“皮层-咽部-舌根”序贯针刺法治疗卒中后吞咽障碍临床研究

目的观察"皮层-咽部-舌根"序贯针刺法治疗卒中后吞咽障碍的临床疗效。方法将68例卒中后吞咽障碍患者随机分为2组,对照组33例予基础治疗,治疗组35例在对照组治疗基础上应用"皮层-咽部-舌根"序贯针刺法治疗。2组均连续治疗14 d。观察2组治疗前后洼田饮水试验评分变化,比较疗效。结果 2组治疗后洼田饮水试验评分均低于本组治疗前(P0.05,P0.01);2组治疗后洼田饮水试验评分比较差异有统计学意义(P0.05),治疗组低于对照组。2组愈显率、总有效率比较差异均有统计学意义(P0.05),治疗组疗效优于对照组。结论在基础治疗基础上应用"皮层-咽部-舌根"序贯针刺法治疗卒中后吞咽障碍,可提高洼田饮水试验评分,在愈显率、总有效率方面优于基础治疗,更好地改善卒中后吞咽障碍患者临床症状。     

miR⁃203a⁃3p通过靶向LASP1介导Akt/GSK⁃3β/Snail信号通路调控肝癌细胞生物学行为

目的 研究miR?203a?3p对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞生物学行为的影响及其相关分子机制。方法 将miR?203a?3p 模拟物（miR?203a?3p mimics）及阴性对照（miR?NC mimics）、LIM和SH3蛋白1（LIM and SH3 protein 1,LASP1）过表达质粒（pcDNA?LASP1）及阴性对照质粒（pcDNA?NC）分别转染至HepG2细胞。以qRT?PCR法检测细胞miR?203a?3p、LASP1 mRNA表达情况,CCK?8法和异体移植瘤实验分析细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力,Annexin V?FITC/PI法检测细胞凋亡,双荧光素酶报告基因检测miR?203a?3p与LASP1的靶向关系,Western blot法检测细胞中LASP1、蛋白激酶B（protein kinase B,Akt）、磷酸化Akt（phosphorylated Akt,p?Akt）、糖原合成酶激酶3β（glycogen synthase kinase?3β,GSK?3β）、磷酸化GSK?3β（phosphorylated GSK?3β,p?GSK?3β）、Snail表达情况。结果 与miR?NC组相比,miR?203a?3p组HepG2细胞增殖活性、迁移率、侵袭数目、LASP1 mRNA和蛋白表达量、p?Akt/Akt和p?GSK?3β/GSK?3β比值、Snail蛋白表达量均显著降低,小鼠移植瘤体积和质量显著减少,细胞凋亡率显著升高（均P<0.01）。Targetscan软件预测显示,miR?203a?3p与LASP1 存在靶向关系;与LASP1?Wt+miR?NC组比较,LASP1?Wt+miR?203a?3p组相对荧光素酶活性显著下降（P<0.001）。与miR?203a?3p+pcDNA?NC组比较,miR?203a?3p+LASP1组HepG2细胞增殖活性、迁移率、侵袭数目、p?Akt/Akt和p?GSK?3β/GSK?3β比值、Snail蛋白表达量均显著升高,小鼠移植瘤体积和质量显著增加,细胞凋亡率显著降低（均P<0.01）。结论 miR?203a?3p可能通过靶向抑制LASP1表达调控Akt/GSK?3β/Snail信号通路活性,从而调控HCC细胞生物学行为。     

嗅神经母细胞瘤术后螺旋断层调强放疗1例

嗅神经母细胞瘤（ olfactory neuroblastoma, ONB）,又称成感觉神经细胞瘤（ esthesioneuroblasto-ma,ENB）,是外胚层神经上皮源性肿瘤,起源于筛板或鼻腔嗅区粘膜的嗅神经细胞,临床少见。目前国内外还没有统一的治疗共识。现将我院收治的1例嗅神经母细胞瘤多次术后复发行螺旋断层调强放射治疗（ TOMO Therapy）的病例报告如下。     

淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡的影响及作用机制

【摘要】 目的 探讨淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法体外培养人肝癌Hep-G2细胞;采用MTT比色法检测淫羊藿素对人肝癌Hep-G2细胞增殖的影响;将Hep-G2细胞分为：空白对照（Control)组、低剂量（2.5 μM/L)组、中剂量（5 μM/L)组和高剂量（10 μM/L)组;蛋白质印记检测增殖、凋亡相关蛋白Ki-67、Bcl-2、Bax、caspase-3蛋白表达情况;克隆形成实验检测各组肝癌细胞增殖情况;流式细胞仪检测Hep-G2细胞凋亡情况。结果MTT结果显示淫羊藿素对肝癌Hep-G2细胞的IC50为5.38 μM/L;与空白对照组相比,低剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高（均P<0.05）;与低剂量组相比,中剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高（均P<0.05）;与中剂量组相比,高剂量组肝癌Hep-G2细胞Ki-67蛋白相对表达量、细胞克隆形成率、Bcl-2蛋白相对表达水平显著降低,细胞凋亡率、Bax蛋白相对表达量、Caspase-3蛋白相对表达量显著升高（均P<0.05）。结论淫羊藿素可以抑制肝癌Hep-G2细胞增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与下调Bcl-2蛋白和上调Bax蛋白的表达以及增强caspase-3的活性相关。     

miR-203a-3p 靶向GLS1 调控HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的机制研究

目的　探究微小核糖核酸（microRNAs, miRNA, miR）-203a-3p 对肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其潜在分子机制。方法　采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）检测HCC 细胞、人正常肝细胞以及临床HCC 组织中miR-203a-3p 相对表达;采用细胞增殖实验、细胞划痕实验和Transwell 实验分别检测miR-203a-3p 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;生物信息学网站预测miR-203a-3p 的潜在靶基因（GLS1）,双荧光素酶实验进行验证;探究HCC 细胞对谷氨酰胺的依赖性及抑制谷氨酰胺酶1(glutaminase 1,GLS1) 对HCC 细胞增殖、迁移、侵袭的影响;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 表达。结果　HCC 癌组织中miR-203a-3p（0.32±0.07）表达明显低于癌旁正常组织（1.02±0.03）,差异有统计学意义（t ＝ 41.105,P ＜ 0.001）;HCC 细胞HepG2（0.34±0.05）,HCCLM3（0.58±0.06）,Huh7（0.43±0.05）,Hep3B（0.29±0.04）中miR-203a-3p 相对表达水平明显低于人正常肝细胞LO2（1.01±0.02）中miR-203a-3p 表达,差异有统计学意义（F ＝ 119.080,P ＜ 0.001）。与Blank 组相比,miR-203a-3p 过表达组HCC细胞增殖（0.61±0.05 vs 1.24±0.06）, 迁移率（21.43%±2.01% vs 60.22%±3.14%） 及侵袭能力（76.54±13.56 vs221.06±16.54）均明显降低,差异有统计学意义（t ＝ 14.849,13.900,10.562,均P ＜ 0.001）。GLS1 是miR-203a-3p的靶基因,miR-203a-3p 靶向负调控GLS1 表达。HCC 细胞中GLS1 高表达呈现高酶活性,HCC 细胞对谷氨酰胺存在明显依赖性。GLS1 抑制组α-KG,谷氨酸水平均较Blank 组和siRNA-NC 组明显降低,差异有统计学意义（F ＝ 64.754,35.627,均P ＜ 0.001）。GLS1 抑制组细胞增殖（0.59±0.04）、迁移率（30.15%±1.02%）和侵袭能力（69.59±15.74）较Blank 组明显降低（1.29±0.07,59.67%±1.45%,202.14±13.52）,差异均有统计学意义（t ＝ 16.499,16.278,11.215,均P ＜ 0.001）。miR-203a-3p 过表达和GLS1 表达抑制明显抑制了Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白β-catenin,p-GSK-3β 和c-Myc 的表达,差异均有统计学意义（t ＝ 11.129 ～ 28.213,均P ＜ 0.001）。转染GLS1 可逆转miR-203a-3p 对HCC 细胞生物学行为及Wnt/β-catenin 信号通路关键蛋白表达的抑制作用。结论　HCC 中miR-203a-3p 显著低表达,其过表达能够抑制HCC 细胞的增殖、迁移和侵袭,可能与GLS1 调控谷氨酰胺代谢及miR-203a-3p 靶向GLS1调控Wnt/β-catenin 信号通路活性有关。     

序贯针法治疗卒中后吞咽障碍疗效观察

目的观察序贯针法治疗卒中后吞咽障碍的临床疗效。方法将110例卒中后吞咽障碍患者随机分为治疗组和对照组,每组55例。对照组采用常规药物治疗,治疗组在对照组治疗基础上采用"皮层-咽部-舌根"序贯针法治疗。治疗14 d后观察两组治疗前后洼田饮水试验评分变化,并比较两组临床疗效。结果两组治疗后洼田饮水试验评分与同组治疗前比较,差异均具有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。治疗组治疗后洼田饮水试验评分与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗组总有效率为89.1%,对照组为67.3%,两组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论序贯针法是一种治疗卒中后吞咽障碍的有效方法 。     

小鼠骨髓树突状细胞体外培养扩增与生物学特性研究

目的：建立一种简便高效的体外扩增培养小鼠骨髓树突状细胞（bonemarrowdendriticcell,BMDC）的方法,为树突状细胞（dendl’iticcells,DCs）的理论研究与临床应用提供实验工具。方法：联合应用重组小鼠粒细胞一巨噬细胞集落刺激网子（rmGM—CSF）、蘑纽小鼠白介素（rmlL-4）诱导培养小鼠骨髓单个核细胞,终末加入重组小鼠肿瘤坏死因子（rmTNF—α）,从形态学表型及功能方面进行检测。结果：培养3天后可见大量贴壁细胞及细胞集落形成,第5天,可见典型的树突状突起,光镜下动态观察树突状细胞DC的形态变化,流式细胞仪检测各组DC加入TNF—α前后表面标志物CD11C、CD86的衷达,加入TNF—α后CD86的阳性表达率明显增高,CD11C的阳性表达率变化无统计学意义。结论：此方法能在体外诱导和扩增出大量骨髓源性DC,为抗肿瘤疫苗研究及临床应用奠定基础。     

“皮层-咽部-舌根”序贯针刺法治疗脑出血后吞咽障碍临床分析与机理探讨

目的:观察"皮层-咽部-舌根"序贯针刺法治疗脑出血后吞咽障碍的临床效果。方法:将62例脑出血患者随机分为治疗组和对照组,治疗组接受"皮层-咽部-舌根"序贯针刺治疗,即分别在头皮、咽部及舌根进行针刺治疗,两组均接受基础治疗。每日治疗1次,每次30 min,连续治疗21天。应用洼田饮水试验进行评价。结果:在治疗21天后,洼田饮水分级评分对照组组内治疗前后比较P0.05,治疗组组内疗前疗后比较P0.01,治疗组与对照组组间疗后评分比较P0.05;在总有效率方面治疗组与对照组比较P0.05,愈显率方面P0.05,有统计学意义。结论:"皮层-咽部-舌根"序贯针刺法治疗较单纯药物治疗能够更好的改善脑出血后吞咽障碍。     

胰腺癌CTV范围的多排螺旋CT与病理学研究

目的 探索胰腺癌原发灶CT扫描与术后病理大小的关系及显微病灶浸润范围,以确定放疗靶区勾画中CTV范围。方法 对2013—2014年在解放军总医院和空军总医院收治的19例胰腺癌患者进行研究。15例被测量术前多排螺旋CT图像和术后大体标本上肿瘤横断面最大直径,19例被在显微镜下测量病理切片上肿瘤浸润范围和计算的实际浸润范围。配对t检验不同测量方法结果差异。结果 15例患者大体标本、CT测量的肿瘤最大直径分别为33.6、30.1 mm (P=0.000),二者差值的中位数、平均值分别为3.1 mm (1.2~8.0 mm)、(3.6±2.0) mm,95%CI为1.2~6.0 mm。19例患者最大实际浸润距离、最大测量距离分别为3.50、3.19 mm (P=0.000),二者差值的中位数和平均值分别为0.31 mm (0.15~0.50 mm)、(0.30±0.09) mm。原发灶边缘至浸润灶距离最大值为5.21 mm,中位数、平均值分别为3.34 mm (2.19~5.21 mm)、(3.50±0.88) mm,95%CI为2.19~5.06 mm。结论 增强CT低估了胰腺癌原发灶实际大小,在GTV基础上外扩5 mm作为CTV可能不够充分,建议再增加1~3 mm。