肝功能失代偿期的乙型肝炎相关肝癌抗病毒治疗的生存分析

目的：探讨肝功能失代偿期的乙型肝炎病毒（HBV）相关肝细胞癌（HCC）患者在介入治疗、射频消融治疗及内科保肝等治疗方案的基础上联合抗HBV治疗的获益情况。方法收集整理近7年来于本院住院治疗的133例肝功能失代偿期的HBV相关HCC患者的病历资料,统计在不同治疗方案下患者的生存情况,运用统计学方法进行生存分析。结果在进行保肝治疗、射频治疗及介入治疗的同时,联合核苷（酸）类似物（NAs）抗病毒治疗的患者生存时间较单独应用上述几种治疗方法的患者生存时间延长：单纯内科保肝治疗的患者中位生存期为4个月,而在单纯内科保肝治疗基础上加用NAs抗病毒治疗者中位生存期为7个月;射频治疗者为8.5个月,射频治疗的同时联合NAs抗病毒者为12个月;介入治疗者中位生存期为7个月,介入治疗的同时加用NAs抗病毒治疗者为13个月。抗病毒治疗组与未抗病毒治疗组生存率差异有统计学意义（内科治疗与内科加抗病毒治疗方案比较,χ^2=7.35,P=0.007;射频治疗与射频加抗病毒治疗方案比较,χ^2=11.78,P=0.001;介入治疗与介入加抗病毒治疗方案比较,χ^2=16.43,P=0.000）。结论给予肝功能失代偿期的HBV相关HCC患者抗病毒治疗能够延长其生存期,可使患者获益。     

聚乙二醇化干扰素治疗慢性丙型肝炎的疗效观察

聚乙二醇化干扰素（PEG-IFNα-2a）是将干扰素α与PEG分子连接起来，从而延长其半衰期，每周给药1次即可维持有效的血药浓度，故又称长效IFN，在美国及欧洲用于治疗慢性丙型肝炎的临床试验均获得令人振奋的结果，持续应答率在40％以上。目前该药已在国内上市，这为丙型肝炎抗病毒治疗开辟了新的道路。     

胚胎中HBV mRNA的表达与父婴传播关系的研究

目的:通过检测HBV感染父亲体外受精胚胎中的HBV mRNA以明确HBV父婴传播的意义。方法:以慢性HBV感染父亲体外受精后遗弃胚胎为研究对象,用单细胞RT-PCR检测胚胎中的HBV mRNA。结果:父亲HBV血清标志物阳性者而母亲为HBV血清标志物阴性的9例18个废弃胚胎,在1个胚胎中检测到HBVmRNA,阳性率为1/18(5.6%),84个阴性对照胚胎中未检出特异性HBV mRNA。随访发现实验组和阴性对照组之间临床妊娠率分别为33.3%和44.0%,两者之间差异无明显意义(P>0.05);早期流产率分别为33.3%和9.1%,两者之间无明显统计学意义(P>0.05);胚胎中HBV mRNA信号阳性父亲的体外受精胚胎成功种植,但发生了早期流产;两组均未发生子代HBV感染。结论:HBV mRNA的阳性结果证实了HBV可以通过精子进入早期卵裂胚胎并在其中复制,可能是父婴传播的主要途径;而且HBV可能会干扰胚胎的发育,进一步造成流产等不良结果。     

基因表达谱芯片技术筛选NS5ATP2(615)蛋白反式调节基因

目的:对新基因NS5ATP2(615)转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能.方法:应用生物信息学(bioinformatics)技术,分析我们研究组通过抑制消减杂交(SSH)技术筛选得到的新基因NS5ATP2(615)的全长编码序列,构建NS5ATP2的真核表达载体pcDNA3.1(-)-NS5ATP2(615).应用基因表达谱芯片技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-NS5ATP2(615)和pcDNA3.1(-)空载体分别转染的HepG2细胞的mRNA的差异性表达进行检测.结果:确定基因NS5ATP2(615)由615nt组成,编码204aa的蛋白.基因表达谱芯片所检测的1 152条目的基因均为GenBank中登录的基因,NS5ATP2(615)表达质粒转染的细胞有40条差异表达基因,其中18条基因表达增强,22条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞信号转导、凋亡、肿瘤的发生密切相关.结论:基因表达谱芯片技术对于初步探索新基因的功能提供重要的资料.本实验结果为进一步阐明NS5ATP2(615)生物学功能及HCV NS5A的致病机制提供了理论依据.     

应用抑制性消减杂交技术克隆筛选丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白2反式激活基因

目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建新基因丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白2(HCVFBP2)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HCVFBP2反式激活相关基因.方法:以HCVFBP2表达质粒pcDNA3.1(-)-FBP2转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)转染的HepG2细胞为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制多聚酶链反应(PCR),将产物与pGEM-Teasy载体连接,构建cDNA消减文库,转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析.结果:成功构建人类新基因HCVFBP2反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.文库扩增后选取48个克隆,进行菌落PCR分析,均得200～1000bp插入片断.挑取30个克隆进行测序,通过生物信息学分析获得28个已知功能基因序列和2个未知功能基因.结论:应用SSH技术成功构建了HCVFBP2反式激活基因差异表达的cDNA消减文库.该文库的建立为阐明HCVFBP2生物学功能提供理论依据.     

聚乙二醇化干扰素α-2α治疗慢性丙型肝炎的疗效与安全性

聚乙二醇化干扰素α-2α(PEG—IFNα-2α，派罗欣，罗氏)，改变了干扰素(IFN)的药代动力学。其血清半衰期增加了大约10倍，同时增加了药物的药理学活性。一次注射可维持有效的抑制病毒的血药浓度长达7d，从而提高临床疗效。国外多项临床对照研究已经证实，PEG—IFNα-2α治疗慢性丙型肝炎的疗效明显优于IFNα-2α，能显著提高患者的持续病毒学应答。     

慢性HCV感染者IFN治疗前后血清HCV RNA水平

目的评价ＩＦＮ对丙肝患者病毒血症水平的作用．方法竞争性逆转录聚合酶链反应（ＣＲＴＰＣＲ）法定量检测１２例慢性ＨＣＶ感染者（男８例，女４例，ＨＣＶＲＮＡ阳性，ＡＬＴ异常持续６个月以上）ＩＦＮ治疗（ＩＦＮａ２ｂ３ＭＵ，肌注，３次／周，疗程３个月）前后（随访６个月）血清ＨＣＶＲＮＡ水平．结果慢性ＨＣＶ感染者１２例，３例呈完全反应，６例呈部分反应，另外３例无反应．９例有反应者中４例复发，有反应者治疗结束时血清ＨＣＶＲＮＡ水平明显下降（５１７±０４０８ｖｓ２０６±１５５，１０ｃｏｐｉｅｓ／５０μｌｓｅｒｕｍ，ｘ±ｓ，Ｐ＜００５），无反应者血清ＨＣＶＲＮＡ水平未见明显下降（５６７±０５８ｖｓ４５±０８７，ｘ±ｓ，Ｐ＞００５）．３例完全反应者仅１例血清ＨＣＶＲＮＡ持续阴性，３例无反应者２例血清ＨＣＶＲＮＡ水平略有下降．结论ＩＦＮ治疗丙肝有效，但ＩＦＮ不能有效清除病毒，仅抑制病毒复制，未见治疗前血清ＨＣＶＲＮＡ水平与复发与否有关．     

HCV不同编码区抗体在慢性丙型肝炎干扰素治疗中的变化

采用含ＨＣＶ不同编码区三种重组抗原（Ｃ２２，Ｃ３３ｃ，Ｃ１００－３）的重组免疫印迹试验，对２０例接受干扰素（ＩＦＮ）治疗的慢性丙型肝炎患者血清相应的三种抗体进行动态监测，同时观察ＨＣＶＲＮＡ及ＡＬＴ的变化，并进行对比分析。结果表明：ＨＣＶＲＮＡ持续清除与Ｃ３３ｃ及Ｃ１００－３抗体滴度的持续下降及转阴有关（Ｐ值分别＜０．０１及＜０．００５），与Ｃ２２抗体变化无关（Ｐ＞０．０５）；ＩＦＮ治疗后ＡＬＩ稳定正常与ＨＣＶ病毒血症清除之间无相关性（Ｐ＞０．０５）。提示动态观察抗－Ｃ１００－３及抗－Ｃ３３ｃ可预测ＣＨＣ病人ＩＦＮ治疗后病毒血症的变化，而ＩＦＮ治疗后ＡＬＴ转为稳定正常不一定预示病毒血症消失。     

应用抑制性消减杂交技术克隆丙型肝炎病毒 E2蛋白反式调节基因

目的应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建丙型肝炎病毒(HCV)E2蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HCVE2蛋白反式调节相关基因。方法以HCVE2表达质粒pcDNA3.1(-)_E2转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)为对照,制备转染后的细胞裂解液,从中提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性聚合酶链反应(PCR)扩增,将产物与T/A载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果成功构建人HCVE2蛋白反式调节基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后得到78个阳性克隆,进行菌落PCR分析,均得到100～1000bp插入片段。挑取38个含有插入片段的阳性克隆测序分析,获得35个已知基因序列和3个未知基因。通过生物信息学分析获得其全长序列,其功能正在研究中。结论应用SSH技术成功构建了HCVE2反式调节基因差异表达的cDNA消减文库。该文库的建立为进一步阐明HCVE2反式调节的靶基因及致慢性肝脏疾病发生的分子生物学机制提供理论依据。