记体系的化学发光电泳迁移率变动分析实验进行了比较,以确立一种最佳的化学发光电泳迁移率变动分析实验技术。结果表明:通过对转录因子蛋白NF-κB的实验研究,两种标记体系均可以获得良好的电泳迁移率变动分析检测效果,其中“Biotin-streptavidin-HRP-ECL化学发光电泳迁移率变动分析”实验体系更好。     

分子烙印技术及其在药物研究中的应用

早在20世纪40年代，著名的诺贝尔奖获得者Pauling就提出了分子烙印的概念，虽然该学说已经被克隆选择理论所否定，但化学家们却由此受到启示而发明了分子印迹技术。1949年Dickey首次实验了染料在硅胶上的印迹；1972年Wulff等在高分子聚合物上成功地实现了印迹。     

ASPP2基因启动子区DNA甲基化及转录因子DNA结合位点的干湿研究

对p53凋亡刺激蛋白2 (ASPP2)基因启动子区进行了甲基化及转录因子结合位点(TFBS) 的生物信息学分析及实验研究.结果表明,在该基因近端启动子区存在一个长1391bp的CpG岛,且此区域中包含19个转录因子的37个结合位点,其中有13个转录因子的结合位点含有CpG;甲基化预测发现在含CpG的23个TFBS中有18个位点的CpG易发生甲基化.由此推断ASPP2是典型的多因子调控的CpG岛基因,CpG岛的异常甲基化将影响转录因子结合,导致ASPP2基因表达下调.通过对人肝癌细胞株HepG和人成纤维细胞HFL-1的ASPP2基因启动子CpG岛中含4个E2F结合位点区域的甲基化实验检测,证明这种推断是正确的.这一研究说明,对重要基因启动子区DNA甲基化及TFBS的生物信息学研究可为相关的实验研究提供指南,对促进基因表达的表观遗传调控研究具有重要意义.     

蛋白质芯片技术及应用

在高密度微孔板技术和DNA微阵列技术的基础上发展起来的蛋白质芯片技术,能够在蛋白质水平上进行基因高通量表达分析,从而成为蛋白质组学研究的有效方法。蛋白质芯片依靠手工、压印或喷墨的方法将探针蛋白点样在化学膜、凝胶、微孔板或玻片上形成阵列,经过与样品的杂交捕获靶蛋白,再用原子力显微镜、磷光成像仪、光密度仪或激光共聚焦扫描仪进行检测,获得靶蛋白表达的种类、数量及关联等信息。蛋白质芯片已经用于研究蛋白质表达谱构成及变化、蛋白质与生物分子(蛋白质、核酸、配体等)的相互作用、抗原体筛选、酶与底物相互作用。蛋白质芯片在医学临床诊断、疗效分析和药物筛选方面具有潜在的重要应用价值。     

一种中药鉴定gDNA芯片的制备与展望

中药鉴定是中药质量控制系统的首要环节,中药鉴定技术的不断发展提高了药材品质评价水平。至今,中药鉴定技术经历着从传统生药鉴定学的细胞和亚细胞水平向遗传物质DNA分子水平发展的历程,运用DNA芯片技术进行中药鉴定成为中药鉴定发展的方向之一。介绍了筛选gDNA种特异性探针的抑制性差减微阵列“SSH-ar-ray”新技术,该技术是将抑制性差减杂交与基于尼龙膜微阵列杂交相结合。以名贵中药材石斛5个品种作为实验材料,首先是用抑制性差减杂交获得2个品种之间的gDNA差异片段,然后用这些gDNA差异片段与由所有研究品种的gDNA制备成的微阵列杂交筛选到某一个品种的种特异性gDNA片段。这些种特异性gDNA探针作为种特异性探针进行物种鉴定。在此基础上建立中药鉴定gDNA芯片的方法并对其应用进行了展望探讨。     

分子烙印技术及其在药物研究中的应用

早在20世纪40年代,著名的诺贝尔奖获得者Pauling[1]就提出了分子烙印的概念,虽然该学说已经被克隆选择理论所否定,但化学家们却由此受到启示而发明了分子印迹技术。1949年Dickey[2]首次实验了染料在硅胶上的印迹;1972年Wulff[3]等在高分子聚合物上成功地实现了印迹。随着Wulff[     

一种中药鉴定gDNA芯片的制备与展望

中药鉴定是中药质量控制系统的首要环节,中药鉴定技术的不断发展提高了药材品质评价水平。至今,中药鉴定技术经历着从传统生药鉴定学的细胞和亚细胞水平向遗传物质DNA分子水平发展的历程,运用DNA芯片技术进行中药鉴定成为中药鉴定发展的方向之一。介绍了筛选gDNA种特异性探针的抑制性差减微阵列“SSH-ar-ray”新技术,该技术是将抑制性差减杂交与基于尼龙膜微阵列杂交相结合。以名贵中药材石斛5个品种作为实验材料,首先是用抑制性差减杂交获得2个品种之间的gDNA差异片段,然后用这些gDNA差异片段与由所有研究品种的gDNA制备成的微阵列杂交筛选到某一个品种的种特异性gDNA片段。这些种特异性gDNA探针作为种特异性探针进行物种鉴定。在此基础上建立中药鉴定gDNA芯片的方法并对其应用进行了展望探讨。     

NF-κB p50蛋白的原核表达及纯化

目的:提供p50研究所需大量纯蛋白.方法:将编码p50 N端39-376aa肽段的cDNA片段插入到pET-32a ( )载体的BamH Ⅰ和Nco Ⅰ酶切位点之间,构建了p50蛋白原核表达载体(pET-p50),用IPTG诱导表达,His-Bind柱进行纯化.结果:原核表达载体(pET-p50)30 ℃,0.1 mmol/LIPTG诱导5 h,重组蛋白大量表达,经凝胶迁移滞后实验证明纯化的重组p50蛋白具有序列特异性DNA结合活性.结论:在优化条件下,通过His-Bind柱亲和层析法可以获得大量重组蛋白,并通过凝胶迁移滞后实验证明其具有较高的活性.     

可乐对小鼠精子质量影响的研究

目的探讨可乐对小鼠精子质量和数量的影响。方法42只昆明种雄性小鼠随机分为低剂量组（0．3mL可乐）、高剂量组（0．6mL可乐）、阴性对照组（0．6mL生理盐水）和阳性对照组,低剂量组、高剂量组和阴性对照组各组又分为连续灌胃28d组和连续灌胃42d组。每天定时给予各组小鼠灌胃,灌胃第28天和第42天分批处死实验组和阴性对照组小鼠。阳性对照组0．6mL环磷酰胺腹腔注射1次,第7天脱臼处死阳性对照组小鼠。处死小鼠后,分离附睾测定小鼠精子运动参数,并在光镜下观察精子畸形发生率。结果连续灌胃28d和42d可乐的各剂量组小鼠与相应的阴性对照组比较,精子密度随灌胃时间的延长明显降低（P=0．000）;灌胃28d组和42d组中各组间精子畸变率比较,差异均有统计学意义（P=0．000）;灌胃28d高剂量组和低剂量组的精子畸变率均高于阴性对照组（P〈0．05）,高剂量组精子畸变率高于低剂量组（P〈0．05）;畸形精子分类中以无定型为主,无钩型次之,香蕉型较少见,双尾型及尾折迭型极少见,畸形主要集中在精子头部。结论可乐对雄性小鼠精子密度和精子形态有一定的影响。     

中药调控NF-κB活性的研究进展

核因子-κB (nuclear factor-κB, NF-κB) 是真核细胞内广泛存在的一种转录因子,在免疫、炎症、肿瘤等众多疾病的发生发展中起着重要作用.近年来大量研究发现很多对NF-κB相关疾病具有显著疗效的中药都表现出对NF-κB的活性抑制作用,通过在细胞及分子水平上对中药的作用机理分析表明,中药中确实存在着一些活性成分,能够在细胞或分子水平上调节NF-κB的活性,发挥治疗的作用.因此,提示中药可作为筛选NF-κB活性抑制药物的天然资源库,从中筛选NF-κB活性抑制药物是可行的.本文对具有NF-κB活性抑制作用的中药提取物、单体中药、单味中药和中药复方做了综述.