HPLC测定吉非替尼中的有关物质

目的 采用HPLC法测定吉非替尼中的有关物质.方法 色谱柱为Phenomenex C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温40℃,流速1.0 mL·min-1,流动相为乙腈-乙酸铵缓冲液(1.5g乙酸铵中加入1L水溶解,加氨水调pH8.50±0.05),梯度洗脱,检测波长247 nm,进样量20 μL.结果 杂质Ⅱ～Ⅸ的线性范围分别为0.2101～ 1.2020、0.1940～3.880、0.2000～4.000、0.1920 ～3.8400、0.1952 ～3.904、0.2020 ～4.0400、0.1950 ～3.900、0.2022～4.0480、0.1920 ～3.8440μg·mL-1;检测限(S/N=3)分别为225、44.5、48.0、59.4、77.6、75.2、72.0、144、291 ng·mL-1.结论 所用方法灵敏、专属、准确,适用于吉非替尼有关物质的测定.     

松针提取物α-蒎烯对肝癌HepG2细胞miR-221及其下游靶基因表达的影响

为探讨松针提取物α-蒎烯的抗肝癌作用及机制,该实验首先使用流式细胞技术检测α-蒎烯对HepG2细胞周期的影响,然后选取与G2/M期调控相关的miR-221,采用荧光定量PCR技术检测α-蒎烯干预对其表达的影响,同时通过Target Scan等在线生物信息学软件分析miR-221的靶基因,最后对相关靶基因的表达用定量PCR进行检测。结果显示,α-蒎烯呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖,可阻滞细胞于G2/M期(P0.05),显著下调HepG2细胞内miR-221的表达(P0.05),生物信息学分析显示CDKN1B/P27和CDKN1C/P57可能是miR-221的下游靶基因,荧光定量PCR显示α-蒎烯处理后二者的表达显著上调(P0.001,P0.05)。上述结果表明,α-蒎烯可能通过阻滞细胞周期于G2/M期从而发挥抗肝癌作用,其对G2/M期的调控可能与下调miR-221表达和上调其靶基因CDKN1B/P27和CDKN1C/P57的表达有关。     

吉非替尼有关物质的合成

为控制吉非替尼的药品质量,建立吉非替尼原料药的质量标准,从吉非替尼的合成路线入手,分析并合成其中可能存在的4个有关物质:4-(3-氯-4-氟苯基)氨)-7-甲氧基喹唑啉-6-醇(A)、N-(3-氯-4-氟苯基)-6,7-二甲氧基喹唑啉-4-胺(B)、4-(3-氯-4-氟-苯基)氨基)-7-甲氧基喹唑啉-6-基)氧基)丙基)氨基)乙醇(C)和N-(3,4-二氯苯基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代)喹唑啉-4-胺(D),并经¹H NMR和MS确证结构。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对PM2.5染毒血管内皮细胞的保护作用

目的 观察丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对PM2.5引起的血管内皮细胞EA.hy926损伤的保护作用.方法 取对数生长期EA.hy926细胞分为对照组、100 μg/mL PM2.5组及STS干预组(先给予12.5、25、50 μg/mL STS干预后再加入100 μg/mL PM2.5).24 h后CCK8法测定细胞的存活率,荧光标记法检测细胞内氧自由基生成情况,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测凋亡蛋白酶Caspase-9和Caspase-3的表达变化.结果 PM2.5对EA.hy926细胞有明显的毒性,可以导致细胞内氧自由基生成增多,并引起Caspase-9和Caspase-3活化造成细胞凋亡,与对照组比较差异有统计学意义;STS可以抑制PM2.5对EA.hy926细胞的毒性,降低胞内活性氧(ROS)生成及Caspase-9和Caspase-3的活化,减少细胞凋亡数目,与PM2.5组比较差异有统计学意义.结论 丹参酮ⅡA磺酸钠可以减少PM2.5引起的血管内皮细胞凋亡,其保护作用可能与抑制氧自由基生成有关.     

PM2.5对血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响及机制

目的:从大气细颗粒物PM2.5对血管内皮细胞氧化应激和凋亡的影响,研究PM2.5对血管内皮细胞的毒性。方法:体外培养血管内皮细胞株EA.hy926,用不同浓度的PM2.5染毒24 h后,用CCK-8法测细胞的活性,用DCFH-DA荧光标记法检测细胞内氧自由基生成情况,用流式细胞术检测细胞凋亡率,然后用Western blot法检测凋亡相关蛋白细胞色素C、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达变化。结果:CCK-8法结果显示PM2.5对血管内皮细胞有明显的毒性,在浓度大于25 mg/L时可使EA.hy926细胞活性显著下降;PM2.5染毒24 h后可见DCFH-DA荧光染色增强,说明细胞内有大量的氧自由基形成;流式细胞术和Western blot检测证实PM2.5可以通过上调细胞色素C表达和活化cleaved caspase-9和cleaved caspase-3而诱导EA.hy926细胞凋亡。此外,用N-乙酰半胱氨酸抑制氧自由基生成可以抑制血管内皮细胞凋亡,提示PM2.5引起的细胞凋亡与氧化应激有关。结论:PM2.5可导致血管内皮细胞氧化应激水平增强和凋亡增加,这可能是其影响心血管系统功能的机制之一。