卫生检验专业卫生微生物学实验教学改革初探

在整合卫生微生物学实验教学内容的基础上,增强学生实验的独立性;在操作过程中引进质量控制措施;采用多种教学手段和教学形式进行实验教学;模拟实际进行实验考核等一系列措施对卫生检验专业卫生微生物学实验教学改革进行了探索,提高了学生独立操作和解决实际问题的能力,强化了学生的质量控制意识,缩短了实验教学与实际工作间的距离.     

肺炎支原体对大环内酯类和氟喹诺酮类药物敏感性分析

目的 通过检测肺炎支原体(Mp)对大环内酯类药物及喹诺酮类药物的敏感性,为临床治疗提供参考依据.方法 采用微量肉汤稀释法检测7种大环内酯类和3种喹诺酮类药物对45株Mp的MIC.结果 45株Mp对红霉素的耐药率为11.1%,新型大环内脂药物克拉霉素和阿奇霉素抗Mp活性最强,其MIC50分别为0.008 μg/mL和0.016μg/mL,其次是交沙霉素、司帕沙星和加替沙星,其MIC50分别为0.0312μg/mL、0.125μg/mL和0.25μg/mL;而红霉素抗Mp活性最差,MIC50为2μg/mL.结论 Mp对红霉素存在不同程度的耐药.大环内脂类药物克拉霉素抗Mp活性强于阿奇霉素、交沙霉素和红霉素;司帕沙星抗Mp活性强于加替沙星和左氧氟沙星.     

白色念珠菌胃癌株的毒力与蛋白酶的关系

目的 研究白色念珠菌胃癌株蛋白酶活性与其毒力的关系。方法 用牛乳琼脂平板筛选产酶株并测定其活力，用产酶株菌悬液尾静脉注射感染小鼠，以其平均存活时间（d）评价菌株毒力。结果 来自胃癌患者的白色念球菌100％产生蛋白酶，以癌组织中的菌株酶活力最强，均对小鼠有毒力，可在2－8d致参试小鼠100％死亡。结论 白色念球菌胃癌株均分泌蛋白酶，作为白色念球菌的重要致病因素之一，蛋白酶活力可作为判断其毒力的直接指标。     

解脲脲原体LAMPs激活核因子κB诱导人单核细胞表达诱导型一氧化氮合酶和前炎症因子

目的分析解脲脲原体（Uu）的脂质相关膜蛋白（LAMPs）对人单核细胞（THP-1）表达诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和前炎症因子白细胞介素1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）的影响。方法用Uu的LAMPs刺激人单核细胞后,Western blot法检测核因子κB（NF-κB）的激活和iNOS基因的表达,格氏试剂测定NO,ELISA法测定IL-1β、TNF-α和IL-6的含量。结果Uu LAMPs通过激活NF-κB诱导人单核细胞表达iNOS,且能以时间和剂量依赖方式刺激人单核细胞产生NO,诱导表达前炎症因子（IL-1β、TNF-α和IL-6）;NF-κB抑制剂PDTC可抑制NF-κB的激活、iNOS的表达及NO的产生。结论Uu LAMPs通过激活NF-κB途径诱导人单核细胞表达iNOS和前炎症因子,可能是产生某些疾病的一个重要的因素。     

实时荧光环介导等温扩增技术检测土壤中的类鼻疽伯克霍尔德菌

目的 结合荧光染料EvaGreen与环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)探索快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的可行性。方法 根据类鼻疽伯克霍尔德菌filc基因片段设计了LAMP引物,利用荧光染料EvaGreen建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,RealAmp),优化反应条件,扩增产物经电泳鉴定。通过类鼻疽伯克霍尔德菌和其他致病菌验证特异性,比较RealAmp与普通LAMP技术的敏感度,并测定人工污染土壤模拟样本的检出限。结果 恒温63 ℃条件下,20~60 min即可完成RealAmp检测;利用该方法检测类鼻疽伯克霍尔德菌为阳性,其余致病菌如鼠疫杆菌、布鲁氏杆菌、大肠杆菌等13株参考菌株及蜱虫的DNA(含大量假单胞菌属细菌)呈扩增阴性;RealAmp技术检测类鼻疽伯克霍尔德菌核酸的灵敏度为10² CFU/mL,检测克隆株质粒的灵敏度可达10¹ copies/μL,比普通LAMP技术的灵敏度高10倍;人工污染土壤模拟样本RealAmp的检出限为4.4×10¹ CFU/g,且20 min左右即可判定结果;直接检测24份浓度为4.4×10¹ CFU/g~4.4×10⁸ CFU/g的类鼻疽伯克霍尔德菌人工污染土壤样本,在检出限以上,检出率同荧光定量PCR一致。结论 该方法特异性强、灵敏度高,且可实时监测类鼻疽伯克霍尔德菌,有望成为快速检测类鼻疽伯克霍尔德菌的有效方法,增强抵御生物恐怖战争的能力。     

衡阳市女性生殖道无乳链球菌的带菌状况及分子特征

目的 了解衡阳市女性生殖道无乳链球菌的带菌状况及分离株的分子特征。方法收集衡阳市3家教学医院的女性生殖道分泌物棉签拭子样本,对其中的无乳链球菌进行分离、鉴定和药敏分析,并对分离株的耐药基因、血清型、菌毛岛类型进行分析。结果无乳链球菌的检出率为0.88%(3/339)。1株分离株保存失败,另外2株分离株HY66和HY9-2均对四环素和红霉素耐药,并携带ermB和tetO耐药基因。此外,HY9-2对克林霉素、左氧氟沙星、加替沙星耐药,还携带tetM和tetL耐药基因。2株分离株的血清型为Ⅲ型,同时携带PI-1和PI-2a菌毛岛。结论衡阳市女性生殖道无乳链球菌的带菌率低。分离株都对红霉素和四环素耐药,并出现了多重耐药菌株。为防治无乳链球菌的感染,应加强无乳链球菌的流行及耐药情况监测。     

甲壳低聚糖碘液对微生物杀灭效果的观察

目的测定甲壳低聚糖碘液对金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽胞杆菌、白假丝酵母菌的杀灭作用。方法用消毒学定量悬浮试验测定甲壳低聚糖碘液(含碘0．5％)的杀菌效果。结果定量悬浮试验结果表明：稀释度为1：32的甲壳低聚糖碘液对金黄色葡萄球菌的杀灭率为100％，而对大肠埃希菌100％的杀灭则需1：16的稀释度。原液对枯草杆菌芽胞的杀灭率为100％，而对白假丝酵母菌的杀灭率仅为52．35％。结论甲壳低聚糖碘液对细菌繁殖体及芽胞有较强的杀灭作用，对白假丝酵母菌作用较差。     

高等学校异步教学方式在卫生微生物学中的应用效果评价

在高校卫生检验与医学检验专业卫生微生物学的教学过程中,尝试高等学校异步教学方式的问题化教学。通过问卷调查,结果表明:异步教学方式的问题化教学能激发学生的学习兴趣,培养学生分析问题、解决问题的能力,提高学生的创新意识,并能有效地促进教师不断地充实与更新自己的知识。     

生殖支原体黏附素蛋白模拟表位的筛选和鉴定

目的制备兔抗重组生殖支原体粘附素蛋白(rMgPa)的多克隆抗体(pAb),以期筛选MgPa的模拟表位。方法用rMgPa免疫新西兰兔以制备兔抗rMgPa的pAb,以此pAb为靶分子对噬菌体展示随机12肽库进行生物淘洗,随机挑取74个噬菌体克隆进行DNA测序与分析,用ELISA检测噬菌体与pAb结合的特异性。结果制备了兔抗rMgPa的特异性pAb,以此抗体为靶分子对噬菌体展示肽库进行生物淘洗后,特异性噬菌体克隆得到了明显富集。经对74个噬菌体克隆所展示的外源性多肽序列进行比较分析,共可大致分为3组一致性的核心序列:P-S-A-A/V-X-R-F/W-E/S-L-S-P,A-K-I/L-T/Q-X-T-L-X-L和K-S-L-S-R-X-D-X-I。ELISA结果说明36个噬菌体克隆能与pAb发生特异性结合,因此,这三组核心序列可能是MgPa的模拟表位。结论成功制备了兔抗rMg-Pa的pAb,并筛选到MgPa的3个可能的模拟表位,为进一步研究Mg的诊断与预防提供一定的实验依据。