不同方法提取和处理中华绒螯蟹组织蛋白的过敏原组分分析

目的:分析不同方法提取和处理中华绒螯蟹组织的蛋白组分及过敏原组分,为检测中华绒螯蟹特异性IgE提供最佳抗原制备方法。方法:分别采用PBS提取法、丙酮抽提法和裂解液提取法提取中华绒螯蟹组织蛋白,并用裂解液提取法分别提取加热前、后的蟹蛋白;采用SDS-PAGE和双向电泳分析蛋白组分,采用Western blot分析过敏原组分。结果:不同方法提取的蛋白组分、sIgE与蛋白结合的强度和所识别的蛋白组分存在一定差异。PBS提取液蛋白主要分布在94、85、76、66、18kD,丙酮提取液蛋白主要分布在94、85、76、36 kD,裂解液提取液蛋白主要分布在200、125、51、43、38 kD。PBS提取液与sIgE结合的阳性反应条带主要分布在76、66、53、43、38、18 kD;丙酮提取液主要分布在94、76、66、50、43、38、18 kD;裂解液提取液主要分布在200、105、94、76、43、38、18 kD。加热前、后蟹蛋白过敏原组分差别不大。结论:裂解液提取法提取的中华绒螯蟹过敏原更适于制备测定特异性IgE的抗原。加热不影响蟹过敏原组分和与特异性IgE的结合活性。     

牛奶中高分子质量蛋白致敏作用的初步研究

目的探讨牛奶中高分子质量蛋白在牛奶过敏过程中的致敏作用。方法选取牛奶过敏患者血清30例,皮肤点刺试验阳性,血清特异性Ig E(s Ig E)检测结果均为阳性且≥1+。健康对照血清1例,血清s Ig E检测阴性,无过敏史。空腹采血,收集血清于-20℃冻存备用。利用Sephadex G200凝胶层析获得牛奶高分子质量蛋白,通过蛋白免疫印迹法(Wetern blot)和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清s Ig E的结合活性。结果 SDS-PAGE显示Sephadex G200凝胶层析纯化得到的高分子质量蛋白主要包括3条带,分子质量约为67、80和160 ku,推断其可能是牛血清白蛋白、乳铁蛋白和免疫球蛋白。经Western blot分析,3种高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清均能反应,并且在67 ku附近条带最明显。经ELISA分析,高分子质量蛋白与牛奶过敏患者血清的阳性反应率比β-乳球蛋白略高(分别是46.7%、43.3%)。结论牛奶中高分子质量蛋白组分能够诱导特异性抗体产生,这些组分在牛奶过敏过程中具有重要的致敏作用。     

被动凝集法、间接免疫荧光法和胶体金法联合检测肺炎 支原体抗体对儿童肺炎支原体感染的诊断价值

目的 分析被动凝集法（PA）、间接免疫荧光法（IFA）和胶体金法（GICT）联合检测对儿童肺炎支原体（MP） 感染的诊断价值。方法 选取进行MP抗体检测的患儿617例,以临床诊断为判断标准,分为MP感染组（345例）和 非MP感染组（272例）。所有患儿均经PA检测MP总抗体,经IFA和GICT检测MP-IgM抗体。分析PA、IFA和GICT 这3种方法单独检测及两两联合检测与临床诊断的一致性,受试者工作特征（ROC）曲线评价其对MP感染的诊断价 值,分析PA联合IFA检测2组患儿抗体情况。结果 MP感染组PA检测MP总抗体、IFA和GICT检测MP-IgM抗体的 阳性率较非MP感染组高（P＜0.01）。PA检测MP总抗体的阳性检出率高于IFA和GICT检测MP-IgM抗体的阳性检 出率（P＜0.01）。PA联合IFA与临床诊断为中度一致（Kappa值=0.41,P＜0.05）。3种方法单独检测和两两组合检测 中PA联合IFA的曲线下面积、敏感度、总符合率、阴性预测值最高,阴性似然比最低。GICT单独检测特异度最高。 IFA 单独检测阳性预测值和阳性似然比最高。当 MP-IgM 抗体阳性时,MP 感染组 23.44% 的患儿总抗体滴度＜1︰ 160,非MP感染组47.22%的患儿总抗体滴度≥1︰160。当MP-IgM抗体阴性时,MP感染组91.91%的患儿MP总抗体 滴度≥1︰160,非MP感染组有73.50%的患儿总抗体滴度＜1︰160。结论 PA和IFA联合检测可为临床诊断儿童MP 感染提供更客观、准确的检测结果。     

抗中性粒细胞胞浆抗体及相关实验室指标在肺纤维化患者中的应用探讨#br#

摘要：目的　探讨肺纤维化（PF）患者抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）阳性率、核型和靶抗原情况及其与常见临床指标的关系。方法　选取诊断为PF且同时行ANCA检测的患者302例。其中72例ANCA阳性PF患者为ANCA阳性PF组；230例ANCA阴性PF患者根据随机数字表法抽取72例为ANCA阴性PF组。另外，选取25例不伴PF的ANCA阳性患者作为ANCA阳性非PF组，20例健康体检者作为健康对照组。分析各组的ANCA核型及靶抗原、炎症、凝血-纤溶、免疫功能、肾功能相关实验室指标。结果　ANCA阳性PF患者占同期PF患者的23.84%。ANCA阳性PF组核周型ANCA（pANCA）阳性比例较胞浆型ANCA（cANCA）更多，靶抗原髓过氧化物酶（MPO）阳性比例较蛋白酶3（PR3）更多。ANCA阳性PF组C反应蛋白（CRP）较ANCA阴性PF组显著升高，ANCA阳性PF组、ANCA阴性PF组、ANCA阳性非PF组的血沉（ESR）、CRP、降钙素原（PCT）、D二聚体（D-Dimer）、纤维蛋白原（FIB）较健康对照组显著升高（P＜0.008）。ANCA阳性PF组和ANCA阳性非PF组补体3（C3）较健康对照组和ANCA阴性PF组显著降低，ANCA阳性非PF组的血肌酐（Scr）较ANCA阴性PF组显著升高（P＜0.008）。结论　诊断PF时应考虑存在抗中性粒细胞胞浆抗体相关血管炎的可能，同时应重视ESR、CRP、PCT、D-dimer、FIB、C3和Scr指标的变化。     

体检健康人群大豆蛋白特异性 IgG 抗体检测及其所识别蛋白质组分分析

目的分析体检健康人群血清大豆蛋白特异性Ig G(s Ig G)抗体水平,探讨其与年龄、性别的关系,并分析抗体识别蛋白质组分。方法丙酮溶解法制备大豆蛋白粗提液,包被微孔板,ELISA法检测240例体检健康者血清大豆蛋白s Ig G抗体水平,分析抗体水平与年龄、性别的关系;十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析大豆蛋白质组分,并用酶免疫印迹技术分析与Ig G特异性结合的主要蛋白质组分。结果体检人群大豆蛋白s Ig G抗体阳性率为55.8%,女性(66.6%)显著高于男性(45.0%),差异有统计学意义(P0.01)。男性各年龄组间s Ig G抗体阳性率差异有统计学意义(P0.01),且男性组的阳性率随年龄增高呈上升趋势;酶免疫印迹技术分析结果显示,不同个体间可能存在针对不同大豆蛋白抗原组分的s Ig G抗体。结论体检健康人群中普遍存在针对大豆蛋白质组分的s Ig G抗体,且s Ig G抗体水平与年龄和性别相关。