胎鼠真皮成纤维细胞皮内注射对UV诱导小鼠皮肤光老化的改善作用

目的：探索体外培养胎鼠真皮成纤维细胞（fibroblasts,FBs）皮内注射对小鼠背部光老化皮肤的改善作用。方法：分离培养10只第18.5天（E18.5）BALB/c胎鼠皮肤,体外培养FBs两天;用CM-Dil荧光染料进行活细胞标记,以示FBs注射后在体内存活情况。取BALB/c雄性小鼠20只,随机分为：未处理组5只、模型组5只（紫外线照射）、空白组5只（紫外线照射+注射PBS）、治疗组5只（紫外线照射+注射FBs）,通过真表皮厚度及I型前胶原羧基端肽（PICP）的表达量评估胎鼠FBs对皮肤老化的改善作用。结果：胎鼠FBs形态多为梭型或不规则三角形,中央有卵圆形的细胞核,CM-Dil 细胞示踪试验显示培养细胞皮内注射后第3天活性最强。治疗组小鼠真皮厚度（243.659±6.214）μm较空白组（126.198±12.352）μm明显增厚,差异有统计学意义（P<0.05）。治疗组PICP浓度（120.357±10.260）ng/mL高于空白组（95.357±13.471）ng/mL,差异有统计学意义（P<0.05）。结论：胎鼠FBs皮内注射可改善紫外线诱导的小鼠皮肤老化。     

人真皮网状层成纤维细胞在瘢痕疙瘩皮损组织中的表达与分布

【摘要】 目的 探讨人真皮乳头层成纤维细胞（Fp）、网状层成纤维细胞（Fr）和肌成纤维细胞（MFB）在瘢痕疙瘩皮损组织中的表达与分布。方法 2019年5 - 12月在武汉大学人民医院皮肤科门诊确诊的15例瘢痕疙瘩患者,男8例,女7例,年龄20 ~ 50岁,取皮损组织,以15例年龄匹配的女性乳房整形术正常皮肤组织为对照。采用双重免疫荧光染色法检测成纤维细胞活化蛋白（FAP）、CD90和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）在瘢痕疙瘩和正常皮肤组织中的分布。从3例正常皮肤和3例瘢痕疙瘩组织中分离成纤维细胞原代培养,采用10 ng/ml 转化生长因子β1（TGF-β1）体外处理两组细胞0 ~ 48 h,观察细胞表型的变化,荧光定量RT-PCR和Western印迹检测FAP、CD90和α-SMA mRNA和蛋白表达。两组间差异比较采用t检验。结果 免疫荧光结果显示,正常皮肤组织中,FAP+/CD90-细胞主要分布在真皮浅层,FAP-/CD90+细胞集中在真皮深层,CD90+细胞几乎不表达α-SMA;瘢痕疙瘩组织深层可见大量FAP+和CD90+细胞,大量CD90+细胞同时表达α-SMA。双重免疫荧光染色显示,正常皮肤成纤维细胞几乎不表达α-SMA,瘢痕疙瘩成纤维细胞表达α-SMA;TGF-β1处理24 h时,正常成纤维细胞和瘢痕疙瘩成纤维细胞α-SMA+细胞荧光强度（21.058 ± 0.709、27.112 ± 0.097）均高于未处理组（11.312 ± 0.636、21.306 ± 0.464）,t值为22.430、13.370,P < 0.05。RT-PCR和Western印迹显示,TGF-β1处理48 h时,瘢痕疙瘩成纤维细胞FAP、CD90、α-SMA mRNA相对表达水平（92.610 ± 3.667、1.366 ± 0.105、3.240 ± 0.141）与蛋白表达水平（0.652 ± 0.073、1.046 ± 0.119、0.946 ± 0.117）均高于处理前（均P < 0.05）。结论 瘢痕疙瘩组织真皮深层的CD90+（Fr）细胞异常增生,提示针对真皮深层异常增殖活跃的FAP-/CD90+（Fr）细胞群进行定向干预可能提高瘢痕疙瘩治疗疗效。