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[目的]构建传染性法氏囊病毒VP2蛋白展示禽流感M2e抗原表位的重组蛋白,研发预防H5或H9亚型禽流感和传染性法氏囊的基因工程疫苗.[方法]根据现有禽流感疫苗株M2e的氨基端12个氨基酸多肽序列(nM2e)序列,结合GenBank中H5和H9亚型禽流感病毒nM2e的比对结果,确定nM2e序列.用融合PCR分别将1拷贝H5或H9的nM2e序列插入IBD B87株VP2基因的PBC区,获得VP2Bc nM2e重组基因.将重组基因克隆至杆状病毒表达系统,转染Sf9细胞进行表达.经间接免疫荧光和Western blotting检测Sf9细胞表达重组基因后,扩繁重组病毒,制备疫苗,间隔4周对非免鸡作2次重复免疫,用间接ELISA和鸡胚成纤维细胞中的病毒血清中和试验检测血清中VP2和nM2e的抗体效价.[结果]成功构建含H5或H9 nM2e的VP2BcnM2e重组基因,该重组基因在Sf9细胞中得到表达.经免疫鸡,两重组蛋白均能激发针对VP2和nM2e的抗体,VP2BCnM2eH5组抗体效价高于VP2Bc nM2eH9组.[结论]两重组蛋白均具有免疫原性,VP2BC nM2eH5免疫原性更佳. 相似文献
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