广东省肇庆市2015—2018年禽类市场环境禽流感病毒监测

目的 了解肇庆市2015—2018年禽类市场环境中禽流感病毒的动态分布情况,为肇庆市禽流感预警和防控工作提供参考依据。方法 采集2015—2018年肇庆市9个县（市、区）的禽类市场环境标本,用实时荧光PCR法进行A型流感病毒(FluA)核酸检测,FluA阳性标本进行H5、H7、H9亚型流感病毒分型。结果 共采集禽类市场环境标本 4 508份,其中FluA核酸阳性标本共1 154份,总阳性检出率为25.60%;H5、H7、H9和A型未分型阳性检出率分别为 5.72%、2.75%、17.48%和4.44%。FluA阳性检出率在肇庆市9个县（市、区）之间差异有统计学意义(P<0.05),其中阳性检出率最高是鼎湖区。FluA阳性检出率及其他亚型阳性检出率在1、2月份明显高于其他月份,冬春季为禽流感病毒的感染高峰期。FluA阳性检出率在5种类型监测标本之间差异具有统计学意义(P<0.05),其中宰杀或摆放禽肉案板表面的擦拭标本(简称案板)阳性检出率最高(33.04%),笼具表面擦拭标本(简称笼具)次之(27.22%)。结论 肇庆市禽类市场环境中存在H5、H7、H9及多种亚型混合的致病性禽流感病毒潜在传播风险,尤其在冬春季,需结合人感染高致病性禽流感的流行状况,加强禽类从业人群的健康教育与禽类市场环境禽流感病毒监测,对人感染禽流感发生的预警和风险评估有重要意义。     

2014-2016年广东省肇庆市人感染H7N9禽流感病毒基因组特征分析

目的 了解广东省肇庆市2014-2016年人感染H7N9禽流感病毒基因进化特征.方法 对肇庆市17例H7N9患者咽拭核酸直接进行8节段基因序列扩增与测定,用BioEdit5.0、MEGA6.0进行同源性和重要氨基酸位点分析,采用Neighbor-Joining法构建进化树,参比序列从GenBank下载.结果 7份H7N9病例标本获得8节段全基因序列,HA与A/chicken/Dongguan/695/2014 (H7N9)相似度最高,NA与A/ chicken/Dongguan/1075/2014 (H7N9)相似度最高;内部基因与2013-2014年广东东莞、深圳禽源H7N9及H9N2相似度较高.HA和NA基因与广东省东莞、广州、深圳等地市的H7N9序列同处于珠三角进化分支,与安徽、浙江、江苏等长三角分支的序列相似性低.HA蛋白受体结合位点发生G186V、Q226L变异,裂解位点序列均为PEIPKGR↓ GLF,含有2个碱性氨基酸;M2蛋白上发现耐药位点S31N,PB2蛋白上发现E627K突变,NA蛋白上未发现耐神经氨酸酶的位点变异.结论 肇庆市人感染H7N9病毒株可能来源于2013 2014年广东省珠三角地区禽源H7N9和H9N2,G186V、Q226L和E627K位点变异增强了对人的易感性.     

香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR的建立与应用

目的建立快速、灵敏、特异的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR体系,用于食源性致病菌监测和淡水鱼产品贸易往来的快速检测。方法根据GenBank公布的香港海鸥形菌16SrRNA基因高保守序列,设计特异引物对和TaqMan-MGB探针,建立和优化快速检测体系,评价反应体系的特异性、灵敏度、重复性,并在淡水鱼类、急性胃肠炎腹泻患者标本中临床应用,结合细菌分离方法和序列测定分析进行验证。结果建立的香港海鸥形菌TaqMan-MGB探针实时荧光PCR反应体系检测时限短,仅40min就可出结果,特异性好,与沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血弧菌等非目标菌无交叉反应,灵敏度高,检测下限达10拷贝／反应,稳定性好,同一浓度阳性质粒进行16次重复检测的Ct值变异系数0．183％。92份淡水鱼及211份医院急性胃肠炎腹泻标本实时荧光PCR与常规细菌分离结果完全一致,均检出了12株香港海鸥形菌。16SrRNA测序结果显示与HKU1株同源性在99．5％以上,进一步验证了实时荧光PCR的特异性。结论本研究建立的香港海鸥形菌TaqMan—MGB探针实时荧光PCR反应体系快速、特异、灵敏,在防止食源性疾病的传播和加快贸易通关速度方面,具有较强的的应用价值。     

诺如病毒遗传组I型TaqMan—MGB探针实时荧光RT-PCR的研究

目的建立诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR快速、特异、灵敏的检测方法，为疾病预防控制提供可靠的依据。方法根据GenBank诺如病毒遗传组I型代表株保守序列设计特异引物对和TaqMan-MGB探针，建立一步法实时荧光RT-PCR快速检测反应体系，优化反应条件，评价反应体系的灵敏度、特异性、重复性．并与常规RT—PCR比较。结果诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT-PCR检测时限短。仅1h就出结果。与轮状病毒、腺病毒、星状病毒、甲肝病毒、诺如病毒遗传组Ⅱ型无交叉反应，最低检出下限为100拷贝／反应，比常规RT—PCR灵敏100倍，5份浓度不同的诺如病毒遗传组I型标本重复检测5次。平均Ct值变异系数范围为0．39％-1．02％。结论诺如病毒遗传组I型TaqMan-MGB探针实时荧光RT—PCR快速、特异、灵敏、重复性好，可应用于突发公共卫生应急检测和诺如病毒遗传组I型监测，提高快速检测能力。     

广东省肇庆市怀集县人感染H7N9禽流感流行特征分析

目的分析人感染H7N9禽流感病例的流行病学特征,评估活禽交易市场休市措施对疫情的影响。方法对广东省肇庆市怀集县人感染H7N9禽流感确诊病例临床表现和流行病学特征进行描述性分析,同时采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(real time RT-PCR)对病例家庭禽类养殖环境、全县活禽交易市场休市前、休市后市场环境标本进行检测。结果怀集县共确诊人感染H7N9禽流感病例9例,无死亡病例。重症病例主要表现为重症肺炎,轻症病例以咳嗽、咽痛为主;分布在全县5个镇,年龄中位数为11岁(4~62岁)。全部病例均有明确的禽类接触史,4/9的病例有慢性基础性疾病;病例的164名密切接触者共有6人出现流感样症状,其中1人经确诊为人感染H7N9禽流感病例,考虑为同源暴露。休市前主城区H镇市场环境标本H7型阳性率为65.00%(52/80),休市后为3.49%(3/86);乡镇市场休市前为14.81%(12/81),休市后为0(0/111)。休市后全县人感染H7N9禽流感新发病例大幅度下降。结论 9例人感染H7N9禽流感病例以轻症病例为主,4~11岁年龄组人群多发,病例均有明确的禽类接触史。采取暂停市场活禽交易等综合防控措施能有效控制疫情。     

2014年肇庆市登革Ⅰ型病毒流行株E基因序列分析

目的：了解肇庆市2014年登革热病Ⅰ型病毒流行毒株E基因序列。方法收集肇庆市2014年登革热患者病例资料及急性期血清,用C6／36细胞培养分离登革热病毒,阳性分离株采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法扩增E基因,绘制系统发生树,进行生物信息学分析。结果36份标本中20份病毒分离培养阳性,获得肇庆市2014年Ⅰ型登革热病毒流行20株毒株的E基因序列,其同源性与中山市的2株流行毒株接近,但与广州市Ⅰ型登革病毒流行株相差较远。结论肇庆市登革热疫情同中山市登革热流行程度相关联且流行特点为输入性流行。     

1起学校诺如病毒急性胃肠炎暴发的病原学检测

目的 对1起学校急性胃肠炎暴发疫情进行病原学检测分析。方法 对该学校暴发疫情的急性胃肠炎病例、厨房工作人员及病例对照采集肛拭子标本,提取核酸RNA,应用实时荧光RT-PCR试剂盒进行诺如病毒、札如病毒、轮状病毒、腺病毒、星状病毒检测,对阳性标本进行核衣壳编码区RT-PCR扩增、序列测定和系统进化分析。结果 21份患者肛拭样本中有16份GII型诺如病毒实时荧光RT-PCR阳性;所有标本的札如病毒、轮状病毒、腺病毒、星状病毒检测阴性。14份诺如病毒核酸阳性标本获得321bp目标片段序列,彼此间核苷酸相似性100%,提示同一来源;GenBank的BLAST结果显示,本次诺如病毒疫情毒株与GⅡ.2的参考株AY134748(Snowmoutain/1976/US)、X81879 (Melksham/1989)同源性最高,进化树上处于同一进化分支,属于GⅡ.2群。结论 该起学校急性胃肠炎暴发疫情是由诺如病毒GⅡ.2感染所致。     

筛选与确诊试验在检测香港海鸥菌中的建立与应用

目的建立简便、快速、准确、特异的香港海鸥菌实验室诊断技术。方法采集淡水鱼类、胃肠炎腹泻患者新鲜粪样,接种于改良头孢哌酮MacConkey（CMA）培养基,对典型菌落分别进行氧化酶、触酶、三糖铁（TSI）3项筛选试验和常规生化鉴定,凡氧化酶、触酶试验阳性以及三糖铁（TSI）试验阴性的菌株,采用特异性PCR检测确诊;通用引物扩增16SrRNA并与香港海鸥菌HKU1株进行同源性分析。结果在92份淡水鱼样品和211份胃肠炎腹泻患者粪样中,共检出香港海鸥菌11株和1株,阳性率分别为11.96%（11/92）和0.48%（1/211）。筛选与确诊试验和常规生化试验的检测结果一致,符合率为100%（12/12）。分离的香港海鸥菌16SrRNA序列与HKU1株同源性在99.5%～100%之间,仅差1～2个碱基。结论本文建立的筛选与确诊试验适用于香港海鸥菌的诊断。     

诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan—MGB探针实时荧光PCR的检测研究

目的建立特异、灵敏的诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan—MGB探针实时荧光PCR快速检测方法。方法根据GenBank诺如病毒遗传组Ⅱ型代表株保守序列设计特异引物对和TaqMan～MGB探针，调整引物、探针浓度，优化最佳反应条件，建立一步法实时荧光PCR快速检测反应体系，进行灵敏度、特异性、稳定性试验，以评价反应体系，并与引物P289／P290常规RT—PCR进行灵敏度比较。结果诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan—MGB探针实时荧光PCR检测时限短，仅1h就出结果；最低检出下限为100拷贝/mL，比引物P289／P290常规RT—PCR灵敏度高100倍；与轮状病毒、腺病毒、星状病毒、甲肝病毒无交叉反应；4份核酸含量不同的标本重复检测5次，平均G值变异系数范围0．96％-2．27％。结论诺如病毒遗传组Ⅱ型TaqMan—MGB探针实时荧光PCR快速、特异、灵敏、稳定性好。可应用于突发公共卫生应急检测，提高快速检测能力。     

2007-2014年肇庆市流行性乙型脑炎流行特点 及健康人群抗体水平调查

摘要:目的　了解肇庆市2007-2014年流行性乙型脑炎（简称乙脑）流行特点及健康人群乙脑病毒抗体水平。方法　对肇庆市2007-2014年乙脑患者资料进行描述性流行病学分析,对2012-2014年采集的怀集县和封开县共608份健康人群血清标本进行乙脑IgG抗体检测,运用分析性流行病学方法进行分析。结果　2007年以来,肇庆市共报告117例乙脑疑似病例,经实验室确诊80例,其中死亡4例,年均发病率为0.24/10万。发病时间集中在5-7月,6月份为发病高峰;疫情主要分布在怀集县;乙脑病例以1～14岁儿童为主;确诊病例中无明确乙脑疫苗免疫史者占81.25%（65/80）;怀集县健康人群乙脑IgG抗体阳性率为85.76%（259/302）,封开县为62.75%（192/306）,2县抗体阳性率在不同年龄段、城乡之间比较有统计学差异。结论　肇庆市乙脑流行呈现明显的季节性和一定的地域性,14岁以下儿童为易感人群,封开县健康人群乙脑IgG抗体阳性率较怀集县要低;应及时为适龄儿童接种乙脑疫苗,做好防蚊灭蚊,强化疾病监测相关工作,控制乙脑流行。