对奈韦拉平耐药的HIV-1毒株诱导研究

目的 探讨对NVP耐药的Ⅰ型艾滋病病毒(HIV-1)毒株的诱导方法,获得能够产生连续稳定传代的对NVP高度耐药的HIV-1毒株.方法 MT4细胞中先后加入终浓度为100TCID50的HIV-1实验室毒株89.6与终浓度为10倍IC50的NVP药物溶液,在药物浓度不变的条件下传代,培育HIV-1病毒.提取每代培养液上清病毒RNA,逆转录后使用巢式PCR扩增HIV-1 pol区基因,收集目标片段并进行测序分析.结果 诱导培养所得耐药株由第5代开始与野生株相比,出现NVP IC50变化,倍数约为3倍,培养11代后,变化倍数高达178倍.此外,发生Y181C和Y188Y位点突变.结论 本实验中在体外经诱导所得耐药株对NVP具有较高的耐药性,并可获得稳定传代.     

霉酚酸对肝细胞自噬相关因子表达的影响

目的 比较日本爆发性丙型肝炎病毒1型(hepatitis C virus Japanese fulminant hepatitis-1,HCV JFH-1)感染的Huh7细胞中细胞自噬因子在霉酚酸(mycophenolic acid,MPA)处理组与对照组的表达差异,探讨MPA对肝细胞自噬相关因子的调节影响.方法 用HCV JFH-1感染Huh7细胞,用5μg/ml的霉酚酸处理细胞24 h,用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qPCR)和蛋白免疫印迹法测定细胞内HCV、微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated-protein 1 light chain,MAP1-LC3B,简写LC3B)、自噬相关因子3(autophagy-related gene 3,ATG3)和自噬相关因子7(autophagy-related gene 7,ATG7)的信使核糖核酸(messenger ribonucleic acid,mRNA)和蛋白相对表达量,比较上述因子在处理组和对照组之间的差异.结果 在核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)和蛋白水平上,MPA可以降低HCV在Huh7细胞中的表达并且降低自噬标记物LC3B mRNA和LC3 B-II的蛋白质表达(均有P＜0.001);MPA可以使Huh7细胞中的自噬相关因子 ATG3和ATG7的mRNA和蛋白相对表达量下降(P ＜0.001;P =0.003;P=0.010;P =0.002).结论 MPA可以抑制HCV JFH-1在Huh7细胞中的复制和细胞自噬,并且可以下调自噬因子ATG3和ATG7的表达,推测MPA可能通过调节自噬关键因子表达来抑制细胞自噬从而拮抗HCV的复制.