跑台训练结合高钙对去势小鼠骨代谢和结构的影响

目的：研究高钙饮食结合跑台训练对去势小鼠骨骼代谢和微结构的影响。方法：20只雄性C57/B6小鼠随机分为对照组和实验组各10只,采用睾丸切除法制造成年小鼠骨质疏松模型,对照组给予常规饲料喂养,实验组给予高钙饲料喂养及跑台训练。8周后2组小鼠处死取材,测定血清碱性磷酸酶（ALP）活性,并运用micro-CT方法分析动物胫骨微结构定量参数。结果：与对照组比较,实验组小鼠血清ALP活性明显升高,胫骨平台松质骨骨小梁数目、厚度及联结密度明显增强,骨小梁结构类似年轻的板状结构;胫骨中段骨皮质横截面积增大,骨皮质增厚,骨髓腔面积变化不明显。结论：高钙饮食结合跑台训练能显著改善实验动物骨骼微结构参数,提高血清ALP活性,对于延缓骨质流失,防治骨质疏松性骨折具有参考意义。     

正弦波电磁场对鼠骨骺干细胞分化的生物学影响

目的 研究50Hz正弦波电磁场对大鼠骨骺干细胞分化的生物学影响。方法 取生长良好的第4代骨骺干细胞，随机分为实验组和对照组，实验组采用50Hz正弦波电磁场间断刺激。分别绘制2组细胞生长曲线，MTT法测定细胞增殖活性，流式细胞仪检测细胞凋亡情况，Western Blot法检测细胞甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrp）的表达，并进行定量分析。结果 曝磁早期细胞增殖活性的改变不明显，正弦波电磁场刺激4d和6d能明显促进细胞的增殖，2组OD值比较，差异有统计学意义（P〈0.05）。与对照组比较，实验组骨骺干细胞的早期凋亡率、晚期凋亡率和总凋亡率均明显降低（P〈0．05）．PTHrp蛋白的表达增强。结论 适当参数的工频正弦波电磁场能促进骨骺干细胞PTHrp蛋白的表达，从而调节其增殖能力，增强分化稳定性，抑制细胞凋亡。     

鼠骨骺增殖区细胞的分离鉴定和克隆构建PTHrp基因真核表达载体

[目的]分离、鉴定大鼠骨骺生长板增殖区软骨细胞,克隆甲状旁腺激素相关蛋白（PTHrp）基因并构建真核表达载体pEGFP-IRES2-PTHrp.[方法]Percoll不连续密度梯度离心法分离生长板增殖区软骨细胞,用X型胶原抗体和电镜鉴定,提取总RNA,RT-PCR方法获得PTHrp基因的全长cDNA,插入pCR2.1 TA克隆载体中进行序列测定,测序正确后将其亚克隆至表达载体pEGFP-IRES2.[结果]分离出增殖区软骨细胞,经限制性内切酶酶切图谱分析和DNA序列测定证实目的基因已插入重组质粒.[结论]准确分离增殖区软骨细胞并成功构建了PTHrp基因的真核表达载体,为进一步揭示PTHrp的生物学功能及其在在软骨细胞的分化和骨骼形态发生中的作用奠定了基础.     

免疫分选软骨前体细胞并诱导永生化的研究

目的建立永生化大鼠软骨前体细胞株,为细胞移植和转基因治疗提供稳定的细胞来源。方法利用免疫磁珠技术分离纯化具有特异性表面标志成纤维生长因子受体-3(FGFR-3)的软骨前体细胞,用基因转染技术将含有猿肾病毒40大T抗原基因(SV40Tag)的重组质粒pEGFP- IRES2-SV40Tag转染原代培养的新生大鼠软骨前体细胞,经G418筛选,抗性克隆扩大培养。应用FGFR-3、Ⅱ型胶原和X型胶原抗体进行细胞鉴定,检测其分化能力,观察细胞的形态及其生长状况,绘制生长曲线。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Southern blot和免疫细胞化学法鉴定SV40Tag在转染细胞中的表达。结果获得1个阳性细胞克隆,免疫细胞化学证实为FGFR-3阳性的具有较强增值能力和多分化潜能的软骨前体细胞。经Southern印迹杂交证实,SV40Tag已稳定转染入软骨前体细胞,表达mRNA及其蛋白。贴壁培养的永生化软骨前体细胞株(IPSC),群体倍增时间为23.62 h,传代、冻存和复苏对细胞形态及生长无明显影响。结论SV40Tag导入可诱导软骨前体细胞永生化,为软骨前体细胞的实验研究及其介导的细胞移植治疗提供了稳定的细胞来源。     

永生化骨骺软骨细胞的生物学性状研究

目的比较永生化骨骺软骨细胞与原代骨骺软骨细胞的生物学性状,为细胞替代疗法治疗小儿身材矮小提供理论依据。方法利用SV40LTag诱导骨骺软骨细胞永生化,经G418稳定筛选后,观察细胞形态,应用MTT、血清依赖性实验、软琼脂克隆形成试验、裸鼠致瘤试验分析其生物学性状。结果原代软骨细胞体外传代至第6代左右即出现衰老现象,而转化软骨细胞可连续传代,未出现衰老迹象。转化软骨细胞更趋向于长梭形。两者的生长曲线比较相似,但转化软骨细胞的饱和密度明显高于正常软骨细胞。两者都对血清有依赖性,都为二倍体核型,均不能在软琼脂上形成克隆。经8周观察两者都不能使裸鼠致瘤。结论永生化骨骺软骨细胞为良性转化,为转基因细胞移植治疗身材矮小等疾病的研究提供了安全的细胞来源。     

罗格列酮对破骨细胞生成的影响

目的探讨罗格列酮对破骨细胞生成的影响。方法取C57BIM6小鼠骨髓内单个核细胞,用细胞核因子kappaB受体活化因子配基（RANKL）及巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）诱导其向破骨细胞分化,在诱导开始时即分成3组：空白对照组（G1）,0．5μmoL／L罗格列酮组（G2）,2．0μmol／L罗格列酮组（G3）,诱导结束后进行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、检测TRAP活性以及实时PCR检测相关基因的表达。应用单因素方差分析进行统计学分析。结果破骨细胞生成的数目在G2组[（54±5）个]、G3组[（72±5）个]均高于G1组[（32±5）个],差异有统计学意义（F=82．43,P〈0．05）,TRAP活性也高于对照组（G1：2．32±0．14,G2：2．83±0．08,G3：3．35±0．10,F=108．12,P〈0．05）;过氧化物酶增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）、组织蛋白酶K、c-fos与c-jun基因表达也高于对照组,且随着罗格列酮的浓度升高,相关基因的表达也增高（F值分别为33．50、37．46、53．73、39．77,均P〈0．05）。结论罗格列酮可能通过促进细胞增殖而促进破骨细胞生成,这司能是罗格列酮导致骨丢失的重要原因之一。     

骨质疏松性髋部骨折术后的早期综合康复治疗

目的：观察骨质疏松性髋部骨折术后早期综合康复治疗促进患者功能恢复的临床疗效。方法：骨质疏松性髋部骨折患者47例,随机分为康复组24例和对照组23例。康复组患者术后早期配合综合康复治疗,包括关节被动训练、手法治疗、功能训练及部分负重训练;对照组患者经外科处理后自行患肢锻炼。于术后6个月对2组患者患侧肌力、患髋ROM检测和Harris评分,并比较术前及术后6个月髋部骨矿密度（BMD）。结果：术后6个月随访,康复组患者患侧肌力,髋外展和屈曲ROM及Harris评分均明显高于对照组（P〈0.05,0.01）;患髋BMD,康复组亦明显高于术前及对照组,对照组术前及术后6个月比较,差异无统计学意义。结论：早期有计划的康复治疗,对髋部骨折术后患者下肢功能的恢复有明显促进作用,且能预防BMD进一步下降。     

阿米福汀对甲氨蝶呤诱导细胞凋亡的保护作用

目的：研究体外培养条件下阿米福汀对甲氨蝶呤诱导正常骨髓单个核细胞凋亡的影响，探讨阿米福汀对甲氨蝶呤导致骨髓抑制的保护作用。方法：将24例特发性血小板减少性紫癜（ITP）患儿分离骨髓单个核细胞，分为空白对照组、甲氨蝶呤组、阿米福汀组、阿米福汀加甲氨蝶呤组，在不同时间点采用形态学观察法，DNA琼脂糖凝胶电泳，流式细胞术检测细胞凋亡的情况。结果：培养8、12、24、48h，甲氨蝶呤组均可见大量的凋亡细胞，阿米福汀加甲氨蝶呤组凋亡细胞明显减少，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：阿米福汀能抑制甲氨蝶呤诱导的正常骨髓单个核细胞凋亡，减少坏死。     

椎旁巨大伴多发神经鞘瘤一例并文献复习

神经鞘瘤是常见的原发脊柱肿瘤之一,一般单发,多为良性,常呈“哑铃形”,发生在胸腰段且呈巨大“姜形”伴多发者较为罕见,国内鲜有报道。因其形状不规则,散在多发,位置较深,病情隐匿,因此手术方式的选择对全切肿瘤及保护周围组织具有重要的意义。2014年12月,我科收治椎旁巨大伴多发神经鞘瘤1例,现报告如下。