缺氧诱导食管鳞癌细胞中白细胞介素-7表达促进肿瘤进展

背景与目的：缺氧和细胞因子均能介导食管鳞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）的进展,但是相关机制仍未可知。探讨缺氧促进ESCC细胞中白细胞介素-7（interleukin-7,IL-7）分泌增强,进而介导肿瘤进展的机制。方法：采用三气培养箱建立缺氧模型,通过ESCC细胞系KYSE410,并采用细胞因子阵列蛋白芯片技术观察缺氧对ESCC中细胞因子分泌的影响。通过KYSE410及KYSE30 ESCC细胞系,采用酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）法观察缺氧对ESCC细胞IL-7分泌的影响。以磷酸盐缓冲液（phosphate-buffered saline,PBS）为对照组,IL-7中和抗体为治疗组,采用MTS法观察IL-7是否能够介导缺氧状态下ESCC细胞增殖。采用transwell实验检测缺氧状态下,IL-7对ESCC细胞侵袭能力的影响。采用信号通路定量ELISA法,检测缺氧通过IL-7对ESCC细胞系中蛋白激酶B（protein kinase B,AKT）活性的影响。结果：缺氧24 h后,KYSE410细胞中多种细胞因子分泌增高,其中以IL-7最为明显。ELISA法进一步证实,缺氧能够显著诱导KYSE410及KYSE30细胞中IL-7分泌增强。MTS法及transwell实验结果显示,IL-7中和抗体能够显著抑制缺氧状态下KYSE410及KYSE30细胞系的增殖及侵袭转移。信号通路ELISA法实验结果显示,IL-7调控缺氧ESCC细胞系中AKT的活性。结论：IL-7是介导缺氧促进ESCC进展的重要细胞因子,本研究为基于IL-7确立ESCC治疗新策略提供了实验依据。     

建立十二色荧光原位杂交技术鉴定食管癌KYSE450细胞系的核型

目的:应用12色荧光原位杂交技术(multicolor fluorescence in situ hybridization,M-FISH)鉴定食管癌细胞系KYSE450的染色体畸变．方法:采用DOP-PCR(degenerate oligonucleotide primer-polymerase chain reaction)法混合标记两组多色painting探针,先后两次杂交到相同的KYSE450染色体片,结合反相DAPI显带技术进行核型分析．结果:成功地建立了一种重复的12色荧光原位杂交技术,并鉴定出KYSE450中存在的畸变染色体．该细胞系共有54条染色体,只有13, 21和X号染色体是正常的,其余21条染色体均表现异常．1,2,3,5,6,8,9,14,15,16和17号染色体部分区带增益,4和18号染色体部分区带缺失．7,11,12和19号染色体同时存在区带增益和其它部分区带缺失．1,2,3,4,5,6,7,8,9, 11,12,14,15,16,17,18和19号染色体显示有易位．22号染色体丢失1条,未检测到10,20,Y 染色体成分．结论:12色荧光原位杂交可用于鉴定肿瘤中复杂的染色体异常．KYSE450存在较多与原发性食管鳞癌一致的染色体改变．     

BRCA1在乳腺癌细胞系中负调控miR-146a并抑制其促癌功能

目的在乳腺癌细胞系中,研究BRCA1基因对miR-146a的调控,以及miR-146a的细胞学功能。方法采用Western blot和实时定量PCR检测BRCA1基因对miR-146a的调控;利用生物信息学分析软件对BRCA1以及miR-146a的相互调控进行分析;运用MTS、克隆形成、Transwell等实验技术检测miR-146a高表达及敲降对MCF-7细胞生长增殖、侵袭迁移等能力的影响。结果该研究发现BRCA1缺失的情况下,miR-146a表达显著表达升高。通过对miR-146a启动子区分析发现BRCA1可以与miR-146a启动子区结合并调控其表达,同时miR-146a可以与BRCA1 3'UTR不完全互补结合,这提示BRCA1对miR-146a的调控是一种负反馈作用机制。该研究还发现miR-146a高表达可以促进细胞生长增殖和侵袭迁移的能力,而miR-146a敲降后却可以抑制细胞这些表型。结论在乳腺癌细胞中,BRCA1通过负调控miR-146a的表达来抑制其促癌功能。     

Aurora-A高表达对人食管癌细胞生物学性状影响

目的　研究Aurora A高表达对人食管癌细胞的影响,以了解其在人食管癌侵袭转移中的作用。方法　采用细胞转染的方法,利用Aurora A基础水平表达较低的食管癌细胞系构建Aurora A高表达细胞株,比较其与转染空载的细胞,分析二者在表型差别。结果　Aurora A高表达细胞表现出明显的增殖优势,在体外细胞移动实验中表现出穿膜能力大大增强。结论　提示Aurora A高表达在人食管癌侵袭转移中有重要的意义。     

食管癌细胞来源的外泌体对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响及机制研究

目的 探讨食管癌KYSE410细胞来源的外泌体对肿瘤细胞迁移及侵袭能力的影响及其机制.方法 超速离心法分离食管癌KYSE410细胞培养上清中的外泌体;采用透射电镜及Western blotting观察所获得的外泌体的形态及其标志物;共聚焦显微镜观察KYSE410、KYSE510和YES2细胞摄取荧光染料标记的KYSE410外泌体;采用Transwell小室实验分析3种食管癌细胞的迁移及侵袭能力以及KYSE410外泌体对3种食管癌细胞迁移及侵袭能力的影响;Western blotting检测Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路相关蛋白的变化.结果 透射电镜下观察KYSE410外泌体具有膜结构,直径分布在30～100nm;3种食管癌细胞的迁移及侵袭能力从大到小依次为KYSE410、KYSE510、YES2;KYSE410外泌体能够促进KYSE410、KYSE510、YES2细胞迁移及侵袭能力并增强3种食管癌细胞中β-catenin和p-Akt的表达.结论 来源于高迁移及侵袭能力的食管癌KYSE410细胞的外泌体能够促进自身和低迁移及侵袭能力的食管癌KYSE510、YES2细胞的迁移和侵袭,并且可能通过激活Wnt/β-catenin和PI3K/Akt信号通路发挥上述作用.     

Aurora B与细胞分裂调控

细胞增生主要通过遗传物质的自我复制与分裂形成两个与起始细胞相似的子代细胞的形式进行,这一理论的建立最终成为细胞生物学的理论基石[1].     

细胞周期信号转导研究与信号转导治疗

细胞增殖和分裂是一个复杂的生物学过程。细胞内存在的精密调节机制可以确保分裂后的子代细胞获得与亲代完全一致的遗传信息。细胞增殖过程由细胞周期执行，细胞周期进程由多种不同的细胞周期素(Cyclins)和周期素依赖性激酶(Cyclin Dependent Kinases，CDKs)所形成的复合物驱动。Cdks／cyclins复合物的激酶活性在多个层次上受到调节，这种多层次的调节机制，