氯喹通过上调泛素-蛋白酶体相关分子表达抑制LPS活化巨噬细胞的实验研究

目的 观察氯喹(chloroquine,CQ)对脂多糖/内毒素(lipopolysaccharide/endotoxin,LPS)刺激的巨噬细胞中泛素-蛋白酶体系统(ubiquitin-proteasome system,UPS)相关分子A20、TRIM33和USP28表达的影响.方法 应用LPS刺激小鼠Raw264.7细胞,荧光定量PCR检测酸化抑制剂CQ对LPS诱导锌指蛋白A20、泛素连接酶TRIM33和泛素特异性蛋白酶USP28的mRNA表达,Western blot检测CQ对LPS诱导A20和TRIM33的蛋白表达.应用siRNA转染技术沉默A20,荧光定量PCR检测CQ对LPS诱导炎性细胞因子TNF的mRNA表达.结果 与LPS对照组比较,经CQ预处理的Raw264.7细胞中,A20、TRIM33、USP28的mRNA表达均显著上调[(3.197 ±0.013) vs (1.292 ±0.009),(1.627±0.113)vs(0.797±0.083),(1.387±0.144)vs(0.742±0.061),P＜0.05],A20和TRIM33的蛋白表达也同样上调.采用siRNA干扰A20基因表达,则CQ预处理组细胞中LPS诱导的TNF-α mRNA表达显著上调[(7.650 ±0.113) vs (4.145±0.120),P＜0.01].结论 CQ可显著上调LPS活化的巨噬细胞中泛素化相关分子A20、TRIM33和USP28的表达,而干扰A20基因表达可显著上调LPS活化Raw264.7细胞中TNF-α的mRNA表达,提示泛素-蛋白酶体系统及其相关分子参与CQ抑制LPS-TLR4信号通路的活化.     

以可溶性PBP2a为靶点筛选拮抗MRSA中药的实验研究

目的 以耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)临床分离株青霉素结合蛋白2a(PBP2a)的可溶性片段为靶点,利用生物传感器筛选能够拮抗MRSA的中药.方法 从临床上分离鉴定出MRSA,利用基因重组技术体外诱导表达PBP2a 25～668位氨基酸,并对表达的可溶性蛋白进行鉴定及生物学功能分析;然后将PBP2a包被于羧甲基葡聚糖样品池上,利用生物传感器筛选能够拮抗MRSA的中药.结果 成功诱导表达出可溶性目的 蛋白PBP2a,相对分子质量为74×103,且具有一定的转肽酶及β-内酰胺酶活性;利用生物传感器筛选出10种能够拮抗MRSA的中药,其中黄芩、黄连、夏枯草3种中药抗MRSA作用较强.结论 以MRSA临床分离株中可溶性PBP2a为靶点,利用生物传感器成功筛选出了能够拮抗MRSA的中药.     

以PBP2a为靶点应用生物传感器技术筛选拮抗MRSA中药

目的 应用生物传感器技术从传统抗炎中药中筛选具有拮抗细菌PBP2a活性的中药并进行活性物质含量的排序.方法 将可溶性PBP2a包被于生物传感器的生物素化样品池以建立靶点,测定115种中药水煎液去鞣质后与PBP2a的亲和力;选择亲和力较高的25种药物水提液和醇提液与定量PBP2a(50ng·ml-1)37℃混合孵育30min,再测定其与PBP2a的亲和力,以评价中药里活性物质的含量.结果 115种中药中,毛冬青、金荞麦、雷公藤等25种中药与PBP2a具有较高亲和力(大于100RU);黄药子、五倍子、半枝莲、山豆根、黄连、草果、核桃根等7种中药中与PBP2a特异性结合的活性物质含量较高.结论 应用生物传感器跟踪技术筛选具有结合PBP2a作用的中药具有可行性,筛选出的7种中药均含有非鞣质类能与PBP2a发生特异性结合作用的活性物质,该7种中药能不同程度抑制MRSA的生长.     

应用生物传感器技术筛选拮抗细菌肽聚糖的中药

目的 应用生物传感器技术从传统抗炎中药中筛选具有拮抗细菌肽聚糖(peptidoglycan, PGN)活性的中药并对其进行活性物质含量的排序.方法 将可溶性PGN包被于生物传感器的生物素化样品池以建立靶点,测定114种中药水提液去鞣质后与PGN的亲和力;选择亲和力较高的26种药物与定量PGN (50ng/ml) 37℃混合孵育30min,再测定其与PGN的亲和力,以评价药物水提液中活性物质的含量.结果 114种中药中,侧柏叶、黄连、牡丹皮等26种中药与PGN具有较高亲和力(＞100RU);侧柏叶、地骨皮、毛冬青等9种中药中与PGN特异性结合的活性物质含量较高.结论 生物传感器跟踪技术快速、高效、客观,应用其筛选具有结合PGN作用的中药具有可行性,筛选出的9种中药均含有非鞣质类能与PGN发生特异性结合作用的活性物质.     

育龄妇女生殖道支原体感染情况分析

支原体是一类缺乏细胞壁、形态上呈高度多形性,能通过除菌滤器,在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物[1].解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)均为泌尿生殖道主要致病支原体,可引起人类的非淋菌性尿道炎(UNG)、宫颈炎、盆腔炎、不孕症、习惯性流产,慢性前列腺炎等疾病.如何选择敏感件药物,避免耐药是临床用药的关键.为了解本院所在区域支原体的感染及耐药情况,更好地指导临床用药,就近期对本院门诊Uu和Mh的培养及耐药情况进行分析,现报道如下.     

指数富集的配体系统进化技术的发展及其在临床治疗中的应用

基于作为配基的寡核苷酸的三维立体结构,指数富集的配体系统进化（SELEX）技术能够筛选获得高效、特异结合靶分子的寡核苷酸适体。该配基由于其亲和力高、特异性强、免疫原性低、筛选周期短及适用范围广等特性,在临床诊断和疾病治疗中拥有多项优势,具有被研制成新型适体药物应用于临床的巨大潜力。本文从SELEX技术的发展、配基的修饰改造、临床治疗的优势、配基作为靶蛋白功能阻断剂和药物分子靶向载体进行的临床应用等几个方面,对寡核苷酸适体在临床疾病治疗中的应用进行综述。     

无创胎儿RhD分型的研究进展与临床应用

在妊娠期,Rh血型D抗原阳性胎儿的红细胞可从胎盘漏出进入RhD阴性的母体内,促使其免疫系统产生的 RhD抗体,并进入胎儿循环并导致胎儿和新生儿发生同种异体的免疫反应;在分娩时,大量的 RhD阳性胎儿红细胞可进入母体,诱发RhD阴性血的母体对Rh因子产生抗体,在以后的妊娠中,这些抗体再通过胎盘进入胎儿循环,攻击胎儿的 RhD阳性红细胞,引发了胎儿和新生儿溶血病（hemolytic disease of the fe‐tus and newborn ,HDFN）,主要表现为溶血性贫血引发的胎儿水肿、黄疸、核黄疸以及胎儿宫内死亡或新生儿死亡［1］。在孕晚期和分娩过程中,D抗原的风险最高,但D型的免疫反应也可以发生在早孕和中孕期［2］。胎儿和新生儿溶血性疾病的治疗取决于胎儿贫血的严重程度,而使用超声多普勒测定大脑中动脉的收缩期流速是确定胎儿贫血的一种安全、快速的方法。若病情较轻,胎儿可通过增加红细胞生成来代偿红细胞的破坏。若病情进一步加重则需要进行宫内输血治疗或剖宫产终止妊娠,胎儿出生后仍需要进行血液交换或完全性的输血治疗。因此,D型免疫反应是导致 HDFN这一严重威胁胎儿和新生儿生命的疾病的主要原因。本文将对目前国内外关于胎儿RhD的无创分型检测的研究进展及其在临床的应用作一综述。     

育龄妇女生殖道支原体感染情况分析

支原体是一类缺乏细胞壁、形态上呈高度多形性,能通过除菌滤器,在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物[1].解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)均为泌尿生殖道主要致病支原体,可引起人类的非淋菌性尿道炎(UNG)、宫颈炎、盆腔炎、不孕症、习惯性流产,慢性前列腺炎等疾病.如何选择敏感件药物,避免耐药是临床用药的关键.为了解本院所在区域支原体的感染及耐药情况,更好地指导临床用药,就近期对本院门诊Uu和Mh的培养及耐药情况进行分析,现报道如下.     

育龄妇女生殖道支原体感染情况分析

支原体是一类缺乏细胞壁、形态上呈高度多形性,能通过除菌滤器,在无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物[1].解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)均为泌尿生殖道主要致病支原体,可引起人类的非淋菌性尿道炎(UNG)、宫颈炎、盆腔炎、不孕症、习惯性流产,慢性前列腺炎等疾病.如何选择敏感件药物,避免耐药是临床用药的关键.为了解本院所在区域支原体的感染及耐药情况,更好地指导临床用药,就近期对本院门诊Uu和Mh的培养及耐药情况进行分析,现报道如下.