2006年版CLSI/NCCLS有关抗生素敏感试验操作标准的更新要点

2006年1月美国临床和实验室标准化协会(the Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI,原名NCCLS)公布的第16版抗生素敏感试验操作标准(M100-S16)对15版进行了更新,以取代2005年及以前版本的内容。其主要变化源于2005年召开的抗生素药物敏感试验的专业会议。第16版的更新要点如下:(1)再次阐明奇异变形杆菌ESBLs检测的筛选与确认试验;(2)新增铜绿假单胞菌、不动杆菌属、洋葱伯克霍尔德菌、嗜麦芽窄食假单胞菌的纸片扩散和MIC解释标准的4个独立表格;(3)删除达托霉素(daptomycin)纸片扩散法的解释标准,修改了葡萄球菌属和链球菌属(除肺炎链球菌外)关于达托霉素琼脂稀释法药敏试验的建议,指出肠球菌属达托霉素琼脂稀释试验尚未被确认; (4)增加了万古霉素敏感性降低之金黄色葡萄菌的万古霉素BHI琼脂筛选试验;(5)修正了万古霉素对葡萄球菌属的     

检出3株携带新型基因盒组合形式Ⅰ类整合子的铜绿假单胞菌

目的 研究整合子介导铜绿假单胞菌耐药及多重耐药的机制。方法 整合子PCR法扩增整合子的可变区;联合限制性片段长度多态性分析（RFLP）和DNA测序技术分析整合子可变区的耐药基因。结果 98株南京地区铜绿假单胞菌中有35株（35．7％）整合子可变区扩增阳性,扩增片段大小1．0-4．0kb。共检出6种不同的可变区,含有编码对氨基糖苷类、β-内酰胺类和磺胺类抗菌药耐药的基因,其中有3例为新型基因盒组合形式,包括aadA6-orfD、aadB-blaP1和aadB-aac（6′）-Ⅱa-blaCARB-8,Genbank基因号分别为DQ 091179、DQ 141316和DQ 288251。结论 整合子参与了铜绿假单胞菌的耐药和多重耐药,主要携带氨基糖苷类耐药基因,首次报道了3种携带新型基因盒组合形式的Ⅰ类整合子。     

时间分辨免疫荧光定量检测乙型肝炎病毒前S1抗原的研究

目的 建立时间分辨免疫荧光定量分析乙型肝炎病毒PreS1抗原的方法.方法 以基因重组的带有PreS1抗原的乙型肝炎表面抗原作标准品,应用双抗体夹心免疫荧光分析方法,用抗PreS1单克隆抗体和抗-HBs分别作为固相抗体和铕标记抗体,若样本中含有PreS1抗原,则形成抗体-抗原-铕标记抗体复合物,加增强液解离铕离子,采用时间分辨荧光测量技术,对乙型肝炎病毒PreS1抗原进行检测.结果 自制TRFIA试剂检测PreS1抗原,单侧95%参考范围为0～0.26 ng/ml;自制TRFIA试剂与ELISA试剂对乙型肝炎患者血清标本中PreS1抗原的检测,TRFIA方法灵敏度高于ELISA方法,250份乙型肝炎患者血清标本中有3例标本ELISA方法结果为阴性,而用TRFIA方法可检测到PreS1抗原;对于弱阳性标本用ELISA方法检测不到时,TRFIA方法仍可检出.ELISA方法在一阳性标本1：4 096倍稀释时结果为阴性,而TRFIA方法在1：16 384倍稀释时仍为阳性;高、中、低三个浓度,批内和批间精密度测试变异系数（CV,%）均小于10%,平均回收率为103.3%;TRFIA方法检测PreS1抗原与HBsAg及HBeAg无交叉反应;50份我院正常体检者血清标本进行PreS1抗原的检测,结果均正常,特异性100%.结论 TRFIA方法定量检测PreS1抗原,灵敏度高,特异性强,能够准确及时敏感地反映患者体内乙型肝炎病毒的复制情况.     

体外培养人单个核细胞分泌IFN-γ水平的观察

目的对体外培养的人脐带血和外周血单个核细胞(MNC)以植物血凝素(PHA)刺激,观察培养上清中IFNγ含量变化。方法常规Ficoll离心法分离人MNC,接种24孔培养板,同时加入PHA,体外培养5d,计数不同培养时间的细胞总数;ELISA法测定不同培养时间上清中的IFNγ含量。结果经PHA刺激后,脐血MNC数量约扩增了12倍,单位细胞量所分泌的IFNγ是健康人血浆水平的30倍。而健康人外周血MNC数量约扩增了5倍。单位细胞量所分泌的IFNγ是健康人血浆水平的15倍。结论与人外周血MNC相比,人脐带血MNC对PHA刺激具有良好的反应性,经PHA刺激后可分泌更高水平的IFNγ,表明其在移植物抗白血病(GVL)效应中起一定作用。     

缺糖基转铁蛋白对酒精性肝病的诊断

目的 检测酒精性肝病(ALD)患者血清中的缺糖基转铁蛋白(CDT)与总TI的比值％CDT,并与GGT、MCV、ALT、AST等指标比较,评价其对ALD的诊断价值。方法 选择健康不饮酒对照组、非酒精性肝病的其他肝病组(NALD组)、ALD组(3组均为男性),分别检测％CDT、GGT、MCV、ALT、AST等指标,各指标在不同组间的比较用F检验;各项目之间的关系研究用直线相关,计算相关系数;同时绘制各指标的ROC曲线。结果 ALD组中的％CDT显著高于对照组、NAID组。％CDT诊断ALD的ROC曲线下面积为0．857,敏感度0．75,特异度0．88,而GGT这三者分别为0．751、0．75、0．76,MCV分别为0．669、0．30、0．78,ALT分别为0．512、0．25、0．72,AST分别为0．426、0．25、0．68。％CDT、与GGT不相关,但两者联合检测敏感度提高到90％。结论 对于ALD的诊断,％CDT、GGT、MCV均具有一定的诊断价值,尤其％CDT是一个很好的辅助诊断指标。％CDT与GGT联用可提高敏感度。     

缺糖基转铁蛋白——酒精性肝病的诊断指标

1 CDT的定义和结构1.1转铁蛋白(Tf)的结构Tf是人体内最重要的铁转运蛋白,主要在肝细胞中合成。Tf由3个亚结构域构成:一条单链多肽,2个独立的金属离子结合位点(1个位于N末端,1个位于C末端),和2个N一连接的复杂寡糖链(见图1)[2]。Tf不是一个均一的分子,而是一组结构相似的同功分子群。Tf在血清蛋白醋纤膜电泳中处于β球蛋白带,而在高分辨电泳方法[如等电聚焦电泳(IEF)]中可见许多Tf条带,其等电点(pI)范围从5.2到5.9,分子量从75.37到79.61KD[3]。造成Tf微异质性的结构基础主要有如下三个方面:①铁结合量的不同:1分子Tf最多可结合2个金属铁离子,Fe3+优先。Tf分子可以是不含铁(Feo-Tf即apo-Tf)、载有1个铁离子(FeIN-Tf和FeIC-Tf,N、C分别指N、C末端)或2个铁离子(Fe2-Tf)[2]。正常人Tf铁饱和度约30%,Fe0、Fe1和Fe2-Tf在血清中均可出现,Fe3+缺乏时,Fe0和Fe1-Tf增多;血色素沉着症(Fe3+过剩),Tf铁饱和度增加,血清中几乎均为Fe2-Tf。每结合一分子Fe3+,Tf的pI下降约0.2pH。②N-糖链的不同Tf...     

寻常痤疮致病菌的分离及其药敏结果

对１７３例寻常痤疮患者的痤疮内容物进行了需氧菌和厌氧菌的培养、分离和鉴定，并对所分离的致病菌用试管肉汤稀释法进行了ＭＩＣ的测定。共检出致病菌２１７株，其中痤疮丙酸杆菌７１株（占３２．７２％），颗粒丙酸杆菌３９株（１７．９７％），其余为葡萄球菌（１０７株，占４９．３１％）。药敏试验表明，全部分离株对美满霉素均较敏感（ＭＩＣｓ＜４．０ｍｇ／Ｌ），大部分离株对克林霉素敏感（ＭＩＣ５０＜０．５ｍｇ／Ｌ）；对于甲硝唑和替硝唑，这些致病菌均耐药（ＭＩＣｓ＞３２ｍｇ／Ｌ）。     

荧光定量聚合酶链反应检测肺癌患者血清循环DNA的临床应用

循环DNA是指存在于血液、滑膜液等体液中的细胞外DNA ,主要以DNA蛋白质复合物的形式存在 ,部分为游离DNA。其在体液中处于一种动态平衡过程 ,由细胞受外源刺激后主动分泌或者细胞损伤或死亡后释放产生[1]。其变化与临床多种疾病 ,尤其是肿瘤有关。本研究用建立的循环DNA提取和定量检测方法 ,对临床不同疾病的血清中循环DNA水平进行研究。一、材料和方法1.标本来源 :随机选择 2 0 0 2年 4月至 6月本院经病理确诊为肺癌患者的血清标本 40份 ,年龄 52～ 84岁 ;肝癌标本 40份 ,年龄 46～ 76岁 ;门诊收集健康体检者血清 3 0份 ,年龄 50～…     

MTT比色法用于肿瘤细胞体外药物敏感性试验的检测

由于抗肿瘤治疗的个体化原则 ,不同瘤株的反应条件并不完全一致 ,为了更好地为临床治疗平滑肌肉瘤提供参考依据 ,现以ＭＴＴ法对平滑肌肉瘤 (ＬＭＳ 971115 )细胞株进行药物敏感性试验 ,结果如下。1　材料和方法1 1　肿瘤细胞株[1] 　平滑肌肉瘤细胞株 (ＬＭＳ 971115 )可连续传代并符合平滑肌肉瘤细胞的一般特征。将细胞培养于含 10 %胎牛血清的ＲＰＭＩ 16 4 0完全培养液中 ,长满后 5 0ｍｇ/Ｌ胰蛋白酶消化传代。1 2　抗肿瘤药品与试剂　麦阿霉素 (ｐｈａｒｍｏｒｕｂｉｃｉｎ意大利米兰Ｐ＆ＵＳ .Ｐ .Ａ)、顺铂 (ＣＩＳ ,中国锦州制药一…     

循证医学及其在医学检验中的应用

循证医学 (ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｂａｓｅｄｍｅｄｉｃｉｎｅ ,ＥＢＭ )就是遵循证据的临床医学 ,其起源于 19世纪中叶的法国巴黎或更早时期。近 10年来 ,循证医学有了新的发展 ,成为包括循证医疗、循证诊断、循证决策、循证护理等近 10余个分支的医学学科[1] 。循证医学在医学领域中的迅速兴起 ,为以个人经验为主的临床医学注入了新的活力。“证据”是循证医学的基础 ,它主要来源于医学文献的研究报告 ,特别是采用随机对照实验 (ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄｔｒｉａｌ,ＲＣＴ)及设计合理、方法严谨的临床研究数据 ,针对临床医学…