A549细胞中过表达p16INK4A引起细胞衰老样表型的研究

目的 研究p16^INK4A对A549肺小细胞腺癌细胞系表型的影响。方法 用pcDNA3-p16质粒转染p16基因缺失的A549肺小细胞腺癌细胞系并通过Northern blot和Western blot鉴定p16基因的异位表达，通过流式细胞仪分析转染后细胞周期变化，利用Western blot和SA—β-pgal染色检测Rb蛋白磷酸化状态的改变和细胞表型变化。结果 证实了在A549中p16^INK4A能稳定表达。p16^INK4A的表达能使细胞产生明显的G1期阻滞并伴随着Rb蛋白磷酸化状态的改变，Rb蛋白主要以低磷酸化形式存在。发生生长阻滞的转染细胞表现出一系列细胞衰老样表型，如细胞体积变大，细胞形态呈明显的扁平状态，并且存在衰老相关半乳糖苷酶阳性染色。结论 在A549细胞中表达p16^INK4A能使细胞发生衰老样表型并提示p16^INK4A在细胞衰老中起重要作用。     

脑急性缺血期鞘糖脂糖基转移酶的变化

阻断ＳＤ大鼠大脑中部动脉（ｍｉｄｄｌｅｃｅｒｅｂｒａｌａｒｔｅｒｙ，ＭＣＡ）近端主干，制备了局灶性脑缺血模型，并观察到脑急性缺血期脑组织内鞘糖脂含量有十分显著的变化。为了解鞘糖脂变化的机制，作者利用同位素掺入法及简易的ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０（Ｆｉｎｅ）柱层析法分离同位素标记的产物与底物的方法，研究了脑急性缺血后１／２、６、７２ｈ时缺血侧及非缺血侧大脑半球几种鞘糖脂糖基转移酶的变化。结果显示，阻断大脑中部动脉（ＭＣＡＯ）后７２ｈ内，缺血侧半球ＣＭＰ－ＮｅｕＡｃ：ＣＭＨ唾液酸转移酶（ＳＴ３）活性进行性升高，而其他三种唾液酸转移酶（ＳＴ１、ＳＴ２、ＳＴ４）及ＵＤＰ－ＧａｌＮＡｃ：ＧＭ３Ｎ－乙酰氨基半乳糖转移酶均呈不同程度的下降；另两种糖基转移酶ＵＤＰ－Ｇａｌ：ＣＭＨ半乳糖转移酶和ＵＤＰ－Ｇａｌ：ＧＭ３半乳糖转移酶则先行升高，再分别于ＭＣＡＯ后１／２和６ｈ后开始回降。实验结果提示，脑急性缺血期脑组织鞘糖脂的变化与鞘糖脂糖基转移酶活性的改变有密切关系。