三七总皂甙对大鼠脊髓损伤后行为学变化及细胞凋亡的影响

目的:观察三七总皂甙对大鼠脊髓损伤细胞凋亡的保护作用并分析其可能的作用途径。方法:实验于2005-06/11在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。实验共选取64只SD大鼠,随机分为损伤组和三七总皂甙组,每组32只,采用改良Allen’s重物打击法造成大鼠中度脊髓损伤,三七总皂甙组于伤后30min腹腔注射50g/L三七总皂甙(100mg/kg),伤后2,4h用50mg/kg,以后1次/d,剂量200mg/kg,连用12d。损伤组于伤后各时间点腹腔注射等体积生理盐水。观察比较治疗后不同时间大鼠行为评分、斜板试验、组织学检查及脊髓神经细胞凋亡指数变化。结果:64只SD大鼠全部纳入结果分析。①三七总皂甙组和损伤组大鼠在7d时行为评分分别为2.50±0.53、1.38±0.74,14d时分别为3.25±0.89、1.75±0.71,两组比较差异有显著性(t=-3.473,-3.742,P<0.05)。②三七总皂甙组与损伤组1,3,7,14d各时间点斜板最大角度差异均有显著性(t=-4.081,-4.235,-4.245,-4.687,P<0.05)。③苏木精-伊红染色光镜下发现脊髓组织病理学改变三七总皂甙组明显轻于损伤组。④损伤组大鼠脊髓损伤后1d在灰质及白质中均可见标记阳性细胞,损伤3d后凋亡指数渐增,7d达高峰;三七总皂甙组大鼠脊髓神经细胞凋亡指数较损伤组低,高峰提前,发生在损伤后3d,以后逐渐降低。两组比较差异均有显著性(t=4.196,2.627,7.732,3.547,P<0.05)。结论:三七总皂甙能抑制脊髓损伤神经细胞凋亡,对损伤脊髓的神经功能具有保护作用。     

黄芪关节腔内注射后兔骨关节炎模型软骨退行性变及滑膜组织中超氧化物歧化酶活性的变化

目的:观察关节腔内注射黄芪后,对兔前交叉韧带切断骨关节炎模型中软骨退行性变以及滑膜组织中超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量的影响。方法:实验于2005-08/2006-02在华中科技大学同济医学院附属协和医院动物实验中心完成。①选用成年日本大白兔16只,随机数字表法分为模型对照组、黄芪治疗组,8只/组。②两组兔均行单侧前交叉韧带切断术建立骨关节炎模型。黄芪治疗组于术后1周开始,关节内注射黄芪0.3mL/次,1次/周,连续6周。模型对照组于同一时间点关节内注射0.3mL生理盐水。③术后第7周处死两组动物,采用关节软骨病理改变评分(0～4分,分数越高病理变化越严重)对比观察两组兔股骨髁关节软骨的大体变化;采用关节软骨退行性变Mankin’s评分(包括软骨结构、软骨细胞、臧红O染色、潮线的完整性4个指标)对比观察光镜下两组兔关节软骨的退行性变情况;并检测滑膜组织中超氧化物歧化酶活性与丙二醛含量。结果:16只兔均进入结果分析。①术后第7周关节软骨病理改变评分结果:黄芪治疗组软骨退行性变评分明显低于模型对照组(z=-2.595,P<0.05)。②术后第7周关节软骨退行性变Mankin’s评分结果:黄芪治疗组明显低于模型对照组[(5.9±1.46),(8.8±1.39)分,t=-4.039,P<0.05]。③术后两组滑膜组织超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量的比较:与模型对照组比较,黄芪治疗组超氧化物歧化酶活性明显升高(t=8.206,P<0.05),而丙二醛含量明显降低(t=-4.039,P<0.05)。结论:黄芪能明显降低软骨退行性变的程度,并增加骨关节炎滑膜组织中超氧化物歧化酶的活性,减少丙二醛的含量,有可能成为防治骨关节炎的良好药物。     

三七总皂苷干预脊髓损伤大鼠诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的变化

目的：观察三七总皂苷注射液对大鼠脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的作用机制。方法：实验于2005—06／1l在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。将64只SD大鼠数字表法随机分为损伤组和三七总皂苷组（n=32），2组按存活时间分为1，3，7，14d4个时间点，每个时问点8只。所有大鼠采用Allen’s法制备脊髓中度损伤模型（致伤能量为40g&;#183;cm），三七总皂苷组伤后30min腹腔注射50mg／L三七总皂苷100mg／kg，伤后2h及4h再次给予50mg／kg，以后1次／d，剂量200mg／kg，连用12d。损伤组相同时间点腹腔注射等体积生理盐水。2组均于预定对间点处死大鼠，取出伤段脊髓（以损伤处为中心，长约10mm），用苏术精-伊红染色观察损伤脊髓组织病理变化，免疫组化染色检测诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞率。结果：64只大鼠全部进入结果分析。①苏木精-伊红染色光镜下发现脊髓组织病理学改变三七总皂苷组明显轻于损伤组。②诱导型一氧化氮合酶阳性细胞率：三七总皂苷组在伤后1，3，7，14d均低于损伤组[（21．38&;#177;3．69）％。（36．24&;#177;3．27）％，（30．56&;#177;2．89）％．（21．64&;#177;5.31）％；（39．48&;#177;3．78）％。（58，69&;#177;5．67）％。（68．97&;#177;5．34）％，（40．35&;#177;4．36）％。t=9．692，9．701，17．893，3．171，P〈0．05]。⑧半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞率：三七总皂苷组在伤后1，3，7，14d均低于损伤组[（26．29&;#177;3．21）％，（35，42&;#177;2．25）％，（48．58&;#177;2．64）％。（23．72&;#177;3．26）％：（32．43&;#177;2，69）％，（46、18&;#177;3．07）％，（60．31&;#177;5．35）％，（31，98&;#177;4、80）％，t=4．147。7．996，5．561，11．231，P〈0．05]。结论：三七总皂苷注射液能抑制脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达，从而减轻细胞损伤和凋亡。     

复方七叶皂甙凝胶外敷与关节腔内注射玻璃酸钠治疗膝关节骨性关节炎

目的：观察复方七叶皂甙凝胶外敷并玻璃酸钠关节内注射治疗膝轻、中度骨性关节炎的临床疗效。 方法：选择2003—05／2004—12在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科门诊就诊符合膝轻、中度骨性关节炎诊断标准的126例患者纳入治疗观察对象，将126例膝骨性关节炎患者随机分为两组。对照组60例，采用单纯膝关节内注射玻璃酸钠（商品名为施沛特，每支含玻璃酸钠20mg，为无色透明的粘稠液体，山东正大福瑞达制药有限公司研制生产．批号：200201171，200306253）治疗，l周1次，连续5次为1疗程。观察组66例。在对照组治疗的基础上配合复方七叶皂甙凝胶（商品名利百素，主要成分是二乙胺水杨酸和七叶皂甙，德国马博士大药厂，批号：D0328674．D0328675）外敷治疗。即用复方七叶皂甙凝胶3g均匀外涂于患侧膝关节处皮肤，4次／d，疗程为5周。全部患者随访时间为6-10个月，平均8个月。根据膝关节综合评分表，进行两组患者冶疗前、后朦关节功能综合评分和冶疗后两组之间的疗效对比。 结果：纳入126例，均进入结果分析。①对照组和观察组膝关节评分值治疗后均较治疗前显著降低（5．63，11．23；2．96，11．51；f=12，965，25．432，P〈0．05），且治疗后评分值观察组低于对照组（t=-0．517,4．977,P〈0，05）。②对照组治疗后优16例，良20例，可16例，差8例，优良率为60.0％（36／60例）；观察组治疗后优30例，良23例，可10例，差3例，优良率为80．3％（53／66例），观察组优良率显著高于对照组（X^2=6．246，〈0．05）。 结论：关节内复方七叶皂甙凝胶外敷配合注射玻璃酸钠是一种治疗膝关节骨性关节炎简单有效的治疗措施，对膝轻、中度骨性关节炎的治疗效果较好。其临床疗效优于单用膝关节内注射玻璃酸钠者。     

半月板纤维软骨细胞与小肠黏膜下层相容性的研究

严重的半月板损伤需要进行半月板的移植，防止膝关节的退行性变。我们以猪小肠黏膜下层（SIS）作为支架材料，通过观察兔半月板纤维软骨细胞在此载体中的生长、增殖情况，评价SIS的生物相容性，为应用SIS作为支架材料构建组织工程半月板提供实验依据。[第一段]     

川芎嗪对大鼠脊髓损伤后caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用川芎嗪对caspase-3表达及细胞凋亡的影响。方法采用Allen’s法将72只成年SD大鼠造成脊髓中度损伤模型,分别给予川芎嗪及生理盐水治疗,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,用免疫组化染色检测caspase-3阳性细胞,原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变川芎嗪组明显轻于损伤组。两组均发现caspase-3表达及凋亡细胞,损伤组caspase-3表达及神经细胞凋亡指数均高于川芎嗪组(P<0.05)。结论川芎嗪注射液能抑制脊髓损伤后caspase-3表达及神经细胞凋亡。     

三七总皂甙对大鼠脊髓损伤后iNOS表达及细胞凋亡的影响

目的探讨大鼠脊髓损伤后应用三七总皂甙对诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达及细胞凋亡的影响。方法采用Allen’s法将64,只成年SD大鼠造成脊髓中度损伤模型,再随机分为损伤组和三七总皂甙组,分别给予生理盐水及三七总皂甙注射液治疗,损伤后不同时间点(1、3、7、14d)处死大鼠,用HE染色观察损伤脊髓组织病理变化,用免疫组化染色检测iNOS阳性细胞,原位末端标记法(TUNEL法)标记凋亡细胞。结果HE染色镜检发现脊髓组织病理学改变三七总皂甙组明显轻于损伤组;两组均发现iNOS表达及凋亡细胞,且损伤组iNOS表达及神经细胞凋亡指数均高于三七总皂甙组(P<0．05)。结论三七总皂甙注射液能抑制脊髓损伤后iNOS表达及神经细胞凋亡。     

冷冻同种异体骨软骨移植修复大面积关节软骨缺损的可行性研究

目的观察冷冻同种异体骨软骨移植修复大面积关节软骨缺损的可行性，为临床应用提供实验依据。方法共选取36只新西兰兔，随机数字表法分成供体组、实验组和对照组，每组12只。供体组制备冷冻同种异体胫骨内侧髁骨软骨移植物后处死；实验组将经程序深低温冷冻保存的同种异体胫骨内侧髁移植；对照组将取下的胫骨内侧髁原位植入。所有实验动物在术后12周处死。应用苏木精-伊红染色观察关节软骨组织的病理学变化，软骨缺损的组织学评分以半定量的改良Wakitani score法评估，内容包括：细胞种类、髓质染色、表面完整性、软骨的厚度、移植软骨在受体周围组织的完整性5个方面，采用0、1、2、3、4评分，最高总分14分。观察两组动物的大体标本、X线片、组织学检查、Waki-tani score评分及免疫组织化学检查结果。结果①移植软骨的大体观察：两组动物关节活动度正常，关节腔无粘连、无积液，实验组移植软骨颜色及高度与周围关节软骨大致相同，关节面较平整，基底部界限模糊。对照组关节软骨面平整、无塌陷，厚度不变。②两组动物关节X线片均见骨折线已模糊，对位、对线良好。③组织学检查：两组动物关节软骨均已被透明软骨覆盖，细胞排列有序，软骨基质大量分泌，未见淋巴细胞和浆细胞浸润。④两组动物关节软骨Wakitani score评分结果无显著性差异，总评分相近（P〉0.05）。⑤两组修复软骨Ⅱ型胶原免疫组织化学染色强阳性。结论冻存同种异体骨软骨移植后可完全修复大面积关节软骨缺损，并与自体骨软骨块修复兔的关节软骨缺损在组织学上相近，未见免疫排斥反应。     

关节镜下可吸收螺钉和悬吊钢板双重固定腘绳肌重建前交叉韧带疗效评价

目的 评价关节镜下可吸收螺钉和悬吊钢板双重固定腘绳肌腱重建膝关节前交叉韧带(ACL)的效果.方法 15例患者经关节镜检查证实均为ACL断裂,均采用关节镜下自体腘绳肌重建ACL,悬吊钢板及生物可吸收螺钉固定重建韧带.结果 所有病例均得到随访,Lysholm膝关节功能评分:由术前(48.62±10.73)分提高至随访时(90.10±6.25)分(P<0.05).结论 关节镜下双重固定自体腘绳肌腱重建ACL手术创伤小,固定牢靠,近期疗效满意.