下调P55PIK基因表达对乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移能力的影响

目的通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制P55PIK基因表达,观察下调P55PIK对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外增殖和迁移能力的影响。方法利用脂质体将特异性针对P55PIK的siRNA瞬时转染P55PIK高表达细胞株MDA-MB-231,以转染无关序列siRNA(siRNA-NC)和未转染细胞作为对照。通过Western blot检测其对P55PIK表达的下调效果,MTT法和Transwell实验分别检测MDA-MB-231细胞的增殖和迁移能力。结果 siRNA-P55PIK明显下调MDA-MB-231细胞中P55PIK蛋白的表达;MTT检测显示下调P55PIK后,MDA-MB-231生长明显受到抑制;Transwell实验显示siRNA-P55PIK组穿膜细胞数为(5.2±1.3),显著低于siRNA-NC组(18.6±3.8)和空白对照组(18.4±4.3)(P<0.05)。结论应用RNAi抑制P55PIK基因的表达可抑制MDA-MB-231细胞体外增殖和迁移能力,为乳腺癌的靶向治疗提供了新思路。     

乳腺癌骨转移患者临床病理特征及预后影响因素分析：基于SEER数据库的回顾性研究

目的探讨乳腺癌骨转移患者的临床病理特征，并分析其预后情况及相关影响因素。 方法根据纳入及排除标准，利用美国国立癌症研究所监测、流行病学和结果(SEER)数据库检索并筛选1975年1月至2016年12月5 815例转移性乳腺癌患者资料进行回顾性分析，评估了患者临床病理特征、治疗方式及其预后。其中，乳腺癌骨转移组3 146例，乳腺癌非骨转移组2 669例。按照预后情况，将3 146例乳腺癌骨转移患者分为2个亚组：死亡组1 669例和存活组1 477例。利用χ²检验和Mann-Whitney U检验比较骨转移和非骨转移组患者临床病理特征的差异；用二元Logistic回归分析乳腺癌骨转移的影响因素；用Kaplan-Meier法进行生存分析，并用单因素log-rank检验分析乳腺癌骨转移患者中死亡组与存活组临床病理特征的差异；用多因素Cox比例风险回归模型筛选影响乳腺癌骨转移者生存情况的独立因素。 结果骨转移组和非骨转移组患者在T分期、N分期、组织学分级、人种、ER、PR、HER-2、肿瘤分子分型和预后方面比较，差异均有统计学意义(Z＝-5.71、-2.39、-13.87、χ²＝14.55、305.74、245.56、69.34、335.36、79.15，P均<0.050)，2组间年龄、性别和原发灶位置比较，差异均无统计学意义(χ²＝0.57、2.71、0.45，P均>0.050)。Logistic回归分析结果显示：ER阳性、PR阳性、肿瘤T分期高和N分期高为导致乳腺癌患者骨转移的危险因素(OR＝1.775，95%CI：1.258～2.505，P＝0.001；OR＝1.425，95%CI: 1.236～1.643，P<0.001；OR＝1.095，95%CI：1.043～1.149，P<0.001；OR＝1.396，95%CI: 1.246～1.564，P<0.001)，而组织学分级越高，发生骨转移的风险反而越小(OR＝0.815，95%CI：0.733～0.907，P<0.001)。骨转移组与非骨转移组患者的OS比较，差异均具有统计学意义(χ²＝133.53，P<0.001)。骨转移患者中，2个亚组(死亡组和存活组)患者在T分期、N分期、组织学分级、年龄、ER、PR、HER-2、肿瘤分子分型、原发灶手术、放射治疗和化疗方面比较，差异均有统计学意义(Z＝-7.75、-3.22、-8.14、χ²＝39.80、69.81、87.45、51.87、132.47、36.24、6.05、36.24，P均<0.050)。Cox比例风险回归模型多因素分析结果显示：年龄、T分期、N分期、PR、HER-2、肿瘤分子分型、组织学分级、化疗、放射治疗和原发灶手术是影响骨转移组患者预后的独立因素(HR＝1.349，95%CI: 1.195～1.523，P<0.001；HR＝1.151，95%CI: 1.101～1.203，P<0.001；HR＝ 1.077，95%CI: 1.033～1.123，P<0.001；HR＝ 0.715，95%CI: 0.626～0.817，P<0.001；HR＝0.695，95%CI: 0.627～0.770，P<0.001；HR＝1.349，95%CI: 1.260～1.414，P<0.001；HR＝1.371，95%CI: 1.261～1.489，P<0.001；HR＝0.626，95%CI：0.562～0.697，P<0.001；HR＝0.874，95%CI：0.791～0.966，P＝0.008；HR＝0.663，95%CI: 0.561～0.784，P<0.001)。 结论乳腺癌骨转移患者预后优于非骨转移患者，与年龄、T分期、N分期、PR、HER-2、肿瘤分子分型、组织学分级有关，治疗方面原发灶手术、放射治疗和化疗有助于改善骨转移患者的预后。     

Correlation of cytotoxic effect of transmembrane and secretory TNF-α to cell cycle

This study was aimed to examine the correlation of the cytotoxic effects induced by two types of TNF-α to cell cycle. Hoechst 33342 and PI were used to detect the morphological changes in the cell death induced by the two types of TNF-α. TdT and PI co-staining was performed to determine the phase of cell cycle of apoptotic cells. L929 cells in different phases of cell cycle were further synchronized and their sensitivity to the two types of TNF-α was observed. Our results showed that the apoptosis of HepG2 cells triggered by tm-TNF-α mainly occurred in G1 phase while in HL-60, Raji and K562 cell lines it mainly took place in S phase. The apoptosis of L929 cells induced by tm-TNF-α mainly occurred in S phase while the apoptosis induced by s-TNF-α mainly appeared in G1 phase. L929 cells were sensitive to s-TNF-α when synchronized in G1 phase (cytotoxicity 49.8%) while their sensi-tivity to tm-TNF-α was highest in S phase (45.7%) and G1/S phase (cytotoxicity 40.6%). It was concluded that tm-TNF-α-induced apoptosis of different target cells took place in different phases of cell cycle. The apoptosis of the specific cell line induced by the two types of TNF-α occurred in different phases of cell cycle. The sensitivity of the specific cell line to the two types of TNF-α was correlated with the phase of cell cycle.     

Ki-67阴性结直肠癌细胞的增殖和自我更新能力的研究

目的观察结直肠癌中Ki-67阴性(Ki-67-/low)细胞在肿瘤增殖及自我更新(self-renew)中的作用,探讨将Ki-67-/low作为分离肿瘤干细胞标记物的应用。方法通过将人结直肠癌标本消化成为单细胞,感染Ki-67启动子驱动GFP表达(pKi-67-GFP)的慢病毒后,注射至NOD/SCID小鼠背部建立pKi-67-GFP结直肠癌移植瘤模型;用流式细胞仪从移植瘤内分离出GFP+EpCAM+细胞(Ki-67+癌上皮细胞)和GFP-/lowEpCAM+细胞(Ki-67-/low癌上皮细胞),并采用免疫印迹验证Ki-67的表达;用流式细胞仪检测Ki-67-/low的细胞周期;采用PKH26标记细胞后,根据滞留细胞分析其在体内的增殖能力;采用荧光定量PCR(qPCR)研究Ki-67细胞中CD133、CD44和Lgr5等肿瘤干细胞相关基因的表达水平,并用成球实验研究Ki-67-/low结直肠癌细胞的自我更新能力。结果从新鲜人结直肠癌移植瘤中分离出GFP+EpCAM+细胞和GFP-/lowEpCAM+细胞,Western blot检测显示GFP+EpCAM+细胞高表达Ki-67,GFP-/lowEpCAM+细胞不表达Ki-67;细胞周期检测显示,(82.25±3.16)%的Ki-67-/low细胞在G0/G1期,(51.67±4.11)%的Ki-67+细胞在G0/G1期,体内PKH26标记滞留实验显示Ki-67-/low和Ki-67+细胞分别含(81.53±5.85)%和(4.57±1.05)%PKH26阳性细胞,差异有统计学意义(P<0.01),提示Ki-67-/low细胞主要是G0/G1期细胞,在体内处于慢增殖状态;荧光定量PCR证明Ki-67-/low细胞CD133、CD44和Lgr5的mRNA水平为Ki-67+细胞的(3.47±0.79)、(6.18±1.65)和(4.67±1.15)倍,差异有统计学意义(P<0.05),体外成球实验,Ki-67-/low及Ki-67+细胞的成球数量分别为(83.00±9.54)和(8.00±2.66)(P<0.01),提示Ki-67-/low细胞高表达CD133、CD44和Lgr5等肿瘤干细胞相关标记物,并具有显著的自我更新能力,富集肿瘤干细胞。结论 Ki-67阴性的结直肠癌细胞具有慢增殖的特点,较Ki-67阳性结直肠癌细胞具有更强的成球能力,在结直肠癌的自我更新中起重要作用,并有可能作为肿瘤干细胞的标记物。