钙感受器STIM1参与主动脉平滑肌细胞衰老的作用研究

目的:探讨钙感受器基质相互作用分子1(STIM1)参与主动脉平滑肌细胞衰老的作用研究.方法:采用过氧化氢(H2O2)诱导人主动脉平滑肌细胞建立细胞衰老模型,并用衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老变化;利用Cre-loxP基因重组技术,制备平滑肌特异性STIM1基因敲除(sm-STIM1-KO)小...     

Orai1通道在高血压大鼠心房纤维化中的作用机制研究

目的：明确Orai1通道对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHR)心房纤维化及房颤(atrial fibrillation,AF)易感性的影响。方法：采用45～46周龄的Wistar大鼠(n=16)及SHR(n=13)分别作为对照组和实验组,快速起搏心房观察两组大鼠AF的可诱发性。HE和Masson染色观察两组大鼠心房组织的纤维化程度。Western blot检测两组大鼠心房组织纤维化相关的Ⅰ型胶原蛋白(collagen type Ⅰ,Col1)、Ⅲ型胶原蛋白(collagen type Ⅲ,Col3)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP2)和MMP9,以及钙信号通路相关蛋白Orai1、钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)和活化T细胞核因子3(nuclear factor of activated T cells 3,NFAT3)的表达。在原代培养的乳大鼠心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)上,利用腺病毒转染使其过表达Orai1后,采用Western b...     

1型糖尿病小鼠心房肌细胞电重塑及AGE对其的影响

目的探讨1型糖尿病小鼠及AGE参与心房肌细胞电重塑机制研究。方法STZ腹腔注射小鼠,诱导1型糖尿病模型;全细胞膜片钳技术检测糖尿病小鼠心房肌细胞动作电位时程、I Ca,L、I to及I kur电流变化;Western blot检测心房肌组织AGE、RAGE及通道蛋白表达水平;AGE/RAGE处理HL-1细胞,检测离子通道蛋白的表达。结果与对照组相比,糖尿病小鼠随机血糖水平明显上升,心房肌细胞动作电位时程明显延长,I Ca,L、I to、I kur电流密度及通道蛋白Cav1.2、Kv4.3、Kv1.5表达均明显降低,AGE、RAGE蛋白水平增加;AGE诱导HL-1细胞离子通道蛋白明显下调,Anti-RAGE预处理可逆转其作用。结论1型糖尿病心房肌细胞动作电位明显延长,I Ca,L、I to、I kur电流及其通道蛋白表达降低;AGE参与HL-1心房肌细胞电重塑。     

钙感受器STIM1在小鼠主动脉平滑肌收缩反应中的作用研究

目的探讨钙感受器STIM1在小鼠主动脉平滑肌收缩反应中的作用。方法采用Cre-lox重组技术制备平滑肌特异性STIM1敲除小鼠(sm-STIM1-KO);采用离体血管张力测定方法,测定sm-STIM1-KO小鼠主动脉对不同血管收缩剂反应,并给予不同的钙通道阻断剂,观察血管收缩变化。结果sm-STIM1-KO小鼠制备成功。sm-STIM1-KO小鼠钙库操纵的钙通道(SOCC)介导的血管收缩消失;与野生型相比,sm-STIM1-KO小鼠对Phe、5-HT和U46619总的收缩反应无明显变化,但在有钙和无钙的K-H溶液中,经硝苯地平孵育后,两组血管收缩均被抑制,且sm-STIM1-KO小鼠收缩明显低于野生型小鼠(P<0.01);在含硝苯地平的高钾溶液中,Phe引起的快相收缩没有变化,慢相收缩下降(P<0.01);sm-STIM1-KO小鼠肌浆网钙释放介导的血管收缩达峰速度和下降速度明显加快(P<0.05)。结论STIM1是SOCC介导的血管收缩的必须组成成分,且参与肌浆网钙释放介导的血管收缩反应。