液相色谱串联质谱法检测人血清雌酮、雌二醇

目的建立同时测定人血清中雌酮(E1)及雌二醇(E2)水平的液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法,并初步应用于临床血清样品的雌激素检测。方法血清样品经乙酸乙酯提取,丹磺酰氯衍生化后进行LC-MS/MS分析。用Agilent ZORBAX SBC18色谱柱进行线性梯度洗脱,流动相为乙腈(0.05%甲酸)-水(0.05%甲酸),流速为0.3 m L/min。用多重反应离子监测(MRM)正离子模式对血清中的E1、E2进行质谱检测,并根据"生物样品定量分析方法验证指导原则(中国药典,2015)"对该方法的特异性、线性范围、灵敏度、精密度、提取回收率和稳定性等进行评价。用本法对172例健康成年女性血清标本进行E1、E2检测,用百分位数法计算不同月经周期E1、E2的浓度区间。结果 LC-MS/MS法可同时检测人血清中E1、E2的含量,在0.05~10 nmol/L范围内线性关系良好。该法的定量限为0.05 nmol/L,日内与日间不精密度均小于15%,稳定性良好。初步临床应用显示,用LC-MS/MS法计算所得的E1、E2浓度区间符合女性月经周期生理性变化规律。结论 LC-MS/MS法能有效分离并定量检测人血清中E1、E2的浓度水平,其线性范围广、灵敏度高、精密度好,有望作为临床血清雌激素检测的参考方法。     

消可宁对高糖状态下大鼠肾小球系膜细胞增殖的调控效应

背景:中药对早期糖尿病肾病有较好的防治作用,这一作用是基于中药有效成分的多样性而作用于糖尿病肾病不同靶点所引起的。目的:观察消可宁对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增生的影响,并探讨其可能的作用机制。设计:对照观察。单位:南京医科大学第一附属医院内分泌科。材料:实验于2003-07/2004-05在南京医科大学第一附属医院内分泌代谢研究中心细胞培养研究室完成。大鼠系膜细胞株HBZY-1:购自武汉大学中国典型培养物保藏中心。方法:系膜细胞按说明进行传代培养备用。①不同刺激浓度分组:高糖 消可宁组(消可宁分别取20.0,40.0,60.0,80.0,120.0,200.0g/L);正常糖对照组,细胞液中葡萄糖浓度为5.6mmol/L;高糖对照组,细胞液中葡萄糖浓度为30mmol/L,分别刺激72h进行观察。不同刺激时间分组:正常糖对照组,细胞液中葡萄糖浓度为5.6mmol/L;高糖对照组,细胞液中葡萄糖浓度为30mmol/L;高糖 消可宁组,细胞液中葡萄糖浓度为30mmol/L,消可宁浓度为60g/L;3组分别在刺激24,48,72h给予观察。②将配置好的细胞悬液放入96孔培养板,每孔加200μL。培养板放置体积分数为0.05CO2,37℃孵箱24h后,取出弃上清,加入各组含不同药物及浓度的细胞液,每孔200μL。将96孔板放入37℃含体积分数为0.05的CO2空气和100%湿度培养箱中孵育。不同刺激浓度组别于72h后分别向板孔中加20μL4-甲基偶氮四唑蓝(5g/L),不同刺激时间组别于24,48,72h后分别向板孔中加20μL4-甲基偶氮四唑蓝(5g/L),之后均在37℃培养箱中温育4h,置镜下观察4-甲基偶氮四唑蓝掺入细胞内,吸出上清,加入150μL二甲基亚砜使用甲醇溶解,用平板摇床摇匀振荡30s,于酶标仪492nm波长读数,并记录吸光度值。主要观察指标:不同培养时间及不同消可宁培养浓度下系膜细胞增殖情况(吸光度值)。结果:①不同刺激时间各组系膜细胞增殖的情况:(下转第201页)高糖对照组刺激24,48,72h系膜细胞吸光度值分别为0.685±0.010,0.750±0.087,0.659±0.018,高于正常糖对照组(0.586±0.054,0.598±0.040,0.527±0.047,P<0.05),高糖对照组及正常糖对照组葡萄糖刺激系膜细胞48h吸光度值高于24h(P<0.05),刺激72h吸光度值低于48h,(P<0.05)。高糖 消可宁组药物刺激72h后系膜细胞吸光度值为0.538±0.023,低于高糖对照组(P<0.05)。②不同浓度消可宁刺激系膜细胞增生情况:消可宁自浓度为60.0g/L起,可明显的阻止高糖对系膜细胞的过度刺激作用,并随着浓度的增加,这种作用逐渐增强,但过高的浓度(120.0g/L)则出现细胞脱落死亡,极高的药物浓度(200.0g/L)则不见存活的细胞。结论:高糖培养的系膜细胞在消可宁刺激72h后表现出较强的抑制系膜细胞增殖的作用,在一定范围内呈剂量依赖的方式,但过高的药物浓度又表现出很强的细胞毒性。     

俞募配穴法为主配合耳穴贴压治疗2型糖尿病35例临床观察

糖尿病（diabetes mellitths，DM）是一组以慢性高血糖为特征的代谢紊乱，其中2型糖尿病（T2DM）的发病率占糖尿病总数90％-95％。2001-2004，我们采用俞募配穴法为主配合耳穴贴压治疗T2DM35例，结果如下。     

聚酰胺柱层析法分离回心草总黄酮的研究

目的:确定聚酰胺柱层析法分离回心草总黄酮的条件.方法:对聚酰胺用量、乙醇洗脱浓度、洗脱速度等方面进行考察.结果:干法上样,聚酰胺用量以药材:聚酰胺=1:1为佳,以50%的乙醇为洗脱溶剂,2倍柱体积/h为最佳的洗脱速率.结论:聚酰胺可较好地用于回心草总黄酮的分离富集.     

针刺对2型糖尿病大鼠弓状核INSR基因表达的影响

[目的]探讨2型糖尿病(T2DM)大鼠是否存在中枢胰岛素抵抗(IR)以及针刺对T2DM大鼠弓状核胰岛素受体(INSR)基因表达的影响。[方法]给食源性肥胖大鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)造成T2DM模型,随机分为针刺组、优降糖组、模型组,设正常对照组。处理4周后,用罗氏活力型血糖仪测空腹血糖(FBS)、放免法测空腹胰岛素(FINS)、原位杂交测弓状核INSRmRNA表达。[结果]治疗后针刺组FBS、FINS显著降低,与模型组差异显著,接近正常组水平;优降糖组FBS显著降低,接近正常组水平(P>0.05),FINS低于模型组但无显著差异(P>0.05)。模型组弓状核INSR基因表达明显低于针刺组(P<0.01)和正常组(P<0.05),低于优降糖组但无显著差异(P>0.05);针刺组、优降糖组与正常组比较无显著差异(P均>0.05);优降糖组明显低于针刺组(P<0.05)。[结论]T2DM大鼠存在弓状核INSR基因表达低下,T2DM机体存在中枢IR,针刺和优降糖均可以改善T2DM大鼠弓状核INSR基因的表达,而针刺对改善T2DM大鼠弓状核INSR基因表达的作用优于优降糖。     

复方消可宁颗粒剂对高糖诱导的内皮细胞氧化应激的保护作用

目的：观察消可宁颗粒剂对高糖培养的人脐静脉血管内皮细胞（ECV-304）黄嘌呤氧化酶（XOD）、超氧化物岐化酶（SOD）及超氧阴离子（O2^-.）的影响。方法：体外培养ECV-304细胞,分空白对照组（Ⅰ）、高糖对照组（Ⅱ）和5个消可宁浓度递增组（Ⅲ～Ⅶ）。药物干预后,检测XOD、O2^-.和SOD的吸光度,计算出活力。结果：各消可宁组XOD含量较高糖对照组显著下降,SOD活力明显增加及O2^-.生成减少,两组比较有统计学差异（P〈0.05）。结论：消可宁可能通过降低内皮细胞XOD、减少O2^-.生成,增加SOD活力,从而抗御氧化应激,保护血管内皮。     

消可宁颗粒剂对高糖环境下内皮细胞的保护作用

目的 观察消可宁颗粒剂对高糖条件下培养的人脐静脉血管内皮细胞(ECV-304)的保护作用.方法 苏木精-伊红染色观察体外培养的不同消可宁浓度下的ECV-304细胞形态学改变和四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定ECV-304细胞增殖活性.结果 ①高糖对照组ECV-304细胞生长抑制,变小变圆,出现不同程度的空泡变性.各消可宁组ECV-304细胞出现不同程度的细胞恢复.②80 g/L和100 g/L消可宁组可减轻高糖对ECV-304细胞的生长抑制,与高糖对照组比较具有显著性差异(P＜0.05).结论 高糖引起ECV-304细胞损伤,对其生长增殖具有明显的抑制作用.消可宁可有效减轻高糖对ECV-304细胞的损伤和生长抑制,从而保护内皮细胞.     

康肾丸质量控制的研究

目的：建立康肾丸的质量控制方法。方法：采用薄层色谱法（TLC）对方中主要药材黄芪、虫草菌丝粉、防风分别进行定性鉴别；采用高效液相色谱法（HPLC）测定黄芪甲苷的含量。结果：定性鉴别方法重现性好，专属性强；含量测定的加样回收率为99．39％，RSD为0．59％。结论：本方法简单、易行、精密度高、重复性好，能够有效地控制康肾丸的质量。     

针刺配合耳穴压籽治疗单纯性肥胖病100例

肥胖病为当今常见病、多发病,糖尿病、冠心病、高血压为其常见并发症,严重地危害人们的身心健康,已引起国内外医学界的高度重视。笔者随刘志诚研究员从事针刺减肥临床多年,采用针刺配合耳穴压籽治疗肥胖病100例,获得了较好疗效,现总结如下。 1　临床资料 　　观察对象为南京中医药大学针灸减肥专家门诊及我院针灸减肥专科门诊,经临床检查诊断为单纯性肥胖病者。诊断标准参照《实用临床肥胖病学》［1］,以肥胖度((实际体重-标准体重)÷标准体重)×100%)>20%为肥胖,20%～30%为轻度肥胖,31%～50%为中度肥胖,>50%为重度肥胖。分型标准：胃肠实热型：形体肥胖,多食易饥,口舌干燥,怕热多汗,小便短赤,大便干结,舌红苔黄,脉数或滑;脾虚湿阻型：肥胖,纳少乏力,肢体困重,腹胀 药所能治乎［2］?此论对如何正确运用逍遥散,全面诊治肝郁很有临床指导意义。     

针刺对非胰岛素依赖性糖尿病大鼠脂肪细胞葡萄糖摄取的影响

目的 了解针刺对非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)大鼠胰岛素受体(INSR)后水平的作用。方法 ^3H、^14C双标记放免法和生物化学实验技术观察针刺对NIDDM大鼠空腹血糖(FBS)、空腹胰岛素(FINS)、C．肽(C-P)、胰岛素敏感性指数(IAI)以及脂肪细胞基础状态和低浓度胰岛素激活时葡萄糖摄取的影响。结果 NIDDM大鼠FBS、FINS、C．P水平显高于正常大鼠;而IAI、脂肪细胞基础状态和低浓度胰岛素激活时葡萄糖摄取明显低于正常大鼠水平。针刺后NIDDM大鼠FBS、FINS及C-P水平明显降低,而IAI、脂肪细胞基础状态和低浓度胰岛素激活时葡萄糖摄取明显回升。此外,脂肪细胞基础状态和低浓度胰岛素激活时葡萄糖摄取能力与FBS、FINS和C-P水平呈不同程度的负相关。结论 实验NIDDM大鼠胰岛素靶细胞葡萄糖摄取减少是其受体后缺陷而产生胰岛素抵抗(IR)的重要原因。针刺提高NIDDM大鼠靶细胞葡萄糖摄取能力可能是针刺治疗NIDDM,改善IR,从而调节异常内分泌代谢的一个重要环节。