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目的 研究嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)制备工艺中抗CD3/CD28磁珠和慢病毒对T细胞中程序性死亡因子1(PD-1)蛋白表达的影响,为改善其体内抗肿瘤活性研究提供理论依据.方法 筛选高表达PD-1细胞系,添加CAR-T制备工艺中抗CD3/CD28磁珠和慢病毒(CAR-GFP、CAR-CD19、CAR-CD30),流式细胞术检测T细胞系PD-1蛋白的变化.利用PD-1刺激剂研究CAR-T制备中PD-1的表达.结果 流式细胞分析显示,抗CD3/CD28磁珠和CAR-CD30慢病毒能显著刺激Jurkat中PD-1蛋白表达[(63.5±4.9)%和(63.0±5.3)%,P?0.01].Jurkat添加0.5:1抗CD3/CD28磁珠刺激后,PD-1表达量在48 h为最大值,之后随时间增加PD-1蛋白表达下降,144 h时下降到(4.5±0.3)%以内.CAR-CD30慢病毒以MOI=3感染复数刺激Jurkat后PD-1蛋白表达比较稳定.T淋巴细胞中添加抗CD3/CD28磁珠能提高约3倍PD-1的表达.结论 低浓度抗CD3/CD28磁珠能短暂性刺激T细胞中PD-1蛋白表达且不影响其活率. 相似文献
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目的探讨硫酸锌对上皮细胞内细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响及其分子生物学机制。方法应用PCR与蛋白质免疫印迹试验检测硫酸锌诱导人呼吸道上皮细胞ICAM-1mRNA与蛋白的表达,以及表皮生长因子受体(EGFR)及PI3K的活化。结果硫酸锌可诱导ICAM-1mRNA与蛋白的过量表达。在同一试验条件下,硫酸锌可诱发EGFR及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)下游激酶Akt的磷酸化或活化。用EGFR抑制剂(PD153035)及PI3K抑制剂(LY294002)预处理上皮细胞,可明显抑制硫酸锌对ICAM-1表达的诱导作用。结论硫酸锌可激活EGFR与PI3K/Akt信号传导通路,进而上调ICAM-1的表达。 相似文献
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目的评价焦化工肺癌的疾病预后及其影响因子。方法分析70例焦炉工肺癌的年龄、暴露工龄、潜隐期、诊断年龄、治疗方法和生存时间,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Cox回归评价影响因子。结果 Cox回归评价显示患者的暴露工龄、潜隐期、发病年龄等因素对患者的生存期无影响,均P0.05,外科治疗病例的生存时间长于非外科治疗病例,中位数生存时间分别为885和181 d;Cox回归也提示外科治疗是肺癌预后的保护性因子。结论焦炉工的职业接触史与肺癌的预后无联系,肺叶切除或全肺切除术是焦炉工肺癌的首选治疗。 相似文献
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目的 初步探讨共表达细胞因子IL-7和趋化因子CCL19或CCL21的anti-CD19 CAR-T细胞的功能特性及其在体外对人CD19+急性淋巴细胞白血病(B-ALL)的杀伤效果,旨在优化CAR-T果。方法 通过亚克隆技术获得重组慢病毒质粒,慢病毒包装,转导原代T细胞获得2种第4代anti-CD19CAR-T细胞,分别命名为7×19 CAR-T细胞、7×21 CAR-T细胞。借助流式细胞仪和相关试剂盒检测了细胞CAR分子的转导效率、CAR-T细胞的趋化能力、增殖及凋亡情况等;钙黄绿素释放法检测CAR-T细胞的杀伤作用;共培养法检测CAR-T细胞因子的释放情况;2种第4代anti-CD19 CAR-T细胞组皆于原代T细胞、常规anti-CD19 CAR-T细胞作比较。结果 7×19 CAR-T、7×21 CAR-T细胞的功能特性皆有显著提高,主要表现在细胞增殖速度加快、细胞凋亡速率明显变慢、炎症因子IFN-γ、肿瘤坏死因子TNF-α的分泌量皆有所增加;且体外杀伤实验表明阳性率约40%的7×19 CAR-T、7×21 CAR-T细胞对CD19+肿瘤细胞Raji的杀伤效率高于阳性率约50%anti-CD19 CAR-T细胞(P0.01);结论 实验数据显示共表达细胞因子IL-7和趋化因子CCL19或CCL21的第4代anti-CD19 CAR-T细胞即7×19 CAR-T和7×21 CAR-T细胞相比第3代anti-CD19 CAR-T细胞和T细胞在趋化能力、细胞增殖、细胞凋亡、体外杀瘤效果以及细胞炎症因子的释放能力等方面皆有显著改善,初步证明了7×19 CAR-T细胞和7×21 CAR-T细胞的各项功能有所优化,对CD19+人急性淋巴细胞白血病治疗效果得到改善,为开发靶向CD19的新型CAR-T细胞提供了新思路,这种模式也为其它类型CAR-T细胞的开发开创了典范。 相似文献
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目的 筛选有助于提高桔梗发酵液活性成分的优势菌株,研究微生物发酵前后桔梗抗氧化能力的变化。方法 以分离得到的来源于新鲜桔梗根部土壤的巨大芽孢杆菌Bacillus megaterium ZY2104、人参芽孢杆菌B.ginsengisoli ZY2103,来源于桔梗泡菜的类肠膜魏斯菌Weissella paramesenteroides ZY2101、绿色魏斯菌W.viridescens ZY2102,以及实验室已有的鼠李糖乳杆菌Lactobacillus rhamnosus sw01、枯草芽孢杆菌B.subtilis RZ001、啤酒酵母Saccharomyces pastorianus S5、酿酒酵母S.cerevisiae AY12和S.cerevisiae BY14作为实验菌对桔梗进行发酵,检测发酵前后桔梗中总多酚、总黄酮、总多糖含量的变化;通过测定桔梗皂苷D含量、总抗氧化能力、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除率、羟基自由基清除率、还原能力分析微生物发酵对桔梗提取液体外抗氧化能力的影响。结果 在温度37 ℃、时间72 h、接种量2%的条件下,相较于其他菌株及未发酵组,巨大芽孢杆菌ZY2104发酵的桔梗提取液中总多酚、总黄酮、总多糖的质量浓度显著提高,分别为(5.06±0.05)、(5.83±0.06)、(8.96±0.14)mg·mL–1。抗氧化活性实验结果表明,相对于未发酵组,巨大芽孢杆菌ZY2104发酵组具有较强的总抗氧化能力、DPPH自由基清除率、羟基自由基清除率及还原能力(P<0.05)。结论 筛选得到巨大芽孢杆菌ZY2104可作为发酵桔梗的优势菌株,可以显著提高桔梗提取液中主要活性成分含量和抗氧化能力。 相似文献
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1982年,Baner等合成了一种人肽的生长抑索长效类似物一奥曲肽(Octreotide,OCT即SMSZOI-995,Sandostatin)。其血浆半衰期明显长于14肽的生长抑素(Somatostatin,SS)。奥曲肽对食道静脉曲张破裂出血有较好的治疗作用【门。近年有报道低剂量典曲肽和它莫西芬联合治疗胰腺癌明显延长患者的生存时间,并且毒性低【引。奥曲肽对胃癌细胞增殖是否具有抑制作用,尚未见报道。我们采用Mry比色法和克隆形成法观察了奥曲肽对体外培养的人胃粘液腺癌(MGC803)细胞增殖和克隆形成能力的影响。1材料与方法l·l细胞人胃粘液腺癌(MGC-80… 相似文献
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目的探讨血清对神经干细胞分化过程的影响。方法取孕14 d SD大鼠胚胎脑组织,分离培养神经干细胞并传代。取第3代细胞倒置相差显微镜下观察细胞形态,并行巢蛋白(Nestin)免疫细胞化学染色鉴定。将鉴定后的细胞分为A、B、C 3组,各组细胞培养基除FBS浓度不同(分别为5%、1%、0)外,其余成分均一致。培养第8天,行活/死细胞染色观察细胞生长情况;培养第4、8天,行免疫细胞化学染色以及实时荧光定量PCR检测,观察胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、Ⅲ型β神经元微管蛋白(β-Ⅲ Tubulin)表达。结果经细胞形态及免疫细胞化学染色鉴定培养细胞为神经干细胞。培养第8天,活/死细胞染色示A、B、C组细胞均无死亡现象。免疫细胞化学染色示,培养第4、8天,A、B、C组GFAP蛋白表达随FBS浓度降低而逐渐减弱,但β-Ⅲ Tubulin表达逐渐增强;各组第8天时染色均较第4天时增强。实时荧光定量PCR检测示,培养第4天和第8天3组间GFAP mRNA及β-ⅢTubulin mRNA相对表达量比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血清能促进神经干细胞向胶质细胞分化,并减缓其向神经元分化速度,且血清浓度越低,该影响越小。 相似文献
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六株乳杆菌胃肠道定植能力分析 总被引:1,自引:0,他引:1
目的分析确定Lactobacillus Acidophilus(L.acidophilus)1.1等六株乳杆菌胃肠道定植能力强弱。方法通过模拟人体胃酸环境(pH 3)和高胆盐环境(胆盐含量:0.1%~0.3%),及用胶原蛋白和人结肠癌细胞SW-480模拟人肠道黏附环境,利用MTT法分别测定六株乳杆菌在酸性和高胆盐环境下37℃作用4 h后的存活菌率及与黏附介质作用1 h后的黏附率。结果六株乳杆菌均具有一定的耐酸和耐胆盐能力,以及不同程度的胶原蛋白及肠道细胞黏附能力,其中以L.acidophilus 1.2相对最为突出。结论 L.acidophilus 1.2等六株乳杆菌均能够不同程度的黏附定植在胃肠道中,发挥其益生作用,是较为理想的胃肠道微生态制剂候选菌株。 相似文献