非特指性外周T细胞淋巴瘤中EBER、 LMP1的表达及与预后的关系

目的 探讨非特指性外周T细胞淋巴瘤(peripheral T-cell lymphoma,not otherwise specified,PTCL-NOS)中EBER、LMP1的表达及与患者预后的关系.方法 采用原位分子杂交(in situ hybridization,ISH)技术和免疫组化法分别检测81例PTCL-NOS及59例对照组[48例血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(angioimmunoblastic T-cell lymphoma,AITL)和11例结外NK/T细胞淋巴瘤(extranodal NK/T cell lymphoma,ENK/TCL)]中EBER和LMP1的表达,并分析EBER表达与PTCL-NOS患者临床病理特征及预后的关系.结果 (1)81例PTCL-NOS中,EBER阳性率为43.2％ (35/81);35例EBER阳性的PTCL-NOS病例中免疫组化得分1分+2分者共29例,占EBER阳性病例的82.9％(29/35),3分+4分者共6例,占17.1％ (6/35).EBER表达与PTCL-NOS患者年龄、性别、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)水平及临床分期均无明显相关性(P＞0.05).(2)81例PTCL-NOS组织中,LMP1蛋白阳性率为22.2％(18/81).LMP1蛋白表达与EBER表达具有一致性,但EBER阳性率明显高于LMP1 (P ＜0.05).(3)33例PTCL-NOS获得临床随访资料,随访时间1～63个月,中位生存期为23个月,总生存率为33.3％(11/33).Kaplan-Meier生存曲线分析显示,EBER阳性组的生存率明显低于EBER阴性组(P＜0.05).结论 EB病毒(EBV)感染可能是PTCL-NOS发生、发展中重要但非根本性的因素.EBER-ISH检测EBV感染具有较高的敏感性和特异性.EBV感染对PTCL-NOS患者的预后判断具有重要意义.     

t（6；11）染色体易位肾细胞癌中Alpha基因片段的克隆及启动子活性分析

  目的   构建包含不同Alpha基因片段的重组报告质粒和Alpha1-TFEB融合基因表达质粒，并评价Alpha基因启动子活性。   方法   利用软件对Alpha基因进行启动子预测；采用PCR技术扩增出5种不同长度的Alpha基因片段和正常TFEB基因启动子序列pTFEB，构建含Alpha基因片段和pTFEB的重组报告质粒；采用脂质体转染法将其分别转染至人胚肾293T细胞；通过荧光素酶活性检测确定Alpha基因的启动子活性。同时构建含Alpha1-TFEB融合基因表达质粒，转染293T细胞后，采用Western blot法检测转染前后TFEB蛋白的表达水平。   结果   成功构建含不同Alpha基因片段和pTFEB的重组报告质粒。与pGL3-Basic质粒转染组进行比较，Alpha1、Alpha2、Alpha3、Alpha4、Alpha5质粒转染组的荧光素酶活性显著增高（P＜0.01）；与正常TFEB基因启动子进行比较，Alpha1、Alpha2、Alpha5的荧光素酶活性明显增高（P＜0.01）；与pGL3-Enhancer质粒转染组进行比较，pGL3-Enhancer-Alpha1-TFEB表达质粒组TFEB蛋白的表达明显升高。   结论   t（6；11）染色体易位肾细胞癌中Alpha基因具有启动子活性，可促进TFEB表达，Alpha5片段最强活性区域位于643~693位碱基序列。      

miR-200a 在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的：探讨 miR-200a 在结直肠癌组织中的表达及其与结直肠癌临床病理特征之间的关系。方法收集结直肠癌患者手术标本70例,距癌灶边缘5 cm 以上切缘的正常黏膜作为对照。运用原位分子杂交技术检测结直肠癌组织及癌旁组织中 miR-200a 的表达水平,分析其与结直肠癌临床病理参数的关系。结果结直肠癌组织中 miR-200a 的阳性表达率明显高于癌旁正常黏膜（P <0.01）。miR-200a 表达与肿瘤分化程度呈正相关性（r =0.320,P <0.01）,在低分化结直肠癌中的表达低于高中分化结直肠癌的表达（ P <0.01）。但与患者年龄、性别、肿块大小、浸润深度、淋巴结转移及 TNM 分期等无显著相关性。结论 miR-200a 在结直肠癌组织中表达上调,并与肿瘤分化程度相关,提示 miR-200a可能在结直肠癌的发生、发展过程中发挥着重要作用。     

siRNA抑制syk基因对外周T细胞淋巴瘤细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨siRNA抑制脾酪氨酸激酶(syk)基因后对外周T细胞淋巴瘤细胞株HUT-78细胞增殖与凋亡的影响.方法 针对syk基因特异靶点设计3条siRNA(siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3),采用电穿孔法转染外周T细胞淋巴瘤细胞株HUT-78,同时设Mock组和siRNA-NC组,转染48 h后,分别用RT-PCR和Western blot技术检测syk mRNA和蛋白的表达水平,筛选出最有效的syk siRNA;syk siRNA转染HUT-78后分别用软琼脂克隆形成实验检测syk下调后HUT-78细胞的克隆形成能力,MTT法检测干扰24、48、72 h后细胞增殖情况,流式细胞术检测syk下调后HUT-78细胞的凋亡情况.结果 RT-PCR和Western blot结果显示,与Mock组和siRNA-NC组相比,3条siRNA均能有效降低HUT-78细胞中syk mRNA和蛋白的表达,其中syk siRNA-1抑制效果最明显.克隆形成实验显示,下调syk基因表达后HUT-78细胞的克隆形成能力与Mock组相比明显下降(P<0.05);MTT实验结果显示,下调syk基因表达后HUT-78细胞的增殖能力与Mock组相比显著下降(P<0.05);流式细胞术结果显示,下调syk基因表达后HUT-78细胞的凋亡比例明显高于Mock组(P<0.05).结论 siRNA下调syk基因表达后可抑制外周T细胞淋巴瘤细胞的增殖、克隆形成,促进凋亡,推测syk基因在外周T细胞淋巴瘤的发生发展中发挥重要作用,有可能成为外周T细胞淋巴瘤基因治疗的新靶点.     

非特殊型外周T细胞淋巴瘤的研究进展

非特殊型外周T细胞淋巴瘤(peripheral T-eell lymphoma,not otherwise specified,非特殊型PTCL)是一组发生于淋巴结或结外部位、具有明显异质性的成熟T细胞淋巴瘤,是指目前分类所定义的各种独特类型PrrcL(独立病种)以外的那些外周T细胞淋巴瘤.该病在西方国家发病率较低,而在我国及其他亚洲国家发病率较高.多数患者治疗反应差,预后不良.     

SEL 1L和Smad 4蛋白表达与食管癌生物学行为的相关性研究

目的探讨食管癌组织中的SEL 1L蛋白、Smad 4蛋白的表达与食管癌生物学行为的相关性。方法应用免疫组织化学S-P法检测90例手术切除的食管鳞状细胞癌,35例距癌灶边缘5cm以上切缘的正常黏膜,60例癌旁黏膜及20例内窥镜活检的食管鳞状上皮不典型增生组织中SEL 1L蛋白和Smad4蛋白的表达。结果(1)SEL 1L蛋白在食管鳞状细胞癌的表达阳性率为87.8%,在食管鳞状上皮不典型增生中的表达阳性率为90.0%,分别较食管正常黏膜(14.3%)和癌旁黏膜(13.3%)高(P<0.01)。SEL 1L蛋白表达与患者性别、年龄和肿瘤的位置、大小、分化程度、浸润深度、淋巴结转移及临床分期均无明显相关性(P>0.05)。(2)Smad 4蛋白在食管鳞状细胞癌的表达阳性率为48.9%,较食管正常黏膜(88.6%)、癌旁黏膜(83.3%)和食管鳞状上皮不典型增生(70.0%)低(P<0.01);临床分期ⅡB Ⅲ期和有淋巴结转移的食管鳞状细胞癌组织Smad 4蛋白的阳性率明显低于临床分期Ⅰ ⅡA期和无淋巴结转移的食管鳞状细胞癌组织(P<0.05);Smad 4蛋白的表达与肿瘤组织分化程度呈正相关(r=0.347,P<0.01),而与患者性别、年龄和肿瘤的位置、大小、浸润深度无明显相关性(P>0.05)。(3)食管鳞状细胞癌组织中SEL 1L蛋白和Smad 4蛋白的表达呈明显负相关(r=-0.314,P<0.01)。结论(1)SEL 1L蛋白过表达可能是食管鳞状细胞癌发生的早期表现,SEL 1L蛋白的检测可作为识别食管癌高风险患者的生物学标记物。(2)Smad 4蛋白的低表达在食管癌的发展及侵袭转移中具有重要作用。(3)SEL 1L蛋白和Smad 4蛋白在食管癌的发生发展过程中具有协同作用;联合检测食管癌中SEL 1L蛋白和Smad 4蛋白的表达,比单一检测一种蛋白对评估食管癌的发生、发展及预后更具有意义,也为临床治疗食管癌提供了一条新的思路。     

弥漫大B细胞淋巴瘤中SEL1L、BCL-2的表达及意义

目的探讨SEL1L蛋白、BCL-2蛋白在弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B cell lymphoma,DLBCL)组织和细胞株SUDHL-4、LY-10中的表达及意义。方法采用免疫组化法检测123例DLBCL组织中SEL1L、BCL-2蛋白的表达及60例反应性淋巴组织增生(reactive lymphoid hyperplasia,RLH)组织中SEL1L蛋白的表达。应用免疫细胞化学及Western blot法检测SEL1L蛋白在DLBCL细胞株SUDHL-4及LY-10中的表达。结果 SEL1L蛋白在DLBCL中的高表达率明显高于RLH(69.9%vs 25.0%,P0.05),其表达与各临床病理特征均无关。BCL-2蛋白在DLBCL中的阳性率为83.7%,与肿瘤原发位置、免疫表型及Ann Arbor分期有关(P0.05);SEL1L蛋白与BCL-2蛋白在DLBCL中的表达呈正相关(r=0.227,P0.05)。SEL1L蛋白在SUDHL-4及LY-10中均呈阳性。结论 SEL1L与BCL-2在DLBCL中均呈高表达,提示SEL1L在DLBCL的发生、发展中可能起重要作用,并可能与BCL-2表达产生协同作用。