缺氧诱导因子1α在非离子造影剂诱导的肾小管上皮细胞凋亡中的作用及其机制

目的：应用缺氧诱导因子1α（hypoxia—induciblefactor-1α，HIF-1d）诱导剂氯化钴上调HIF-1α水平，观察其对非离子造影剂碘必乐诱导的HK-2细胞凋亡的作用和机制。方法：体外培养的HK-2细胞，分为阴性对照组、碘必乐阳性对照组（296mgl／ml，12h）、不同剂量及作用时间的氯化钴预处理与碘必乐共同作用组（氯化钻浓度为5、25、50、100μmol／L，分别预处理0h、1h、2h、4h、6h、12h）。通过流式细胞仪测定细胞凋亡率，Hoechst33258染色观察细胞捌1’：的形态学变化，WesternBlot方法榆测HIF-1α、Caspase-3和凋亡相关蛋白Bcl-2的表达水平。结果：（1）流式细胞仪检测结果表明，50μmol／L氯化钴预处理4h、6h和12h点与阳性对照组相比细胞凋亡率明显降低（10．95％，8．65％，8．61％vs22．06％，P〈0．05），其中6h、12h点较4h点对细胞凋亡的抑制作用更强（P〈0．05），而6h和12h点之间差异无统计学意义（P〉0．05）。100μmol／L与50μmol／L氯化钴预处理相同时间（6h、12h）细胞凋亡率差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）Hoechst33258染色结果发现，与阳性对照组相比，50μmol／L氯化钴预处理6h和12h凋亡细胞明显减少，其它时间点与阳性对照组差异无统计学意义。（3）WesternBlot检测方法表明，50μmol／L氯化钻预处理1h以上即可引起HIF-1α表达增高，6h点表达最高（0．373±0．032），12h点较前下降（0．285±0．048）。与阳性对照组相比，50μmol／L氯化钴预处理4h、6h、12h，细胞内Caspase-3水平明显降低（P〈0．05，0．346±0．037，0．294±0．062，0．179±0．051vs0．501±0．039）。Bel-2表达水平明显增加（P〈0．05，0．275±0.052，0．324±0．046，0．337±0．039vs0．099±0．025）。结论：HIF-1α对非离子造影剂碘必乐诱导的人近端肾小管卜皮细胞凋亡有明显的抑制作用，其作用机制可能与下调Caspase-3和上调抗凋亡蛋白Bcl-2有关。     

先天性肾发育不良并发IgA肾病1例报告

1　病历报告患者 ,女 ,36岁。因蛋白尿 4年 ,双下肢水肿伴乏力 15ｄ ,于 2 0 0 0年 11年 1日收住我院肾内科。患者 4年前因头胀痛查尿常规蛋白 ( ) ,当时测血压不高 ,无其他不适感 ,静滴青霉素 10ｄ无好转 ,口服强的松 4 0ｍｇ/ｄ ,1个月后 ,尿蛋白转阴性 ,强的松逐渐减量至 10ｍｇ/ｄ ,2个月后停用 ,尿蛋白 ( )。3年前Ｂ超发现双肾不等大 (右肾小 ) ,2 4ｈ尿蛋白定量 0 .7ｇ ,多次尿培养无菌生长。入院前 15ｄ出现双下肢水肿伴乏力 ,尿蛋白 ( )。病后一直服用潘生丁、保肾康、肾炎康复片、复方丹参片等。既往有 2 0年睡眠遗尿史。查体 :Ｂ…     

伽玛刀治疗过程中肿瘤患者发生急性肾损伤的影响因素研究

立体定向伽玛射线治疗系统(stereotactic mdiosurgery)即伽玛刀是晚期肿瘤的重要治疗方法.有文献报道,2002年我国已有10余万人接受伽玛刀治疗,约占全世界治疗总数的55%[1].国内外有关伽玛刀治疗过程中发生肾损伤的文献较少,其确切发生率与发病机制尚不清楚,本研究旨在观察伽玛刀治疗过程与肿瘤患者发生急性肾损伤(AKI)的关系,并分析相关危险因素.     

雷帕霉素对人肾小管上皮-肌成纤维细胞转化的抑制作用

目的 探讨雷帕霉素(Rapamycin,RAPA)对体外培养的人肾小管上皮细胞发生上皮肌成纤维细胞转化(Epithelial-Myofibroblast Transition,EMT)的作用,以及该作用与上皮细胞中锌指蛋白(Snail)基因水平变化的关系.方法 体外培养的人近端肾小管上皮细胞(HKC),分为阴性对照组、转化生长因子β-1(TGF-β1)(1 μg/L)阳性对照组和TGF-β1 RAPA组.TGF-β1 RAPA组不同浓度的雷帕霉素(0.1 μg/L,1 μg/L,10 μg/L,100 μg/L)与TGF-β1(1 μg/L)共同作用,各组作用时间均为48 h.用间接免疫荧光双染、RT-PCR、Western Blot方法分别检测细胞平滑肌细胞肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)表达,同时用RT-PCR方法检测细胞Snail mRNA水平的变化.再选取最大作用浓度的雷帕霉素作用不同时间(12 h、24 h、48 h、72 h),用RT-PCR、Western Blot方法检测α-SMA表达水平变化.结果 间接免疫荧光双染、RT-PCR、Western Blot方法检测均表明,TGF-β1阳性作用组较阴性对照组HKC细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平显著增强(P＜0.05),而E-cadherin表达则几乎消失,Snail mRNA表达水平显著增强(P＜0.05).与阳性对照组相比,雷帕霉素(10 μg/L,100 μg/L)与TGF-β1共同作用组HKC细胞α-SMA mRNA及蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),而E-cadherin表达则有部分恢复,显著高于阳性对照组(P＜0.05),而Snail mRNA表达水平比阳性对照组显著降低(P＜0.05).雷帕霉素以浓度依赖方式抑制TGF-β1诱导的HKC细胞Snail mRNA表达.结论 应用体外培养的肾小管上皮细胞研究表明,雷帕霉素具有抑制肾小管上皮细胞EMT的作用.此作用可能与该药诱导的Snail表达下调有关.     

伽玛射线治疗肿瘤患者过程中血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白检测及其对急性肾损伤的诊断意义

目的 检测伽玛射线治疗肿瘤患者过程中血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的水平,并探讨其对急性肾损伤(AKI)的诊断意义.方法 收集解放军第四五五医院2007年5-11月接受体部伽玛射线治疗的100例肿瘤患者的临床资料.以伽玛射线治疗过程中血清肌酐上升>26.52 μmol/L或较基础值上升>50%为AKI的诊断标准.前瞻性观察伽玛射线治疗过程中发生AKI的肿瘤患者的血清NGAL水平变化.结果 100例肿瘤患者中,25例发生AKI.在造影12 h,AKI组的血清NGAL水平显著高于无AKI组(P<0.01),而两组间血清肌酐水平的差异无统计学意义(P>0.05).在造影48 h,AKI组间血清NGAL及肌酐水平均显著高于无AKI组(P值均<0.01).伽玛射线治疗7次后,两组间血清NGAL及肌酐水平的差异均无统计学意义(P值均>0.05).治疗结束时,两组间血清NGAL水平的差异无统计学意义(P>0.05),但AKI组的血清肌酐水平显著高于无AKI组(P<0.05).接受造影剂检查后12 h的血清NGAL水平与接受伽玛射线治疗过程中血清肌酐峰值水平(r=0.321)及血清肌酐峰值与基础值的差值(r=0.392)均呈正相关(P值均<0.01).以造影12 h时的血清NGAL水平诊断AKI发生的敏感度和特异度.其受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积(AUC)为0.776(95%CI为0.675～0.878,P<0.05),与完全随机情况下获得的曲线下面积(AUC)为0.5的差异有统计学意义(P<0.05).以造影48 h时的血清NGAL水平绘制ROC曲线的AUC为0.674(95%CI为0.558～0.789).根据造影剂检查后12 h时的血清NGAL水平绘制的ROC曲线以确定血清NGAL在诊断AKI的临界点,曲线上最靠右上方的点检验的敏感度和特异度均较高.结论 与血清肌酐相比,造影12 h时检测患者的血清NGAL水平,可以更早期地诊断肿瘤患者接受伽玛射线治疗过程中发生的AKI,其诊断的准确度较高,有较好的敏感度和特异度.     

低渗非离子造影剂对肾小管上皮细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨低渗非离子型造影剂碘必乐诱导体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）凋亡的作用及机制。 方法 体外培养的HK-2细胞,分为阴性对照组、不同剂量（1.16、4.63、18.5、74、296 gI/L）的碘必乐作用组（作用时间为6 h）。通过流式细胞仪、Hoechst 33258染色观察细胞凋亡的比例和形态学变化;Western印迹方法检测凋亡蛋白天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶3（caspase-3）的表达水平,并选取作用最强的剂量（296 gI/L）刺激2、4、6、12 h,观察caspase-3表达变化。选取不同剂量碘必乐作用1 h,与阴性对照组比较,观察细胞外信号调节激酶（ERK）和p38丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路磷酸化水平的变化,并观察不同剂量p38MAPK抑制剂SB203580对碘必乐诱导的caspase-3和Bcl-2表达的影响。 结果 流式细胞仪检测结果示74、296 gI/L碘必乐作用下细胞凋亡率较阴性对照显著升高（均P < 0.05）。Hoechst 33258染色结果示296 gI/L碘必乐可致明显的细胞凋亡形态学改变,凋亡细胞核呈致密浓染或核碎裂。Western印迹检测方法表明,碘必乐以剂量和时间依赖方式诱导细胞内caspase-3表达,以296 gI/L作用12 h表达最强;各剂量碘必乐作用下细胞内ERK1/2磷酸化水平与阴性对照组的差异均无统计学意义（均P > 0.05）,而一定剂量的碘必乐处理组细胞内p38MAPK磷酸化水平较阴性对照组显著升高（均P < 0.05）。应用p38MAPK特异性抑制剂（30 μmol/L）预处理2 h可以阻断细胞内p38MAPK信号通路的磷酸化,抑制碘必乐诱导的细胞内caspase-3表达并部分上调Bcl-2表达,与碘必乐阳性对照组的差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 低渗非离子型造影剂碘必乐以剂量和时间依赖方式诱导体外培养的HK-2细胞凋亡,其机制可能与上调caspase-3和下调抗凋亡蛋白Bcl-2有关,而p38MAPK信号通路的激活可能参与了该过程的调控。     

尿肾损伤分子-1检测对伽玛刀治疗过程中肿瘤患者发生急性肾损伤的早期诊断

目的 近年来接受立体定向伽玛射线治疗系统（伽玛刀）治疗的肿瘤患者日益增多,我们观察到部分患者在治疗过程中并发急性肾损伤（AKI）,而肿瘤患者并发AKI后病死率明显增加,因此如何早期诊断和早期干预是防治和逆转疾病进展的关键。本研究旨在观察伽玛刀治疗过程中发生AK1的肿瘤患者尿肾损伤分子-1（KIM-1）表达水平的变化及其对AKI的早期诊断价值。方法：收集我院2007年5月-2007年11月期间于伽玛刀中心入院接受体部伽玛刀治疗的100例患者的详细资料,以伽玛刀治疗过程中血清肌酐上升超过0．3mg／dl或较基础值上升〉50％为AKI的诊断标准。ELISA方法检测伽玛刀治疗过程中（造影12h、24h、48h、伽玛刀治疗7次、伽玛刀治疗结束）肿瘤患者尿KIM-1表达水平的变化。结果：所有肿瘤患者中,25例为AKI组,75例为非AKI组。在造影12h、24h、48h和伽玛刀治疗7次各时间点,AKI组尿KIM-1水平均显著高于无AKI组（P值均〈0．05）。在造影48h和治疗结束时。AKI组血肌酐水平显著高于无AKI组（P〈0．05）,而其他时间点差异无统计学意义（P〉0．05）。经尿肌酐校正后,在造影12h、24h、48h,AKI组患者尿KIM-1／尿肌酐表达水平显著高于非AKI组（P值均〈0．05）,而其他时间点差异无统计学意义（P〉0．05）。以造影12h尿KIM-1／尿肌酐表达水平诊断AKI的灵敏度和特异度绘制ROC曲线,其AUC为0．709（95％（21为0．585-0．832,P〈0．05）,与完全随机情况下获得的AUC=0．5的差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：肿瘤患者在伽玛刀治疗过程中,造影后12h监测尿KIM-1表达水平可以较血肌酐更早期预测急性肾损伤的发生,及时检测有利于早期干预和治疗。     

肾损伤分子-1与肾脏疾病

肾小管上皮细胞损伤是各种急、慢性肾脏病的共同特征，肾小管间质损害与肾脏病的严重程度与预后密切相关。缺血或中毒性损伤是肾小管上皮细胞损伤的最常见病因，损伤后的细胞发生一系列形态、功能的改变，损伤周围存活细胞迅速发生表型转化，也称为去分化（dedifferentiation），重新表达未成熟细胞表型，进入细胞周期，增殖形成新的上皮细胞，并沿裸基底膜伸展、移行，最终再分化为成熟细胞表型，重建正常的肾小管结构。损伤重的细胞可发生细胞凋亡甚至坏死，从肾小管基底膜脱落至肾小管管腔，阻塞肾小管。     

肾损伤分子1在低渗造影剂肾病模型大鼠肾组织的表达及缺氧诱导因子1α对其的影响

目的:观察低渗造影剂碘必乐诱导的造影剂肾病大鼠肾小管上皮细胞损伤情况和肾损伤分子1(kidney injury molecule-1,KIM-1)的表达以及缺氧诱导因子1α上调对其的影响.方法:清洁级雄性SD大鼠45只,分为对照组(CON组,n=15),造影剂肾病模型组(CM组,n=15)及氯化钴预处理组(Cocl_2+CM组,n=15).为建立造影剂肾病大鼠模型,应用碘必乐(3 gI/kg)前,依次尾静脉注射吲哚美辛(INDO,10 mg/kg)和左旋硝基精氨酸甲酯(L-NAME,10 mg/kg).分别于造模后第2h、12h、24h、48h、72h处死动物,并检测血肌酐值,HE染色评估肾小管损伤程度,免疫组化、Western Blot及Real time-PCR方法测定肾组织中KIM-1蛋白及mRNA表达水平.结果:(1)与对照组相比,CM组造模后第2h、12h血清肌酐值无显著性差异(P＞0.05),24h、48h、72h均显著升高(P值均＜0.01),显示造模成功,Cocl_2+CM组较同一时间点CM组血清肌酐值显著下降(P＜0.01);(2)HE染色可见CM组24h、48h、72h均出现不同程度的急性肾小管损伤,伴有上皮细胞刷状缘脱落、空泡变性、细胞脱落及再生,部分肾小管结构破坏,髓质区病变较皮质病变更严蕈;Cocl_2+CM组较同一时间点的CM组肾损伤评分显著降低(P＜0.05);(3)免疫组化、Western Blot和Real time-PCR结果表明,自造模后2h始,CM组较阴性对照组大鼠肾组织KIM-1蛋白及mRNA表达水平均显著增加(P＜0.05),而Cocl_2+CM组较同一时间点的CM组KIM-1表达水平显著减少(P＜0.05).结论:低渗造影剂碘必乐诱导的急性肾小管上皮细胞损伤大鼠肾组织KIM=1表达水平显著增加,较血肌酐更早的反映.肾损伤,上调肾组织HIF-1α表达可以减轻肾小管上皮细胞损伤,KIM-1表达亦相应降低.     

终末期糖尿病肾病血液透析和腹膜透析预后的比较研究

目的回顾性观察血液透析(hemodialysis,HD)和连续非卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)2种不同方式对终末期糖尿病肾病患者临床预后及生存率的影响。方法收集2007年1月～2012年5月在上海交通大学医学院附属新华医院接受HD(n=73)和CAPD(n=42)治疗的终末期糖尿病肾病患者的临床资料,排除透析时间<3月者,比较2组患者首次透析前及观察期终止时的各项临床指标、并发症、生存率、死因等情况。结果 HD与CAPD2组在首次透析年龄、血肌酐、尿素氮、肾小球滤过率、血红蛋白、血白蛋白、血尿酸等基线特征上无显著差异(P>0.05);在观察期终止时血红蛋白、血钙、血磷、全段甲状旁腺激素(iPTH)水平均无显著性差异(P>0.05),而HD组血浆白蛋白水平显著高于CAPD组(P<0.05),HD组血浆白蛋白水平较首次透析前显著性升高(P<0.05);HD组发生心功能不全、出血事件、脑梗死的比例较CAPD组显著升高,差异具有显著性(P<0.05);二者感染患病率相似,差异无显著性(P>0.05);HD与CAPD2组死亡率无显著性差异,主要死亡原因为心力衰竭、重度感染、出血和脑血管病,死因构成上2组比较无显著性意义(P>0.05);CAPD组1、3、5年生存率均显著高于HD组(P<0.05),但首次透析年龄≥65岁的CAPD组1、3、5、7年生存率均显著低于HD组(P<0.05)。结论本研究群体中,年龄<65岁的终末期糖尿病肾病患者CAPD5年内生存率优于HD,而年龄≥65岁的患者宜选择HD方式,其生存率优于CAPD。