适用于提取新生隐球酵母菌及白色假丝酵母菌总核糖核酸快速方法研究

目的 探讨快速可以兼顾提取高质量的新生隐球酵母菌和白色假丝酵母菌总核糖核酸(RNA)的试验方法,为各种功能基因的表达研究奠定基础.方法 针对新生隐球酵母菌荚膜株和荚膜缺陷株新生隐球酵母菌H99及白色假丝酵母菌国际标准菌株ATCC 64548采用冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法提取总核糖核酸(RNA),用紫外线分光光度计测量其OD260、OD280的值,并且进行琼脂糖凝胶电泳,同时应用RT-PCR鉴定RNA质量.结果 提取的新生隐球酵母菌荚膜株和荚膜缺陷株总RNA产量分别为0.6μg/107细胞、1.5 μg/107细胞,且OD260/OD280比值在1.8～2.0,电泳显示提取的总RNA呈现28S rRNA,18S rRNA和5s rRNA 3条清晰的条带;提取的白色假丝酵母和菌丝相总RNA产量分别为2.3 μg/107细胞、3.1 μg/107细胞,且OD260/OD280比值在1.8～2.0,电泳显示提取的总RNA呈现28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA 3条清晰的条带.结论 冷酸洗玻璃珠联合Yeast RNA kit法,快速高质量适用于大小样本的新生隐球酵母菌和白色假丝酵母菌总RNA提取,满足各种类型分子生物学研究需要以及临床鉴别诊断治疗不同种类真菌感染.     

特比萘芬口服联合联苯苄唑乳膏外用治疗足癣临床疗效观察

足癣是一种常见的浅部真菌病,相当一部分患者对足癣的认识不够,未进行规范治疗,从而导致病情反复[1].为探讨口服和外用抗真菌药联合治疗足癣的临床疗效,笔者采用特比萘芬口服联合联苯苄唑乳膏外用,并与单纯联苯苄唑乳膏外用作对照,评价该联合疗法的疗效,现将结果报告如下.     

流式细胞术测定3种中药提取物对白念珠菌胞核的影响

应用流式细胞术（FCM）测定中药作用白念珠菌后其DNA合成周期和荧光强度的变化，探讨抗真菌中药对白念珠菌DNA合成周期的影响和药物的敏感性。结果（1）3种中药有效成分的不同浓度对白念珠菌DNA合成周期的影响，总趋势是随着药物浓度的增高，其处于S－G2－M期细胞的比率减少，亦即细胞分裂受到抑制。（2）经过药物处理后的真菌细胞的荧光强度有所改变，图形左移，反映了细胞DNA片段的丢失，并随着药物浓度的升高，直方图形向左移动越明显。（3）反映细胞体积的大小，细胞折光性和颗粒度的散点图也发生变化，图形向下和向左移动，随着药物浓度的升高超明显。FCM可能成为抗真菌药物敏感性测定辅助手段之一。     

侵袭性曲霉病大鼠生化指标的改变及烟曲霉分生孢子致病力研究

目的：观察原发侵袭性曲霉大鼠生化指标的改变,探讨烟曲霉分生孢子致病性与其表面小棘状层的密切关系。方法：60只大鼠随机均分为免疫抑制组和非免疫抑制组。非免疫抑制组分为实验组和对照组,分别接种含或不含胰酶的孢子悬液;免疫抑制组先注射环磷酰胺和醋酸可的松．余处理同非免疫抑制组。观察所有大鼠病理学改变,通过内眦静脉采血生化分析、组织器官研磨涂片以及肾脏印模等观察免疫抑制大鼠分生孢子的致病力及菌落生长情况。结果：非免疫抑制组无明显病理学改变。免疫抑制对照组病理学损伤较实验组严重。在相同培养条件下免疫抑制对照大鼠的肾脏印模、血液培养、肺组织可观察到的烟曲霉多于实验组。血清TBIL和DBIL在感染后8h有一过性升高,血清ALP、GGT、TP和Alb无显著改变,LDH、LDH1、CK、CK—MB在2h后即有明显升高,8～24h达到最高峰,为对照组的3～6倍,48～72h后逐渐下降至正常水平。结论：在烟曲霉感染过程中,细胞免疫有很重要的作用。用蛋白质破坏性试剂可除去刺猬毛样小棘状层,经过胰酶预处理的烟曲霉分生孢子所引起的原发侵袭性曲霉病大鼠病理与其对照组有显著差异,提示烟曲霉分生孢子致病力强弱与其表面棘状突起的多寡密切相关。     

一种快速提取新生隐球菌基因组DNA的方法

本研究建立了简单快速抽提新生隐球菌基因组DNA的方法,适用于PCR和酶切分析。方法是细胞悬浮于含5mmol/LDTT的1%Sarkosyl抽提缓冲液中,通过加入玻璃珠在混漩器上剧烈振荡破碎细胞壁和荚膜;然后酚氯仿抽提DNA,1×108细胞约可得1μgDNA。     

两性霉素B聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒跨血脑屏障及抗隐球菌效力的研究

制备携载两性霉素B的聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒(AmB-PBCA-NP),研究其对血脑屏障的透过能力及对隐球菌性脑膜脑炎小鼠的治疗效果. 孵化法制备AmB-PBCA-NP,聚山梨酯-80表面修饰,采用高效液相法检测小鼠脑组织中的药物浓度,建立隐球菌性脑膜脑炎小鼠动物模型,比较不同制剂治疗后的脑膜脑炎小鼠生存率及脑内真菌感染情况.AmB组小鼠脑内未能检测出药物,AmB-PBCA-NP组小鼠30 min即可测得浓度,3 h后达(132.52±3.67) ng/g,明显高于同期AmB-L脑内浓度;经AmB-PBCA-NP治疗的脑膜脑炎小鼠生存率显著提高,同时脑内染菌量下降.聚山梨酯-80修饰的AmB-PBCA-NP具有脑靶向作用,对隐球菌性脑膜脑炎具有显著治疗作用.     

新生隐球菌热休克反应对两性霉素B最小抑菌浓度的影响

1　热休克反应 (heatshock reaction)也称为应激反应 ,是细胞在热应激下发生的惟一反应 ;它在生物界是普遍存在的 ,是细胞乃至生物体在各种环境中存活不可缺少的条件 ,对生物体在外界恶劣环境下维持自身体内代谢平衡是至关重要的 [1 ]。在临床上 ,随着器官移植、AIDS及其他免疫力下降患者的增多 ,隐球菌病越来越严重地威胁人类的生命。目前治疗隐球菌病最有效的药物仍是两性霉素 B,但由于它带来的严重不良反应 ,临床上对其敏感性下降等问题越来越重视。另外 ,我们从临床用药经验中认识到体外的药敏试验有时与患者体内的病原菌对药物的敏感…     

非艾滋病患者隐球菌脑膜炎治疗与随访过程中真菌学指标分析

目的 分析非艾滋病患者隐球菌脑膜炎治疗与随访过程中真菌学指标变化规律,以指导临床治疗.方法 回顾性分析28例资料完整的非艾滋病患者隐球菌脑膜炎治疗与随访过程中的脑脊液真菌涂片,进行菌体计数、真菌培养和乳胶凝集试验.给予两性霉素B静脉滴注,联合口服氟胞嘧啶或氟康唑,疗程≥6周作为初期治疗,后给予氟康唑或(和)伊曲康唑口服≥2个月作为维持治疗,28例患者均完全治愈.统计学处理采用秩和检验.结果 治疗前脑脊液真菌涂片阳性率为92.9%,随着治疗的进行,真菌涂片的阳性率逐渐降低,菌体计数明显减少,但初期治疗结束后仍有患者真菌涂片结果为阳性.真菌培养生长所需时间逐渐延长,所有患者在治疗开始后2周真菌培养结果均转为阴性.脑脊液乳胶凝集试验阳性率为100%,治疗和随访过程中滴度小断下降,但与菌体计数降低无明显相关性.结论 隐球菌脑膜炎治疗中需要综合评价真菌学指标,对每个指标需进行具体分析.     

新生隐球菌5种血清型的CAP64基因的序列分析

目的多糖荚膜是新生隐球菌的重要的毒性因子,应用荚膜多糖抗原可以进行新生隐球菌的血清分型。方法该研究分析了5种血清型的CAP64基因的序列的相似性,作者扩增了CAP64基因一个约550bp的DNA序列,扩增产物经纯化后克隆到T载体上,转化至大肠杆菌JM109株中,通过聚合酶链反应(PCR)鉴定阳性克隆并测序。结果 5种血清型CAP64序列的比较显示其间的碱基差异为61～91bp,相似性为83.75%～88.03%,其核酸序列的差异是多位点的,主要在227～231bp之间;氨基酸的分析结果与此类似。结论 5种血清型的CAP64基因存在着一定的差异。     

快速乳胶凝集试验在检测外阴和阴道念珠菌感染的应用

目的　评价快速乳胶凝集试验诊断阴道念珠菌病的价值。方法　用乳胶凝集法对临床拟诊念珠菌感染的 119例妇女阴道分泌物进行检测 ,同时与阴道分泌物直接镜检法和培养法相比较。结果　凝集法对阴道念珠菌感染的检出率为 5 8.8% ,高于培养法 (5 6 .3% )和直接镜检法 (31.1% )。与培养法比较 ,快速凝集法的诊断敏感性为 89.6 % ,特异性为 80 .8%。结论　凝集法能快速诊断外阴阴道念珠菌病。虽成本略高于直接镜检法和培养法 ,但凝集法能缩短检测时间 ,且操作简便 ,可对念珠菌感染做初步诊断。