异种煅烧骨与Ⅰ型胶原复合骨形态发生蛋白修复兔桡骨缺损过程中的组织学与生物力学变化特征

目的制备异种煅烧骨、Ⅰ型胶原和骨形态发生蛋白复合材料,观察在骨缺损修复过程种的组织学和生物力学变化.方法实验于2004-07/2005-04在第四军医大学唐都医院全军骨肿瘤研究所实施.①采用小牛骨粒制备牛煅烧骨;胃蛋白酶液消化新鲜牛腱制备Ⅰ型胶原;牛骨形态发生蛋白及Ⅰ型胶原制备活性复合颗粒实验材料.②取兔36只,建立桡骨中段15 mm骨缺损模型,随机分为4组,每组9只.空白对照组不植入材料;煅烧骨组植入单纯煅烧骨,将煅烧骨与骨水泥按11复合后制成长15 mm,直径4 mm柱件,至骨水泥面团期时填入骨缺损处;自体骨组植入自体骨;复合材料组植入活性复合颗粒,按11质量比将活性颗粒与骨水泥复合.植入物均不作固定,清洗,缝合,术后回笼喂养.③观察指标术后4,12,24周每组各取3只兔,分别通过X射线检查,组织学观察,生物力学测定和扫描电镜等手段观察新骨形成和材料降解情况.结果36只兔均进入结果分析.术后各组动物均无毒性反应.①各组兔骨缺损区X射线检查结果术后24周时复合材料组、自体骨组骨缺损已修复,而煅烧骨组,空白对照组未修复.②各组植入材料组织学观察结果术后24周时复合材料组、自体骨组骨缺损有大量新骨形成,而煅烧骨组、空白对照组未见新骨形成.③复合材料扫描电镜观察结果复合材料空隙率高,复合紧密.④各组植入材料生物力学测定术后24周复合材料组最大扭转强度和最大载荷接近自体骨组[(0.76±0.05)N·m,(162.6±4.1)N,(0.82±0.03)N·m,(172.2±6.1)N,P＞0.05],明显高于煅烧骨组[(0.26±0.01),(46.8±6.8)N,P＜0.05].结论①异种煅烧骨、Ⅰ型胶原和骨形态发生蛋白复合移植物具有较强的成骨作用及修复骨缺损能力.②复合材料组最大扭转强度和最大弯曲载荷接近自体骨组.③可望成为新型骨缺损修复材料.     

异体脱钙骨基质骨粒骨水泥骨形态发生蛋白复合材料成骨诱导活性

INTRODUCTIONTherecombinanthumanbonemorphogeneticprotein-2(rhBMP-2)hadbeenexpressedbytheeukaryoticcellsineightycentury犤1犦.TherhBMP-2combinedwiththedecalcifiedbonematrix(DBM)par-ticleswasimpregnatedwithbonecementtoproducethecompoundbonedefectrepairmaterialandtheboneinductivecapacityofitwasinvestigatedinourstudy.MATERIALSANDMETHODSDBMparticlesandthecompoundmaterialpreparationThe100-400μmgrainyDBMparticlesweremadeaccordingtotheUrist'smethods犤2犦.30mgDBMparticlescombinedwith…     

基因治疗成骨肉瘤的探索：人成骨肉瘤细胞CD147基因编码区克隆和反义RNA表达质粒构建

目的:构建CD147反义RNA表达质粒载体,探索治疗骨肉瘤侵袭和转移的新方法.方法:实验于2004-05在第四军医大学唐都医院骨肿瘤研究所实施,以人成骨肉瘤细胞系MG63的mRNA为模板,采用反转录聚合酶链反应方法得到人CD147的编码区cDNA,用DNA重组技术将人CD147编码区基因反向克隆到真核表达质粒PcDNA3.1( )中,构建成CD147反义RNA表达质粒PcDNAasCD147.用阳离子脂质体介导转染人成骨肉瘤细胞系MG63,经G418筛选后获得的克隆进行鉴定. 结果:CD147反义RNA表达质粒载体PcDNAasCD147经限制性酶切及部分序列分析证明基因插入正确.免疫组化SP法染色证实:转染细胞MG63/PcDNAasCD147,与亲本细胞相比,CD147的表达明显下降.结论:成功地从人成骨肉瘤细胞中克隆出CD147编码区基因,构建了CD147反义RNA表达质粒载体PcDNAas CD147,此实验结果为进一步研究CD147蛋白分子的生物学功能以及为成骨肉瘤的基因治疗研究奠定了基础.     

骨形态发生蛋白复合材料修复兔皮质骨缺损

目的 通过磷酸钙骨水泥（CPC）复合同种异体脱钙骨基质颗粒（DBM）及骨形态发生蛋白（bBMP)修复皮质骨缺损，探讨其对骨缺损的修复情况。方法 在兔前肢桡骨制作长1cm的骨缺损，填充CPC与复合bBMP异体同种的DBM的复合物，应用大体标本观察、X线摄片、组织学观测、印度墨汗灌注等方法观察其对骨缺损的修复情况，对侧以单纯的CPC做对照。结果 第2周开始复合材料组有血管长入，第4周X线片上显示可见、骨痂形成，12周后，复合材料与两端的骨质愈合良好，局部板层骨致密，哈夫氏系统排列整剂。结论 磷酸钙骨水泥复合bBMP及同种异体脱钙骨颗粒修复、皮质骨缺损有较好的效果。     

骨肉瘤HER2基因表达增加肺转移发生危险度

目的:研究骨肉瘤中HER2基因表达与骨肉瘤患者发生肺转移的关系。方法:对43例骨肉瘤患者的临床病理资料进行回顾性研究,应用HER2单克隆抗体对组织切片进行免疫组织化学染色,并将上述资料与随访患者发生肺转移情况进行统计学分析。结果:骨肉瘤患者HER2表达与患者发生肺转移相关(P<0.05),HER2高表达的骨肉瘤患者发生肺转移的可能性大。结论:HER2检测是判断骨肉瘤发生肺转移的一项有价值的指标;同时,HER2基因为骨肉瘤的生物治疗提供一种可能的靶点。     

IL-8在循环肿瘤细胞自我种植促进人骨肉瘤进展中的作用机制

目的:探讨IL-8在循环肿瘤细胞自我种植促进人骨肉瘤进展中的作用。方法:免疫组织化学SP法检测30例临床骨肉瘤及10例骨软骨瘤病例肿瘤组织中IL-8表达;建立骨肉瘤原位荷瘤裸鼠模型后,实验组尾静脉注射红色荧光蛋白标记的肿瘤细胞(RFP-F5M2),对照组注射PBS,分别于第2、4、8周后将处理组原位瘤体冰冻切片置于荧光显微镜下观察自我种植细胞荧光强度;对原位肿瘤进行组织块法原代培养,细胞免疫荧光半定量检测IL-8表达水平。结果:93.3%骨肉瘤组织中IL-8表达阳性,骨软骨瘤中IL-8表达均为阴性。冰冻切片显示,随着时间增加,循环肿瘤细胞自我种植现象明显增加,实验组中第2、4、8周原位灶原代培养细胞免疫荧光显示IL-8表达量逐渐增加,并较对照组具有统计学意义(P＜0.05)。结论:IL-8在循环肿瘤细胞自我种植促进人骨肉瘤细胞增殖及转移中发挥着重要作用,可为骨肉瘤患者早期诊断和治疗提供一个新的策略。     

肝细胞生长因子受体c-met在骨肉瘤中的表达及其临床意义

目的:探讨骨肉瘤组织中肝细胞生长因子受体c-met蛋白的表达情况,分析其临床意义及与预后的关系.方法:应用免疫组织化学方法检测行手术的35例骨肉瘤及13例骨样骨瘤患者标本肝细胞生长因子受体c-met的表达,并分析其与临床因素和预后的关系.结果:骨肉瘤组织中肝细胞生长因子受体c-met的阳性表达率为80%(28/35),而在骨样骨瘤中的表达率为7.7%(1/12),两者比较显著差异(P＜0.01);结合临床资料分析,其表达与患者性别、年龄、发病次数、肿瘤体积、病理分型无关(P>0.05),而与临床分期、有无转移有关(P＜0.05).结论:C-met可能在骨肉瘤细胞侵袭、转移的过程中起重要作用;肝细胞生长因子受体c-met可以作为骨肉瘤诊断和预测转移的指标.     

YM155对骨肉瘤细胞系F5M2增殖和凋亡的影响

目的:探讨YM155对人骨肉瘤细胞系F5M2的作用及其机制.方法:体外培养人骨肉瘤细胞系F5M2,不同浓度YM155处理人骨肉瘤细胞系F5M2,用MTT法检测其对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;实时荧光定量PCR检测survivin mRNA的表达;蛋白免疫印迹法检测survivin、caspase-3蛋白的表达.结果:YM155可抑制人骨肉瘤细胞F5M2的增殖,且呈剂量依赖性.随着YM155浓度的升高,人骨肉瘤细胞F5M2凋亡率明显增加,同时能够降低survivin在 mRNA水平和蛋白水平的表达,以及激活caspase-3.结论:YM155能够有效抑制人骨肉瘤细胞F5M2增殖,并诱导其凋亡,其可能机制为下调骨肉瘤细胞系F5M2 survivin的表达,继而激活caspase凋亡信号通路.     

骨形态发生蛋白复合材料修复狗股骨微波灭活骨缺损的实验研究

用脱钙骨基质颗粒、骨水泥和骨形态发生蛋白复合后的材料修复狗股骨微波诱导高温原位灭活骨缺损。显露狗右侧股骨中段 ,微波诱导高温 5 0℃、2 0min原位灭活 ,造成 2 5cm× 1 0cm骨缺损 ,植入复合材料 ,左侧单纯植入骨水泥做对照。分别于术后不同时间行X线照相、99mTc MDP骨显像、组织学观察和生物力学测定。结果发现 ,该复合材料极易塑形 ,能用于修复各种形状的骨缺损并能早期负重 ,其内部存在有利于新生血管长入的不规则间隙 ,最终与宿主骨达到“生物铆定”。     

壳聚糖对自制磷酸钙骨水泥性能的影响

目的:了解壳聚糖对自制磷酸钙骨水泥(CPC)物理性能、超微结构及生物相容性的影响. 方法:分别以50 g/L乳酸壳聚糖和1 mol/L磷酸氢二钠为液相制备CPC试样,通过防水试验、测定初步凝结时间、抗压强度;扫描电镜观察凝固体超微形态;大鼠肌肉植入及骨髓基质干细胞表面种植试验比较两者差异. 结果:复合壳聚糖的CPC在水中更稳定,混合后即刻投入生理盐水3 min内不散开;平均初步凝结时间8.38 min,对照组23.68 min;平均抗压强度6.52 MPa;对照组2.08 MPa. 扫描电镜发现凝固体表面为颗粒状及片状晶体,实验组晶体互相连接,孔隙较对照组少. 植入肌袋1 wk有轻微炎症反应,4 wk后反应减退,12 wk后实验组材料变软,对照组外形基本未变. 肌肉无坏死. 电镜下细胞可在水泥盘上贴附、生长, 实验组可见的细胞数较多. 结论:CPC-壳聚糖复合物在潮湿条件下更稳定,固化时间缩短,抗压强度提高,生物相容性更好.