通用引物检测志贺毒素和紧密素多个基因亚型

目的旨在建立同时检测stx2和intimin两个基因多个变型的双重PCR快速检测技术,更好满足实验室和临床检测的需求。方法以stx2主要的6个亚型和intimin主要的27个基因亚型为靶序列,设计引物,建立双重PCR方法,分析其敏感性、特异性,并检测模拟制备的阳性样品。结果stx2-intimin双重PCR扩增片段分别为388bp和609bp,检测大肠杆菌纯培养物最低限介于10～100cFu／mL,增菌样品最低检测限介于1～10CFU／g,特异性检测intimin和stx2的多个亚型。结论Stx2-Intimin二重PCR技术灵敏、特异、通用和高效。     

手术室职业性危害及护士的自身防护

手术室护士由于工作的特殊性,直接接触患者开放性伤口、血液、体液等,存在着被感染的高度危险;另外,手术室还存在大量危害手术医生与护士身体健康的因素。近年,为保障职业人群的健康和安全,国家在出台一系列相关法律的同时,大力倡导用人单位建立职业卫生安全管理体系。现将手术室护士职业健康问题及个人防护措施报告如下。1生物性感染问题及个人防护目前,血液传播疾病给工作人员造成的威胁已被重视,手术室每天的工作都不可避免地接触到患者血液、体液分泌物,因此受感染的概率很高。在健康医疗工作人员中最容易被感染的人群是外科医生和护士,…     

苗药观音草矿质元素含量研究

目的 研究不同居群观音草矿质元素含量及其含量间的相关性.方法 采原子吸收光谱法测定观音草药材中矿质元素含量.结果 ①观音草中各种元素含量分别为Fe 689.40 mg/kg,Mn 21.40 mg/kg,Cu 11.13 mg/kg,Zn 18.80 mg/kg,Ca 5372.60 mg/kg,Mg 1563.64 mg/kg,K 10289.79 mg/kg,Pb 4.20 mg/kg,Cd 0.78 mg/kg;②观音草各种矿质元素含量之间存在一定相关性,部分达到显著或极显著水平.结论 观音草矿质元素含量丰富,特别是对人体有益的Fe、Mn、Zn、Mg等元素含量丰富.     

乙型脑炎病毒E基因在杆状病毒中的表达及其初步应用

目的克隆表达日本乙型脑炎病毒(Japaneseencephalitis virus,JEV)的E基因,研究其抗原性,并初步作为诊断抗原建立JEV抗体检测方法。方法用RT-PCR方法扩增E基因全长,然后克隆到pFastbacTM载体中,转化宿主菌DH5a中,提取阳性克隆质粒转导到DH10Bac,利用通用引物鉴定阳性,提取其基因组转染昆虫细胞sf9,而后经IFA和Western blot进行鉴定。挑蚀斑纯化获得高纯度和高滴度的重组病毒,收集细胞裂解上清作为抗原建立间接ELISA方法,对不同年龄段猪血清进行检测。结果从JEV中成功克隆E基因,并在昆虫细胞中得到表达,分子量约53kD,具有良好的抗原性。建立的ELISA方法的抗原最佳包被浓度为30μg/ml,待检血清的最佳稀释度为1:40,阳性判定标准初步定为OD450≥0.3,且OD值待检血清/OD值阴性血清≥2。结论JEV的E基因经过体外昆虫细胞表达,获得抗原性良好的蛋白作为诊断抗原,用其建立的ELISA方法能很好用于猪群JEV抗体水平的检测。     

大鼠海马CA1区β-受体、长时程增强和学习记忆

在海马脑片上,激活CA1区β-肾上腺素能受体(β-受体)易化这一区域突触传递的长时程增强(LTP).然而,在体情况下CA1区β-受体是否参与LTP,是否参与海马依赖性的学习和记忆,尚无实验证据.为此,我们观察了β-受体激动剂异丙肾上腺素或拮抗剂心得安对在体CA1区LTP的调控作用以及对大鼠学习和记忆的影响.     

大肠杆菌O157：H7实验感染动物排菌动态检测

目的检验大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染动物排菌中的应用效果。方法将牛和小鼠采用灌胃攻毒方式实验感染大肠杆菌O157：H7,用大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基分别培养检测感染动物粪便中的O157：H7的排菌量和持续时间。结果牛在感染大肠杆菌O157：H7后的第2天开始从粪便排菌,第4～6天达到峰值,排菌时间可持续28 d;小鼠在感染O157：H7后的第4小时开始从粪便排菌,第6小时达到峰值,排菌时间可持续15 d。结论大肠杆菌O157：H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基培养计数的检测结果一致,试纸条更简便、快捷、直观,在1～5 min内可得出检测结果。     

大肠杆菌O157:H7 菌毛hcpA基因产物的小鼠免疫保护试验

大肠杆菌O157:H7的Ⅳ型菌毛与其粘附、定植和致病可能有着密切的关系,但相关报道鲜见。本文选用pET32载体,体外构建hcpA重组菌,在大肠杆菌中进行表达。家兔制备高滴度多克隆抗体,Western blot分析其免疫原性。Balb/c小鼠进行免疫试验,并对临床分离多株EHEC O157:H7进行hcpA基因检测和电镜观察菌毛的表达。成功获得高效表达重组HcpA蛋白,并制备了兔源HcpA多克隆抗体,Western blot分析此抗体能与提取的HCP发生特异性抗原抗体反应。重组HcpA经二免后,Balb/c小鼠较对照小鼠排菌量降低,而且排菌时间缩短。在大肠杆菌中成功克隆表达了hcpA基因,所获重组HcpA蛋白具有良好的免疫原性,可作为研制肠出血性大肠杆菌O157:H7基因工程疫苗或者检测试剂的候选抗原。     

ETEC肠毒素基因多重PCR检测方法的建立

肠毒素性大肠杆菌的致病性与其具有粘附性的菌毛和产肠毒素的能力密切相关。由于菌毛的血清型多而复杂 ,肠毒素只有不耐热肠毒素 (LT)和耐热肠毒素 (ST)两种 ,因此成为研究的对象。用三对扩增产物分别为 1 1 0bp、2 37bp、368bp的引物建立了检测LT和STⅠ、STⅡ毒素基因的多重PCR方法。扩增产物分别用HindⅢ、HincⅡ、Sau3AⅠ限制性内切酶酶切 ,均得与预期一致的 2个片段。对各个参考株的检测结果为 1 0 0 %符合。结果表明该多重PCR方法具有很好的特异性和敏感性。该方法可用于肠毒素性大肠杆菌腹泻病的辅助诊断以及大肠杆菌的分类检测     

大肠杆菌O157∶H7实验感染动物排菌动态检测

目的 检验大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条在感染动物排菌中的应用效果.方法 将牛和小鼠采用灌胃攻毒方式实验感染大肠杆菌O157∶H7,用大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基分别培养检测感染动物粪便中的O157∶H7的排菌量和持续时间.结果 牛在感染大肠杆菌O157∶H7后的第2天开始从粪便排菌,第4～6天达到峰值,排菌时间可持续28 d;小鼠在感染O157∶H7后的第4小时开始从粪便排菌,第6小时达到峰值,排菌时间可持续15 d.结论 大肠杆菌O157∶H7胶体金免疫层析检测试纸条与细菌鉴别培养基培养计数的检测结果一致,试纸条更简便、快捷、直观,在1 ～5 min内可得出检测结果.     

从正常屠宰猪扁桃体中分离到致病性猪链球菌2型

目的从江苏省某屠宰场采集的40份屠宰猪的扁桃体中分离到一株细菌,通过玻片凝集试验、培养特性、菌体形态、菌落形态、染色特性、生化试验、PCR检测试验,确定为猪链球菌2型,编码为HA0610。进一步研究发现,该菌株含有已知的8种主要毒力因子基因,动物试验显示对猪和兔均有较强的致病性。结果表明,在正常猪扁桃体中可携带对猪有高度致病性的猪链球菌2型。