电镜在肿瘤诊断研究中的应用进展

电镜在肿瘤诊断研究中的应用进展南京八一医院（南京市２１０００２）苏长青综述乐美兆审校近年来，诊断电镜在医学中的应用和发展，使人们普遍了解了一些对各种疾病诊断有价值的超微结构特征，特别是电镜技术与其它研究手段的结合，如免疫电镜、分子杂交电镜、电镜酶细胞...     

临床胃粘膜活检及胃癌手术标本纤维连结蛋白的定位观察

采用免疫组化及免疫电镜技术对临床胃粘膜活检及胃癌手术标本进行了纤维连结蛋白(FN)的定位观察。结果,FN见于胃粘膜上皮细胞和部分癌细胞内以及各种基底膜、间质中。肠化及异型增生上皮细胞FN染色增强,胃癌细胞和其基膜FN减少缺失且与癌细胞分化程度相关,胃癌间质FN丰富,尤其以癌浸润前缘明显。本文着重讨论了胃癌FN改变与癌细胞生物学特性的关系。     

CDKN2/p16基因在四种原发恶性肿瘤中存在状态的研究

目的 :研究CDKN2 /p16基因缺失和蛋白丢失在非小细胞肺癌、食管癌、胃癌、乳腺癌 4种原发恶性肿瘤中的作用。方法 :采用免疫组织化学法和多重PCR技术对 68例 (非小细胞肺癌 3 1例 ,食管癌 15例 ,胃癌 13例 ,乳腺癌 9例 )原发肿瘤组织标本进行CDKN2 /p16基因第一、第二外显子纯合缺失和p16蛋白表达丢失分析研究。结果 :第一或 (和 )第二外显子总缺失率为 13 .2 % ( 9/68) ,蛋白丢失率为 44% ( 3 0 /68) ,不同肿瘤组织标本的p16基因缺失率和蛋白丢失率差别很大。结论 :CDKN2 /p16基因是重要的多肿瘤抑制基因 ,在不同肿瘤组织中其失活方式不完全相同。     

特异性增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ表达mIFN-γ及体外肿瘤杀伤实验

目的:构建增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ和增殖缺陷型腺病毒AdEasy-mIFN-γ,比较两者在肿瘤细胞中表达mIFN-γ蛋白的能力以及CNHK200-mIFN-γ,ONYX-015及野生型腺病毒Ad5在正常及肿瘤细胞中的增殖力,进一步观察其抗瘤效果.方法:以病毒增殖试验检测病毒在细胞中的增殖能力;透射电镜观察CNHK200-mIFN-γ在Hep3B细胞中的增殖复制;检测病毒感染肿瘤细胞后mIFN-γ的表达;CPE实验观察增殖病毒对细胞的杀伤效应.结果:CNHK200-mIFN-γ和ONYX-015仅在肿瘤细胞中增殖,且前者增殖力较强.CNHK200-mIFN-γ在肿瘤细胞中表达mIFN-γ,且表达量与病毒增殖密切相关,而AdEasymIFN-γ在肿瘤细胞中的mIFN-γ表达几乎不能测到.ONYX-015与CNHK200-mIFN-γ对正常的细胞无杀伤性,但能有效地杀伤癌细胞.结论:外源基因mIFN-γ的插人没有改变增殖病毒在肿瘤细胞中选择性增殖的特性.增殖型腺病毒CNHK200-mIFN-γ具有良好的肿瘤选择性及增殖性,且可以有效表达mIFN-γ,并且有效杀伤癌细胞,显示其良好的临床应用前景.     

腺病毒介导p16基因的表达及其对肺癌细胞的周期阻滞作用

目的:以增殖缺陷型腺病毒载体介导p16基因感染人肺腺癌细胞系,观察并鉴定该基因在细胞中的表达及其对细胞周期和细胞凋亡的影响.方法:采用293细胞内同源重组的方法,制备重组腺病毒Ad5-p16,感染肺腺癌细胞SPC-A1;免疫组化方法鉴定P16蛋白的表达;台盼蓝染色计数活细胞数,绘制细胞生长曲线;流式细胞术(FCM)分析细胞周期及细胞凋亡的变化.结果:以M0I=10的重组增殖缺陷型腺病毒Ad5-p16感染SPC-A1细胞48 h后,P16蛋白表达的阳性细胞比率为71%;以MOI=100感染SPC-A1细胞后第2天,细胞开始出现生长抑制及细胞病变;FCM分析发现细胞在感染腺病毒后出现细胞周期阻滞和细胞凋亡.结论:以腺病毒为载体介导p16基因在SPC-A1细胞内表达,可发挥抑制细胞生长、诱发细胞凋亡的作用.本项基因治疗策略以直接调控细胞周期的抑癌基因为靶向治疗基因,为肺癌基因治疗提供了可靠的理论依据.     

肿瘤端粒酶靶向腺病毒载体的表达活性

目的　构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体 ,研究其介导目的基因在肿瘤细胞内的定向表达能力。方法　将端粒酶逆转录酶 (hTERT )启动子克隆入质粒 pDC3 12的多克隆位点构成外源基因表达盒 ,在基因表达盒上下游分别插入 1个绝缘子序列 ,构建针对端粒酶阳性肿瘤的特异性腺病毒载体pSG TPE ;采用Luciferase报告基因进行hTERT启动子的活性分析 ;以pSG TPE携带绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因 ,重组腺病毒AdTPE EGFP ,观察其介导EGFP在肿瘤细胞内的定向表达能力 ,并与CMV启动子控制的腺病毒AdCMV EGFP作对照。结果　hTERT启动子在正常细胞内几乎没有活性 ,而在肿瘤细胞内的活性与SV 40启动子相近。腺病毒AdTPE EGFP能介导EGFP在肿瘤细胞内定向而稳定表达 ,在正常细胞内不表达 ,而对照腺病毒AdCMV EGFP在肿瘤和正常细胞内均表达EGFP。结论　靶向端粒酶阳性肿瘤的腺病毒载体 pSG TPE ,不但提高了对基因表达调控的特异性 ,而且降低了对正常细胞毒性作用。绝缘子的应用隔断了外源基因表达盒和病毒基因表达调控序列之间的互相干扰 ,进一步提高目的基因的表达效率。该载体对肿瘤的靶向基因治疗具有重要的应用价值。     

食管癌或贲门癌nm23-H_1基因的表达

目的:本文的目的是探索nm23-H_1基因在食管癌贲门癌形成演化及转移方面的作用。方法:应用原位杂交技术检测129例食管癌、贲门癌组织中nm23-H_1基因表达情况。结果:人食管癌、贲门癌中nm23-H_1表达率高达58.1％(75/129),其中食管鳞癌为68.9％(42/61)、贲门腺癌为51.7％(31/60),食管小细胞癌为25％(2/8)。在鳞癌中表达率最高,小细胞食管癌中表达最低(P<0.05);伴有淋巴结转移者,阳性表达率为48.1(38/79),明显低于无淋巴结转移者,其阳性率为72％(36/50),差异显著(P<0.01);而且nm23-H_1表达与肿瘤分化程度高低及临床病理分期早晚呈显著正相关。结论:本组资料表明:nm23-H_1基因在食管癌、贲门癌的形成、演化及转移方面起重要作用,可望成为评价食管癌、贲门癌预后的一项新指标。     

内皮抑素基因腺病毒载体的构建及表达

目的：构建人内皮抑素（Human Endostatin，hE）基因的腺病毒载体，并研究其对胃癌细胞株SGC-7901、MKN-45及人脐静脉内皮细胞系ECV304生物学特性的影响。方法：采用Lipofectamine2000法将含有人内皮抑素基因的质粒pCA13-hE与pBGHE3共同转染293细胞；免疫荧光法及Western Blot检测hE的表达；用不同感染复数（Muhiplicity of infection，MOI）的重组人内皮抑素基因的腺病毒感染ECV304细胞，观察细胞生长。结果：成功构建了含hE基因的腺病毒载体；经含hE基因腺病毒载体感染的人SGC-7901胃癌细胞株、MKN-45胃癌细胞株均表达hE蛋白；表达的hE蛋白具有一定的生物学活性，可以抑制人静脉内皮细胞系ECV304的生长。结论：获得了有表达功能活性的Endostatin腺病毒载体，表达产物可抑制ECV304细胞的增殖，为肿瘤的抗血管基因治疗提供了必要条件。     

急性阑尾炎62例临床分析

目的：探讨急性阑尾炎手术治疗的临床疗效。方法对2010年1月—2012年12月住院治疗急性阑尾炎62例患者的临床资料进行回顾性分析。结果57例手术切除阑尾患者中,55例切口Ⅰ期愈合,2例因阑尾穿孔引起腹膜炎,切口延期愈合;5例保守治疗患者均痊愈。住院8 d ~18 d,平均10.5 d,无严重并发症发生。结论急性阑尾炎手术治疗应依据个体化原则,选择适合患者情况的治疗方法,是提高临床疗效的重要因素。     

慢性乙型肝炎发病机制的超微形态学基础研究

为探讨慢性乙型肝炎（乙肝）肝细胞损伤机制的超微形态学基础，对５０例乙肝患者肝穿刺进行电观察，发现淋巴细胞浸入肝组织后，可以与肝细胞发生接触、质膜融合和胞质沟通。肝细胞和淋巴细胞之间可见电子致密物，这可能是淋巴细胞产生的多种因子。枯否细胞质膜与淋巴细胞质膜融合，浆细胞质膜可与淋巴细胞质膜融合，淋巴细胞之间胞质可互相沟通，提示了免疫细胞间以及免疫细胞与肝细胞间的一些关系，为研究乙肝的细胞免疫反应机制提