Murine antibody against E2 can capture hepatitis C virus in vitro

目的　寻找可能存在的抗丙型肝炎病毒 (HCV)感染的中和抗体。方法　构建两个分别含HCVE1和E2抗原基因的真核表达载体 ,用瞬时表达法检测其在哺乳动物细胞中的表达。将构建的载体连同IL 2基因一起经皮下给BalB/c小鼠进行注射 ,然后用ELISA法检测特异性抗体产生情况。最后通过研究抗体和病毒间的相互作用分析基因免疫诱导产生的抗血清在体外与HCV的相互作用情况。结果　经过基因免疫的小鼠分别产生了E 1和E2抗体。其中 ,用含E2基因的质粒载体免疫的小鼠所产生的E2抗血清不仅可以免疫沉淀来源血清中的HCV病毒颗粒 ,而且可以和与来源株非相关的HCV病毒颗粒相互作用。结论　我们的研究表明基因免疫诱导小鼠产生的E2抗体可以和HCV病毒颗粒发生交叉反应 ,这使我们看到了诱导产生具有广泛针对性的E2抗体的希望。     

HCVⅡ型病毒在EBV转化人PBMC中持续存在的研究

近年来发现丙型肝炎病毒(ＨＣＶ)不仅可以感染肝细胞,也可以侵入肝外多种组织和器官,尤其其嗜淋巴细胞性正在引起越来越多的关注。已有研究证明,丙型肝炎病人外周血单个核细胞(ＰＢＭＣ)中既有ＨＣＶＲＮＡ正链存在,也有负链存在,表明ＨＣＶ可在ＰＢＭＣ中复制。ＰＢＭＣ?..     

特异性免疫沉淀法检测血清中HBV Dane颗粒DNA聚合酶

乙型肝炎病毒(HBV)DNA聚合酶(DNAP)活力测定,对于观察HBV的复制和鉴别乙型肝炎的感染与否是有一定指导意义的,本试验自1978年建立以来,由于不少单位没有超速离心机,致使这一灵敏、特异的检验技术,一直没有被广泛地应用于临床,为此,研究改进,建立经济、简易的DNAP活力检测方法,非常必要。 我们自1979年开始研究应用免疫沉淀法,使血清中Dane颗粒被形成特异性抗原抗体复合物沉淀下来,再经Pronase E和NP-40处理测定DNAP活力,并用正交试验选择了DNAP的最佳反应条件,通过对正常人和HBsAg携带者血清中DNAP活力的检测数据比较,证明该方法灵敏度高,特异性强,经济简易,便于推广应用。     

肝炎诊断试剂的临床验证研究

肝炎诊断试剂的临床验证研究为我国肝炎诊断试剂标准化、系列化研究不可缺少的环节,几年中,本文收集诊断明确的1564份血清,对3类12种24个试剂进行了有同种同类国外参比品的临床验证。文中报告了该项研究工作的方法及总体结果,并对其临床意义及课题中的作用进行了讨论。     

抗HBs固相放免试剂盒系统研究

高灵敏度抗-HBs固相放免试剂盒(以下简称“抗HBs RIA盒”)的系统研究为本所接受国家“七五”攻关课题之一,经五年研制结果表明,HBsAg质量可通过定量测定HBsAg活性蛋白含量提供高质稳定的原料,根据卫生部检定所国家标准品检定抗HBs RIA的科研试剂盒在敏感性、特异性及定量抗体检测的线性关系上均得到较好结果。中试后可稳定投产,临床验证与美国Abbott试剂盒比较,在质量上接近该种试剂的国际水平,该项国产试剂已达到国家级鉴定要求。     

恒温核酸扩增方法的建立及其扩增产物的鉴定

目的建立一种快速、简便的恒温核酸扩增（ＮＡＳＢＡ）方法。方法用由ＡＭＶＲＴａｓｅ、ＲＮａｓｅＨ、Ｔ７ＲＮＡ聚合酶以及相应的缓冲成分组成的恒温扩增系统，对４例丙型肝炎患者血清中丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ区ＲＮＡ序列进行扩增，并通过Ｎｏｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交及限制性内切酶对扩增产物进行鉴定。结果经９０分钟或１８０分钟反应后均可扩增出预期大小的产物，放射自显影在预期位置出现阳性杂交信号。扩增产物经聚合酶链反应（ＰＣＲ）及内切酶ＳｍａⅠ消化后产生预期大小的１４４ｂｐ和３５９ｂｐ的片段，第１次ＰＣＲ产物经转录实验后与ＮＡＳＢＡ直接扩增的产物具有较好的同源性。结论ＮＡＳＢＡ法是一种快速简便的核酸扩增方法，此法扩增出的产物具有良好的特异性。     

白细胞介素-2基因对丙型肝炎病毒E2基因免疫效果的调节作用

目的 研究白细胞介素２（ＩＬ－２）基因对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）Ｅ２基因免疫小鼠后效果的调节作用。方法 构建Ⅱ型ＨＣＶ Ｅ２基因的真核表达载体ｐ３Ｅ２，免疫组化法检测其在哺乳动物细胞中的表达情况。用ｐ３Ｅ２单独或连同ＩＬ－２真核表达质粒一起对ＢＡＬＢ／ｓ小鼠进行尾部皮下注射，酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）法检测Ｅ２抗体的产生情况。结果 Ｅ２蛋白在哺乳动物细胞中得到瞬时表达。应用ｐ３Ｅ２单独或连同ＩＬ     

Antibody response to E2 glycoprotein induced in mice by immunization with plasmid DNA containing sequence derived from a Chinese genotype Ⅲ/2a isolate of hepatitis C virus

ＢｅｃａｕｓｅｉｎｆｅｃｔｉｏｎｏｆｈｅｐａｔｉｔｉｓＣｖｉｒｕｓ（ＨＣＶ）ｔｅｎｄｓｔｏｃａｕｓｅｃｈｒｏｎｉｃｈｅｐａｔｉｔｉｓａｎｄｌｉｖｅｒｃｉｒｈｏｓｉｓａｎｄｔｈｅｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｒｅｓｐｏｎｓｅｒａｔｅｔｏｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎｗａ...     

原位反转录PCR检测慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中HCV

目的研究慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌ，ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒的定位分布及复制。方法直接原位反转录－ＰＣＲ（标记引物）对２０例慢性丙型肝炎患者的ＰＢＭＣ内丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的分布、定位及存在形式进行研究。结果１６例患者外周血单个核细胞的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ阳性信号，并有一例患者的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ负链信号。结论ＨＣＶ可感染ＰＢＭＣ并在其中复制。原位ＲＴ－ＰＣＲ为进一步研究ＨＣＶ进入人体内的分布、潜伏、复制状况以及丙型肝炎治疗、药物研究奠定了基础。     

基因免疫诱导小鼠产生抗丙型肝炎病毒E2糖蛋白抗体

目的：通过基因免疫诱导ＢＡＬＢ／ｃ小鼠产生抗Ⅲ型中国株ＨＣＶ来源Ｅ２糖蛋白的体液免疫应答。方法：质粒ｐ３Ｗ１４在ＮＩＨ３Ｔ３细胞中能够表达Ｅ２糖蛋白，纯化该质粒并用于ＢＡＬＢ／ｃ小鼠直接肌注，于加强注射后不同时相采血，以重组的Ｅ２糖蛋白检测特异性抗Ｅ２抗体。结果：接种ｐ３Ｗ１４质粒的小鼠中可检出抗Ｅ２抗体（５／６），抗体滴度１∶１５～１∶１２０。结论：采用含Ｅ２／ＮＳ１基因的质粒ＤＮＡ免疫，成功地诱导小鼠产生抗Ⅲ型株来源的Ｅ２抗体。