应用环介导等温扩增技术检测弓形虫

目的 用环介导等温扩增（LAMP）技术检测弓形虫。 方法　 用酚-氯仿法提取弓形虫速殖子基因组 DNA,设计两对扩增弓形虫 B1基因的 LAMP 引物。以间日疟原虫、恶性疟原虫、卡氏肺孢子虫、日本血吸虫及小鼠白细胞作对照,进行LAMP反应,产物经 SYBR Green I显色及电泳后观察结果,绿色判为阳性,棕色判为阴性。将弓形虫速殖子经倍比稀释为（2～3）×106个/ml至（2～3）×10-1个/ml 等8个浓度,进行LAMP反应,验证该方法的敏感性。 结果 LAMP反应结果显示,弓形虫速殖子检测管经显色后呈绿色,对照组均呈棕色。弓形虫的LAMP产物经电泳后呈LAMP特征性梯状条带,对照组均无扩增产物。LAMP技术可检测到的弓形虫速殖子最低浓度为2～3个/ml。 结论 LAMP技术在弓形虫检测中显示出较好的特异性与敏感性。     

弓形虫RH株膜蛋白P30的原核表达与鉴定

目的在E.coli中表达弓形虫RH株膜蛋白P30。方法将P30基因定向克隆到pET28b,构建含目的基因的pET28b-P30重组质粒,转化E.coliBL21(DE3),接种含pET28b-P30的BL21(DE3)单菌落于LB培养基,1∶100稀释后用0.2mmol/L的IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定诱导表达产物。结果1构建了重组质粒pET28b-P30,2在E.coli中表达了一分子量约为30kDa的融合蛋白,经Westernblot鉴定正确。结论在E.coli中高效表达了弓形虫RH株膜蛋白P30,并以包涵体形式存在。     

表达序列标签法寻找日本血吸虫新基因

目的 运用表达序列标签(expressed sequence tag，EST)技术，从日本血吸虫成虫eDNA文库中筛选和鉴定日本血吸虫新基因，为寻找日本血吸虫新的候选疫苗奠定基础。方法 转化日本血吸虫成虫eDNA文库，随机挑取重组阳性克隆进行测序，获得Esr；用NCBI站点的GenBank对所获得的新基因序列进行同源性检索；利用BLASTP程序对同源性高的基因进行核苷酸和氨基酸水平的同源性比较。结果 发现xzw000008克隆的eDNA序列为日本血吸虫新基因并获得GenBank登录号。该eDNA序列与曼氏血吸虫polyubiquitin基因高度同源，核苷酸水平的同一性为87％；氨基酸水平的同一性为98％。结论 用EST寻找日本血吸虫新基因是一种可行的方法，所筛选到的日本血吸虫新基因长575bp，编码191个氨基酸，与曼氏血吸虫polyubiquifin基因高度同源，为进一步研究该基因的全序列及功能作准备。     

四种纯化弓形虫速殖子方法对虫体RNA影响的比较

目的比较纯化弓形虫速殖子的四种方法对虫体RNA的影响。方法以2.0×105个速殖子腹腔接种于昆明小鼠,72h后收集小鼠腹腔液,以胰蛋白酶消化法、微孔滤膜过滤法、G3滤斗和CF-11纤维素柱法纯化弓形虫速殖子,用AGPC法抽提总RNA,用甲醛变性胶电泳检测总RNA。结果胰蛋白酶消化法虫体回收率最大,但时间长,易造成RNA降解;微孔滤膜过滤法回收率低;G3滤斗纯度不高;CF-11纤维素柱法快速简单、纯度高,对RNA无影响。结论微孔滤膜过滤法、CF-11纤维素柱法对虫体RNA的影响小,较适用于cDNA文库构建时虫体的分离纯化。     

日本血吸虫pcDNA3．1．（＋）-SjPGK重组质粒的构建及鉴定

目的 构建日本血吸虫中国大陆株磷酸甘油酸激酶基因片段(SiPGK)的真核表达重组质粒，寻找新的预防日本血吸虫病的候选疫苗分子。方法 采用逆转录一聚合酶链反应(RT-PCR)技术，从日本血吸虫总RNA中体外扩增SPGK基因片段；克隆人pMD18-T载体中，然后挑取阳性克隆经双酶切分析、PCR鉴定；亚克隆人真核表达载体pcDNA3．1( )中，阳性克隆经鉴定后进行脱氧核糖核酸序列测定；运用Blast程序，将测序结果及其推导的编码氨基酸序列与NCBI数据库在核苷酸水平和氨基酸水平进行同源性比较。结果 RT-PCR特异性扩增出一条长约830bp大小的条带；重组质粒pMD18-T-SPGK和pcDNA3．1( )-SPGK经双酶切和以质粒为模板进行PCR扩增，均可获得一条与RT-PCR产物一致的DNA片段；脱氧核糖核酸序列测定和分析结果表明：SjPGK基因片段长为830bp，与SmPGK的核苷酸同源性为85％，分值为672；氨基酸同源性为94％，分值为473。结论 成功地构建pcDNA3．1( )-SiPGK重组质粒，为构建其核酸癌苗提供了条件。     

鼠巨噬细胞培养弓形虫RH株速殖子的实验研究

目的用鼠巨噬细胞培养弓形虫RH株速殖子及观察弓形虫速殖子入侵鼠巨噬细胞及在其内繁殖的过程.方法按培养传代细胞的常规方法培养鼠巨噬细胞,将鼠巨噬细胞接种到盖玻片上,用弓形虫RH株速殖子感染巨噬细胞,每隔1.5小时取出盖玻片,经吉氏染色、二甲苯透明后,镜下观察摄片.结果弓形虫速殖子大多在感染后0.5 ～1小时侵入巨噬细胞,10小时后,假包囊形成,20小时后,假包囊破裂,在室温条件下,速殖子可在巨噬细胞中存活20天.结论鼠巨噬细胞可代替小鼠用于弓形虫病的诊断及保种.     

手法复位配合竹塑夹板治疗伸直型桡骨远端骨折临床观察

伸直型桡骨远端骨折(Colles骨折)指的是桡骨远端3cm范围内的骨折,多发生于老年人,临床上多采用闭合复位配合外固定的方法进行治疗[1].笔者观察比较了竹塑夹板和石膏固定的治疗效果,现报道如下. 1 资料和方法 1.1 一般资料 选择本院近年收治的伸直型桡骨远端骨折患者88例,按就诊时间随机分为观察组和对照组,每组44例.     

两起麻疹局部暴发的流行病学调查

贵州省平塘县鼠场乡和塘边镇1999年2月28日～4月14日和1999年5月17日～7月3日,分别发生一起麻疹暴发,现将其流行情况报道如下.     

用包皮成纤维细胞培养弓形虫速殖子的研究

目的　建立用包皮成纤维细胞 (Humanforeskinfibroblasts ,HFF)培养弓形虫速殖子的方法。　方法　将包皮环切术切下的包皮在含青、链霉素的Hank’s液中充分洗涤后 ,用眼科剪子剪成 0 .5cm3 的组织小块 ,移入培养瓶中培养 ,待HFF细胞长满瓶底后 ,用胰酶消化并将其接种到培养皿中的盖玻片上培养 ,HFF长满盖玻片后 ,用弓形虫速殖子感染HFF ,镜下观察并于 1、2 .5、4、5 .5、10、2 3和 3 2h取出其中一皿中的盖玻片 ,经姬氏染色、二甲苯透明后 ,镜下观察速殖子生长情况。　结果　弓形虫速殖子大多在感染后 3h～ 5h侵入HFF ,3 2h左右 ,假包囊破裂 ,释放出虫体。　结论　成功建立了用HFF培养弓形虫的方法。     

大学生肠道线虫感染状况调查

为了解大学生肠道线虫感染现状以及探索其消长规律 ,我们对本院大学生常见肠道线虫感染进行连续 5年 (1995～ 1999年 )的调查 ,并与 1978年本院大学生蛔虫感染的调查资料进行比较 ,现报道如下。1　对象与方法1.1　对象　对本院 94～ 98年级普招本科生进行整群抽样调查 ,调查人数依次为 36 4人、495人、5 82人、6 73人、845人 ,共计2 95 9人 ,年龄 18～ 2 2岁 ,其中男生 2 0 77人 ,女生 882人。均于进校后第三学期学习肠道线虫知识后进行检查。1.2　方法　采用生理盐水直接涂片法和饱和盐水漂浮法 ,每份标本每种方法各查一片 ,只查肠道线虫。…