兔視網膜色素上皮細胞的培養與保存

目的探索一种有效的体外分离兔视网膜色素上皮(RPE)细胞的良好方法,并观察RPE细胞冻存复苏前后的形态学特点。方法用两步酶法分离兔RPE细胞,第一步酶(透明质酸酶 胰蛋白酶),用于松解视网膜神经上皮细胞与RPE细胞之间的连接;第二步(胰蛋白酶)用于离散RPE细胞,制成细胞悬液;然后用慢冻速融方法对细胞进行冷冻保存及复苏,最后用4种方法(RPE片层观察、H-E染色、免疫组化法及光、电镜观察法)观察RPE细胞在冻存前后的形态特点。结果 用此方法分离培养的细胞其结构完整,纯度高,收获量多,在体外生长旺盛,达到铺满汇合的时间缩短,同时维持体内细胞的许多生物学和形态学特点。细胞冻存复苏后的存活率高达80％左右,且与冻存前细胞形态相比未见明显差别。结论 此分离培养方法及冻存复苏法是高效可行的。